【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于葡萄膜炎分子诊断，具体涉及葡萄膜炎tcr标志物及其应用。
技术介绍
1、葡萄膜炎：又称色素膜炎，是虹膜、睫状体及脉络膜组织炎症的总称。本病是眼科常见疾病，可引起一些严重并发症和后遗症，是主要的致盲原因之一。按发病部位可分为前葡萄膜炎、后葡萄膜炎及中间葡萄膜炎；按临床表现可分为浆液性葡萄膜炎、纤维素性葡萄膜炎、化脓性葡萄膜炎及肉芽肿性葡萄膜炎。从疾病的发病机制着眼。葡萄膜是眼球内一个连续的血管膜，从“自身免疫性疾病”的发病机制上来说“前、中、后葡萄膜炎”是没有本质的区别的。另外，本专利技术不考虑由于病原体（如细菌病毒寄生虫结核等）感染导致的葡萄膜炎，即非感染性葡萄膜炎。因为病原体会额外导致其病原体特有的tcr改变。因此“化脓性及肉芽肿性等葡萄膜炎”不在此讨论范围。而“浆液性和纤维素性”反应的是葡萄膜炎的临床体征，并不能作为划分发病机制的依据。因此本案中的“葡萄膜炎”特指非感染性葡萄膜炎。
2、非感染性葡萄膜炎从本质上来说是一种自身免疫性疾病，目前公认的发病机制是在疾病状态下眼部自身抗原的暴露或者表达上调，导致自身免疫系统错误针对自身抗原产生攻击（如t细胞过度激活，自身抗体上调等），眼部葡萄膜的血管膜是免疫细胞聚集最多的部位，因此病变体征往往出现在该处。t细胞的激活是自身免疫性疾病的核心和起点，因此本案聚焦于t细胞的特异性改变可从根本上将葡萄膜炎与其他疾病区别开来。
3、t细胞抗原受体（tcellreceptor,tcr）：tcr为所有t细胞表面的特征性标志，也是t细胞表面的一种受体分子，是每一
4、抗原决定簇3（cdr3）：cdr3是tcr序列中最关键的一个区域，也是与抗原肽直接接触的部位。cdr3区域直接决定了tcr的抗原结合特异性。因此cdr3在tcr与抗原肽的结合中起到了至关重要的作用。准确特异地定量检测cdr3氨基酸/核酸序列克隆扩增程度，不但可直接反映出t细胞的功能及免疫应答状态，还可在细胞免疫治疗中做到预测疗效、个性化调整治疗方案及准确地判断预后，甚至运用于抗病毒治疗或骨髓移植后的免疫重建，以及自身免疫性疾病的检测。
5、随着疾病不断恶化，tcr谱会发生很大的变化。由于tcr的cdr3区域是与多肽/抗原直接接触结合的决定性区域，因此cdr3是tcr测序优先选择的研究目标区域。tcr的测序原料可来自于任何含有t细胞的组织，dna/rna均可。
6、本专利技术采集大量临床确诊为葡萄膜炎疾病的患者/健康对照者的外周血，提取其dna/rna，并通过高通量测序分别获得个体的tcr谱。通过对比分析得到在葡萄膜炎患者体内高度富集的疾病相关的特异性tcr的cdr3区的氨基酸/核酸序列。为辅助诊断葡萄膜炎提供了新的途径。
技术实现思路
1、本专利技术“葡萄膜炎特异性tcr序列集”的筛选主要通过采集已知葡萄膜炎患者/健康对照者的外周血，提取其dna/rna，并通过高通量测序，从而获得在葡萄膜炎患者体内高度富集的疾病相关的特异性tcr序列。
2、本专利技术的首要目的是首次提供葡萄膜炎tcr标志物，包括seqidno.1～10所示的tcr标志物cdr3区域的氨基酸序列中的至少一种。
3、本专利技术的次要目的是提供能表达葡萄膜炎tcr标志物cdr3区域氨基酸的核酸序列，包括seqidno.21～30所示的核酸序列。
4、本专利技术的第三个目的是提供检测所述的葡萄膜炎tcr标志物的试剂在制备葡萄膜炎诊断制剂中的应用。
5、进一步地，样本中属于所述的葡萄膜炎tcr标志物的所有cdr3序列在该样本内重复出现次数的总和用于判断葡萄膜炎风险。
6、本专利技术的第四个目的是提供葡萄膜炎检测试剂盒，包括检测seq id no .1～10所示的氨基酸和/或检测seq id no.21～30所示核苷酸的试剂。
7、本专利技术最重要的创新在于：由于葡萄膜炎病理过程中所释放的特异性抗原可激活其相对应的抗原特异性t细胞。抗原特异性t细胞具有固定的tcr序列表达，而通过检测外周血t细胞的tcr变化频谱可以对葡萄膜炎疾病的发生发展状态进行监测，为葡萄膜炎的个体化免疫治疗策略提供了明确的检测手段。葡萄膜炎的发生发展与t细胞免疫关系密切，同时也可以针对这些特异性的tcr进行治疗。
8、本专利技术提供的葡萄膜炎特异tcr序列在制备辅助诊断、临床治疗以及预后评估等方向均可提供非常有价值的信息，在应用中通过本专利技术所述的葡萄膜炎特异tcr去识别葡萄膜炎的共同抗原后，精准抑制抗原特异性t细胞活化增殖，从而达到治疗和诊断的效果。本专利技术旨在针对葡萄膜炎的个体化免疫检测，并有望开拓目前临床治疗葡萄膜炎的新靶点。
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1.一种分离的葡萄膜炎特异性TCR标志物组合物，其特征在于，其TCR的CDR3区域包括SEQ ID NO .1～10所示的氨基酸中的至少一种：
2.一种分离的葡萄膜炎特异性TCR标志物组合物，其特征在于，其为能编码权利要求1所述的TCR的CDR3区域的氨基酸的核酸分子，优选地，所述核酸分子包括至少一种SEQ IDNO .21～30所示的核酸序列：
3.一种分离的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含编码权利要求1所述的任一种TCR标志物的核酸序列或其互补序列。
4.一种组合物，其特征在于，其包含能够与权利要求2或3所述的核酸序列结合的siRNA，以及药学上可接受的载体。
5.权利要求4所述的组合物的用途，其特征在于，用于制备治疗葡萄膜炎和/或葡萄膜炎引起的眼部免疫损伤的药物。
6.检测权利要求1或2所述的葡萄膜炎TCR标志物的试剂在制备葡萄膜炎诊断制剂中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述试剂包括：检测权利要求1或2所述的TCR标志物基因频率的试剂，或定量检测权利要求1或2所述的TCR标志
8.一种诊断葡萄膜炎的试剂盒，其特征在于，包括定量检测权利要求1或2所述的葡萄膜炎TCR标志物的试剂，所述试剂包括探针、引物、酶。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述的引物序列如SEQ ID NO .31～50所示：
10.葡萄膜炎特异性TCR标志物的筛选方法，所述方法非用于疾病的诊断和治疗目的，其特征在于，包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种分离的葡萄膜炎特异性tcr标志物组合物，其特征在于，其tcr的cdr3区域包括seq id no .1～10所示的氨基酸中的至少一种：
2.一种分离的葡萄膜炎特异性tcr标志物组合物，其特征在于，其为能编码权利要求1所述的tcr的cdr3区域的氨基酸的核酸分子，优选地，所述核酸分子包括至少一种seq idno .21～30所示的核酸序列：
3.一种分离的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含编码权利要求1所述的任一种tcr标志物的核酸序列或其互补序列。
4.一种组合物，其特征在于，其包含能够与权利要求2或3所述的核酸序列结合的sirna，以及药学上可接受的载体。
5.权利要求4所述的组合物的用途，其特征在于，用于制备治疗葡萄膜炎和...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈慧慧，陈国纯，谭重庆，
申请(专利权)人：中南大学湘雅二医院，
类型：发明
国别省市：
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