【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于细胞工程和基因工程，特别涉及一种mir-202-3p调控cox1表达在猪卵巢颗粒细胞中的应用。
技术介绍
1、mir-202-3p作为let-7家族的成员，在动物中高度保守，据报道可以促进细胞凋亡和降低细胞增殖。mir-202-3p通过结合ccnd1促进人睾丸支持细胞的凋亡和抑制增殖。与鸡黄色卵泡相比，mir-202-3p在闭锁卵泡中表达水平较高，表明其在卵泡闭锁中具有潜在作用。在小鼠精原干细胞中，mir-202-3p阻断了细胞周期。
2、mirna作为一种重要的表观遗传调控因子，进化上保守，通过与靶mrna的3'utr碱基配对作用对mrna发挥抑制作用。作为前列腺素合成的限速酶之一，cox1在细胞增殖和凋亡以及滤泡血管生成和发育中发挥着至关重要的作用。
技术实现思路
1、为了克服现有技术的缺点与不足，本专利技术的首要目的在于提供一种mir-202-3p调控cox1表达在猪卵巢颗粒细胞中的应用。
2、本专利技术的再一目的在于提供抑制cox1表达的rna小干扰片段(sirna)。
3、本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
4、本专利技术提供一种mir-202-3p在调控cox1表达中的应用。
5、体外环境下，增加mir-202-3p抑制cox1表达，和/或减少mir-202-3p促进cox1表达；
6、本专利技术提供一种mir-202-3p在猪卵巢颗粒细胞中的应用，所述的应用具体是在猪卵巢颗粒细胞
7、体外环境下，增加mir-202-3p抑制猪卵巢颗粒细胞的增殖，和/或减少mir-202-3p促进猪卵巢颗粒细胞的增殖；
8、体外环境下，减少mir-202-3p抑制猪卵巢颗粒细胞的凋亡；
9、体外环境下，增加mir-202-3p抑制猪卵巢颗粒细胞中e2分泌，和/或减少mir-202-3p促进猪卵巢颗粒细胞中e2分泌。
10、本专利技术提供一种cox1在猪卵巢颗粒细胞中的应用，所述的应用具体是在猪卵巢颗粒细胞的增殖、凋亡和/或e2分泌中的应用；其中，应用环境为体外环境；
11、体外环境下，减少cox1抑制猪卵巢颗粒细胞的增殖；
12、体外环境下，减少cox1促进猪卵巢颗粒细胞的凋亡；
13、体外环境下，减少cox1抑制猪卵巢颗粒细胞中e2分泌。
14、本专利技术提供一种mir-202-3p调控cox1表达在猪卵巢颗粒细胞中的应用，所述的应用具体是在猪卵巢颗粒细胞的增殖、凋亡和/或e2分泌中的应用；其中，应用环境为体外环境；
15、体外环境下，通过增加mir-202-3p来抑制cox1表达，能抑制猪卵巢颗粒细胞的增殖；和/或通过减少mir-202-3p来促进cox1表达，能促进猪卵巢颗粒细胞的增殖；
16、体外环境下，通过减少mir-202-3p来促进cox1表达，能抑制猪卵巢颗粒细胞的凋亡；
17、体外环境下，通过增加mir-202-3p来抑制cox1表达，能抑制猪卵巢颗粒细胞中e2分泌；和/或通过减少mir-202-3p来促进cox1表达，能促进猪卵巢颗粒细胞中e2分泌。
18、进一步的，
19、由减少mir-202-3p引起的促进猪卵巢颗粒细胞增殖的功能表型能在猪卵巢颗粒细胞中补充cox1-sirna后恢复；
20、由减少mir-202-3p引起的抑制猪卵巢颗粒细胞凋亡的功能表型能在猪卵巢颗粒细胞中补充cox1-sirna后恢复；
21、由减少mir-202-3p引起的促进猪卵巢颗粒细胞中e2分泌的功能表型能在猪卵巢颗粒细胞中补充cox1-sirna后恢复。
22、所述cox1-sirna为cox1-sirna-1、cox1-sirna-2或cox1-sirna-3；
23、cox1-sirna-1：5′-gauuauccugacgcauaca-3′；
24、cox1-sirna-2：5′-gcgaugaucaaaucuauaaug-3′；
25、cox1-sirna-3：5′-cgggcauuguacuagcuaauu-3′；
26、所述的增加mir-202-3p通过如下方法实现：将mir-202-3p模拟物mir-202-3pmimic转染到猪卵巢颗粒细胞中。
27、所述的减少mir-202-3p通过如下方法实现：将mir-202-3p抑制剂mir-202-3pinhibitor转染到猪卵巢颗粒细胞中。
28、所述的减少cox1为将抑制cox1表达的sirna转染到猪卵巢颗粒细胞的方式实现。
29、本专利技术提供抑制cox1表达的sirna，序列如下：
30、cox1-sirna-1：5′-gauuauccugacgcauaca-3′；
31、cox1-sirna-2：5′-gcgaugaucaaaucuauaaug-3′；
32、cox1-sirna-3：5′-cgggcauuguacuagcuaauu-3′；
33、其中，mir-202-3p的相关序列如下：
34、mir-202-3p mimic：5′-agcuacauugucugcuggguuu-3′；
35、mir-202-3p inhibitor：5′-aaacccagcagacaauguagcu-3′；
36、本专利技术的验证结果如下：
37、1、合成mir-202-3p的模拟物/抑制剂(mir-202-3p mimic/mir-202-3pinhibitor)，并检测其超表达或干扰效率。由图1a结果可知，qrt-pcr结果显示，mir-202-3p mimic显著促进mir-202-3p的表达，mir-202-3p inhibitor显著抑制mir-202-3p的表达，均可用于后续实验。我们分别将cox1 3’utr-wt和cox13’utr-mut载体与mir-202-3pmimic/mimic nc共转染进卵巢颗粒细胞，双荧光素酶活性分析结果显示mir-202-3p对荧光活性的抑制作用可通过突变cox1与mir-202-3p的结合位点恢复(图1b)。同时，由图1c结果可知，mir-202-3pmimic显著降低颗粒细胞中cox1的mrna水平，而mir-202-3p inhibitor显著增加颗粒细胞中cox1的mrna水平。
38、2、合成3对干扰cox1的小片段/对照(cox1-sirna/sirna-nc)，筛选并检测其干扰效率。由图2a结果可知，将基因干扰小片段转染到卵巢颗粒细胞中，通过qrt-pcr手段，最终筛选干扰效果较好的cox1-sirna-1小片段进行后续实验。
39、cox1-sirna-1：5′-gauuauccugac本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.miR-202-3p在猪卵巢颗粒细胞中的应用，其特征在于：所述的应用具体是在调控猪卵巢颗粒细胞的增殖、凋亡和/或E2分泌中的应用；
2.miR-202-3p在调控COX1表达中的应用，其特征在于：体外环境下，增加miR-202-3p抑制COX1表达，和/或减少miR-202-3p促进COX1表达。
3.COX1在猪卵巢颗粒细胞中的应用，其特征在于：所述的应用具体是在调控猪卵巢颗粒细胞的增殖、凋亡和/或E2分泌中的应用；
4.miR-202-3p调控COX1表达在猪卵巢颗粒细胞中的应用，其特征在于：所述的应用具体是在猪卵巢颗粒细胞的增殖、凋亡和/或E2分泌中的应用；
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：
6.根据权利要求1、2、4或5所述的应用，其特征在于：
7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：
8.抑制COX1表达的siRNA，其特征在于：
【技术特征摘要】
1.mir-202-3p在猪卵巢颗粒细胞中的应用，其特征在于：所述的应用具体是在调控猪卵巢颗粒细胞的增殖、凋亡和/或e2分泌中的应用；
2.mir-202-3p在调控cox1表达中的应用，其特征在于：体外环境下，增加mir-202-3p抑制cox1表达，和/或减少mir-202-3p促进cox1表达。
3.cox1在猪卵巢颗粒细胞中的应用，其特征在于：所述的应用具体是在调控猪卵巢颗粒细胞的增殖、凋亡...
【专利技术属性】
技术研发人员：李加琪，张哲，周小枫，袁晓龙，张豪，何颖婷，李硕，李念，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：
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