一种抗人淋巴细胞免疫球蛋白活性抗体浓度的检测方法技术

本发明专利技术提供一种抗人淋巴细胞免疫球蛋白活性抗体浓度的检测方法，本发明专利技术结合酶联免疫吸附实验(ELISA)和流式细胞术对抗人淋巴细胞免疫球蛋白中活性抗体的浓度进行检测。首先使用免疫细胞对待检测样品进行吸附，然后使用流式细胞术检测孵育吸附前后待检测样品中活性抗体所减少的比例，再通过ELISA实验检测孵育吸附前后待检测样品中总抗体所减少的浓度，经过计算得出待检测样品中活性抗体的浓度和占总IgG抗体的比例。本发明专利技术方法可以用于检测原料血浆、成品及用药患者血浆中活性抗体的浓度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于活性抗体浓度检测领域，具体涉及一种抗人淋巴细胞免疫球蛋白活性抗体浓度的检测方法。

技术介绍

1、抗淋巴细胞球蛋白(antilymphocyte globulin，alg)是以人淋巴细胞、jurkat细胞或者人胸腺细胞作免疫抗原，使猪、马、兔等动物免疫而制得，为强效免疫控制剂。目前关于抗人淋巴细胞免疫球蛋白的制备方法报道比较多，但是关于抗人淋巴细胞免疫球蛋白活性抗体浓度的检测方法却鲜有报道。

2、中国专利cn116413436a公开了一种改进的人免疫球蛋白定量酶联免疫分析方法，所述方法设置一条或两条标准曲线，a、当设置一条标准曲线时，待测样品在标准曲线前后各加样至少1次；待测样品的检测结果取各样品检测结果的平均值；b、当设置两条标准曲线时，待测样品在两条标准曲线中间加样至少1次；待测样品的检测结果取两条标准曲线拟合结果的平均值，进一步提高了检测结果的准确性和方法的可操作性。但是，其检测的是总抗体的浓度，并非是针对活性抗体浓度进行定量检测，而具体效果却和产品中所含有的活性抗体浓度息息相关。因此，急需一种检测抗人淋巴细胞免疫球蛋白中活性本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种抗人淋巴细胞免疫球蛋白活性抗体浓度的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：首先使用免疫细胞对待检测样品进行吸附，然后使用流式细胞术检测孵育吸附前后待检测样品中活性抗体所减少的比例，再通过ELISA检测孵育吸附前后待检测样品中总抗体所减少的浓度，最后经过计算得出待检测样品中活性抗体的浓度和占总抗体的比例。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述吸附步骤如下：将免疫细胞用PBS缓冲液稀释，离心去上清液，将待检测样品用PBS缓冲液稀释，重悬免疫细胞，4℃孵育2小时，孵育完成后1500～2500rpm离心3～8min，取上清液，再次7000～9000rpm离心1～3...

【技术特征摘要】

1.一种抗人淋巴细胞免疫球蛋白活性抗体浓度的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：首先使用免疫细胞对待检测样品进行吸附，然后使用流式细胞术检测孵育吸附前后待检测样品中活性抗体所减少的比例，再通过elisa检测孵育吸附前后待检测样品中总抗体所减少的浓度，最后经过计算得出待检测样品中活性抗体的浓度和占总抗体的比例。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述吸附步骤如下：将免疫细胞用pbs缓冲液稀释，离心去上清液，将待检测样品用pbs缓冲液稀释，重悬免疫细胞，4℃孵育2小时，孵育完成后1500～2500rpm离心3～8min，取上清液，再次7000～9000rpm离心1～3min，取上清液，即得吸附后的样品。

3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述免疫细胞为人外周血淋巴细胞、jurkat细胞中任一种。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，免疫吸附时免疫细胞的用量为2～4×106个/ml...

【专利技术属性】
技术研发人员：殷文曲，邹浩勇，耿鹏，聂希霖，余泽琼，王胤霖，杨金良，杨帆，余沁宇，周小璐，许宽宏，
申请(专利权)人：武汉中生毓晋生物医药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：