一种抗人制造技术

本发明专利技术涉及生物制品技术领域，具体涉及一种抗人

【技术实现步骤摘要】
一种抗人T细胞兔免疫球蛋白的制备方法


[0001]本专利技术涉及生物制品
，具体涉及一种抗人
T
细胞兔免疫球蛋白的制备方法
。

技术介绍

[0002]抗人
T
细胞免疫球蛋白
(Anti
‑
human T
‑
lymphocyte Globulin
，
ATG)
为强免疫抑制剂，可抑制经抗原识别后的淋巴细胞激活过程，特异性的破坏淋巴细胞，其在医疗上主要用于防治器官抑制的排异反应
、
治疗激素耐受及移植物抗宿主病以及治疗再生障碍性贫血
。
[0003]已有的抗人
T
细胞免疫球蛋白主要有两种，分别是抗人
T
细胞猪免疫球蛋白和抗人
T
细胞兔免疫球蛋白
。
目前，国内关于抗人
T
细胞免疫球蛋白的研究主要集中在抗人
T
细胞猪免疫球蛋白上，而关于抗人
T
细胞兔免疫球蛋白的研究则甚少，市面上的抗人
T
细胞兔免疫球蛋白主要依靠进口
、
价格极高
。
而近年来的研究表明，抗人
T
细胞兔免疫球蛋白在预防骨髓移植的移植物抗宿主反应中应用效果更佳，因此，独立开发一种抗人
T
细胞兔免疫球蛋白的制备工艺具有重要意义
。
[0004]公开号为
CN112111004A/>的专利技术专利公开了一种免疫球蛋白的生产工艺，其是用
SPF
兔血清灭活补体后，经辛酸沉淀得到澄清液，并将澄清液依次通过以下层析：亲和层析
、
阴离子交换层析
、
抗
A/
抗
B
层析，最终获得收率和纯度均较高的免疫球蛋白产品
。
该方法至少存在以下问题：
(1)
辛酸沉淀对人体易产生伤害，助滤剂
(
如硅藻土
)
的使用，会存在铝离子等残留，此类物质在临床中易于引起不良反应；
(2)
抗
A/
抗
B
层析填料中的配基存在易脱落的问题，同样可能存在导致临床不良反应的潜在风险；
(3)
不便于自动化控制和产业化实施
。

技术实现思路

[0005]基于此，本专利技术提供了一种新的抗人
T
细胞兔免疫球蛋白的制备方法，采用该方法可以克服上述现有技术存在的问题，并成功制备得到满足现行版
《
中国药典
》
各论“抗人
T
细胞兔免疫球蛋白”标准要求的抗人
T
细胞兔免疫球白蛋，且该方法便于产业化实施
。
[0006]本专利技术通过以下技术方案来实现上述技术目的：一种抗人
T
细胞兔免疫球蛋白的制备方法，包括以下步骤：
[0007]S1
，获取经人外周血
T
淋巴细胞和
/
或胸腺细胞免疫的兔血浆
/
血清；
[0008]S2
，置于不高于
37℃
的条件下，融浆；
[0009]S3
，向融浆后的兔血浆或血清中加入健康人血浆，得料液
A
；向料液
A
中加入醛化人红细胞，调整
pH
至
7.0
±
1.0
，保持反应温度在0～
8℃
，充分反应后，分离红细胞，收集上清液
B
；向上清液
B
中加入醛化人胎盘，调整
pH
至
7.0
±
1.0
，保持反应温度在0～
8℃
，充分反应后，分离胎盘渣，收集上清液
C
；
[0010]S4
，调整上清液
C
的
pH
至
6.0
±
1.0
，并经深层过滤后，采用
pH6.0
±
1.0
的磷酸盐缓冲系统进行第一次离子交换层析，收集流穿液
D
；
[0011]S5
，将流穿液
D
经过滤，并将浓度调整至
10
～
30mg/mL
，上亲和层析柱，用
pH4.0
±
1.0
的醋酸盐缓冲液系统洗涤，收集洗脱液
E
；
[0012]S6
，将洗脱液
E
过滤除菌，置于
24
±
2℃
孵育后，得溶液
F
；
[0013]S7
，将溶液
F
调节
pH
至
6.0
±
1.0
，进行第二次离子交换层析，收集流穿液
G
，即得包含抗人
T
细胞兔免疫球蛋白的产物
。
[0014]作为一种优选的实施方式，还包括如下步骤：
[0015]S8
，采用生理氯化钠溶液对流穿液
G
进行超滤置换，调整
pH
至
4.0
±
0.5
，并加入甘氨酸，得蛋白质量浓度为1～3％，甘氨酸浓度为
10
～
30g/L
的半成品，采用
20nm
除病毒滤膜过滤除病毒，随后对除病毒料液进行除菌；
[0016]S9
，将半成品分装，即得
。
[0017]作为一种优选的实施方式，步骤
S2
中，健康人血浆的添加量为兔血浆投入量的1～5％；步骤
S5
中，醛化人红细胞的添加量为投浆量的
15
～
30
％，醛化人胎盘的添加量为投浆量的
15
～
30
％
。
[0018]作为一种优选的实施方式，步骤
S5
中醛化人胎盘为采用甲醛含量
0.8
％～3％的醛化液醛化反应3～
7h
所制备的醛化人胎盘
。
[0019]作为一种优选的实施方式，所述醛化人胎盘的制备方法如下：获取内毒素检测为阴性的人胎盘渣，解冻；将解冻后的人胎盘渣置于胎盘醛化液中进行醛化反应3～
7h
，所述胎盘醛化液为含
0.8
％～3％甲醛的磷酸盐缓冲液；将醛化胎盘转移至生理浓度的氯化钠溶液中洗涤，再转入中和液中进行中和反应，所述中和液为含甘氨酸的氯化钠溶液，再次洗涤，控干，即得醛化人胎盘
。
[0020]作为一种优选的实施本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种抗人
T
细胞兔免疫球蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1
，获取经人外周血
T
淋巴细胞和
/
或胸腺细胞免疫的兔血浆或血清；
S2
，置于不高于
37℃
的条件下，融浆；
S3
，向融浆后的兔血浆或血清中加入健康人血浆，得料液
A
；向料液
A
中加入醛化人红细胞，调整
pH
至
7.0
±
1.0
，保持反应温度在0～
8℃
，充分反应后，分离红细胞，收集上清液
B
；向上清液
B
中加入醛化人胎盘渣，调整
pH
至
7.0
±
1.0
，保持反应温度在0～
8℃
，充分反应后，分离胎盘渣，收集上清液
C
；
S4
，调整上清液
C
的
pH
至
6.0
±
1.0
，并经深层过滤后，采用
pH 6.0
±
1.0
磷酸盐缓冲液进行第一次离子交换层析，收集流穿液
D
；
S5
，将流穿液
D
经过滤，并将蛋白浓度调整至
10
～
30mg/mL
，上亲和层析柱，用
pH4.0
±
1.0
的醋酸盐缓冲液系统洗涤，收集洗脱液
E
；
S6
，将洗脱液
E
过滤除菌，置于
24
±
2℃
孵育后，得溶液
F
；
S7
，将溶液
F
调节
pH
至
6.0
±
1.0
，进行第二次离子交换层析，收集流穿液
G
，即得包含抗人
T
细胞兔免疫球蛋白的产物
。2.
根据权利要求1所述的抗人
T
细胞兔免疫球蛋白的制备方法，其特征在于，还包括如下步骤：
S8
，采用生理氯化钠溶液对流穿液
G
进行超滤置换，调整
pH
至
4.0
±
0.5
，并加入甘氨酸，得蛋白质量浓度为1～3％，甘氨酸浓度为
10
～
30g/L
的半成品，采用
20nm
除病毒滤膜过滤除病毒，随后对除病毒料液进行除菌；
S9
，将半成品分装，即得
。3.
根据权利要求1或2所述的抗人
T
细胞兔免疫球蛋白的制备方法，其特征在于，步骤
S2
中，健康人...

【专利技术属性】
技术研发人员：耿鹏，聂希霖，杨帆，邹浩勇，殷文曲，程斌，郭晓东，宋桂芝，王智，邓晨，余泽琼，王胤霖，
申请(专利权)人：武汉中生毓晋生物医药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：