【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物领域，具体涉及一种多巴双加氧酶hhdoda1及其编码基因在甜菜色素合成中的应用。
技术介绍
1、甜菜色素是一种l-酪氨酸（tyr）衍生的水溶性含氮生物碱类色素，因最早在甜菜根中被发现而得名。甜菜色素包括甜菜红素和甜菜黄素两类，它们分别是由甜菜醛氨酸与环多巴和氨基酸或胺形成的不定共轭物。所有甜菜色素都含有基本生色团——甜菜醛氨酸。甜菜色素是重要的天然色素之一，通常用作食品添加剂、化妆品着色剂等。同时，甜菜色素也具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、保肝和预防阿尔茨海默病、糖尿病等生物活性和潜在的保健医用价值。
2、甜菜色素是一种次级代谢产物，由芳香族氨基酸酪氨酸通过多步酶反应合成。其中甜菜黄素合成途径比较简单，首先tyr在酪氨酸羟化酶羟化作用下形成l-dopa，然后再在4,5-多巴双加氧酶（doda,4,5-l-dopa dioxygenase）作用生成4,5-开环多巴（4,5-seco-dopa），4,5-开环多巴不稳定，自发反应生成甜菜醛氨酸；甜菜醛氨酸和不同的胺或氨基酸分子缩合自发生成不同的甜菜黄素。l-dopa还可以在在酪氨酸酶或l-dopa氧化酶的作用下生成多巴醌（o-dopa-quinone），接着自发形成环多巴（cyclo-dopa），这是合成甜菜红素的重要前体。环多巴与甜菜醛氨酸结合自发反应生成甜菜红苷配基。不同种类的甜菜红素是由甜菜红苷配基在udp-葡糖基转移酶的作用下连接糖基而形成。
3、甜菜色素的合成依赖于关键酶的作用。因此，新型、高效的酶的研发对于甜菜色素合成、医疗保健品开发具
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种河南高生熊虫（ hypsibius henanensis）多巴双加氧酶hhdoda1在甜菜色素合成中的应用。
2、为了实现上述目的，第一方面，本专利技术提供了一种多巴双加氧酶hhdoda1在甜菜色素合成中的应用，所述多巴双加氧酶hhdoda1来源于水熊虫，其氨基酸序列如seq id no:1所示或与其具有至少85%同一性的氨基酸序列。
3、第二方面，本专利技术提供了编码所述多巴双加氧酶hhdoda1的基因在甜菜色素合成中的应用，所述基因的核苷酸序列如seq id no:2所示，或与其具有至少85%同一性的核苷酸序列。
4、第三方面，本专利技术提供了多巴双加氧酶hhdoda1的酶活性位点。
5、第四方面，本专利技术提供含有编码上述多巴双加氧酶hhdoda1的基因的重组载体在甜菜色素合成中的应用。
6、第五方面，本专利技术提供含有编码上述多巴双加氧酶hhdoda1的基因的表达盒在甜菜色素合成中的应用。
7、第六方面，本专利技术提供含有编码上述多巴双加氧酶hhdoda1的基因的转基因细胞系在甜菜色素合成中的应用。
8、第七方面，本专利技术提供含有编码上述多巴双加氧酶hhdoda1的基因的重组菌在甜菜色素合成中的应用。
9、第八方面，本专利技术提供含有上述多巴双加氧酶hhdoda1作为活性成分的组合物在甜菜色素合成中的应用。
10、第九方面，本专利技术提供上述多巴双加氧酶hhdoda1或多巴双加氧酶hhdoda1的基因的试剂盒在甜菜色素合成中的应用。
11、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
12、1、本专利技术提供了一种新的动物来源的多巴双加氧酶hhdoda1及其编码基因在甜菜色素合成中的应用；
13、2、本专利技术在体外证明了hhdoda1蛋白能够催化甜菜色素合成；
14、3、本专利技术利用结构预测了hhdoda1的酶活性位点，并通过突变体的体外酶活性实验证明了hhdoda1蛋白的多巴双加氧酶活性的关键位点；
15、4、本专利技术在细胞水平证明了人hela细胞中表达hhdoda1可建立甜菜色素合成通路。
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1.一种多巴双加氧酶HhDODA1在甜菜色素合成中的应用，其特征在于，所述多巴双加氧酶HhDODA1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述多巴双加氧酶HhDODA1来源于河南高生熊虫。
3.编码权利要求1中所述的多巴双加氧酶HhDODA1的基因在甜菜色素合成中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
5.含有权利要求3或4中所述基因的重组载体在甜菜色素合成中的应用。
6.含有权利要求3或4中所述基因的表达盒在甜菜色素合成中的应用。
7.含有权利要求3或4中所述基因的转基因细胞系在甜菜色素合成中的应用。
8.含有权利要求3或4中所述基因的重组菌在甜菜色素合成中的应用。
9.含有权利要求1或2中所述的酶作为活性成分的组合物在甜菜色素合成中的应用。
10.含有权利要求1或2中所述的酶或权利要求3或4中所述基因的试剂盒在甜菜色素合成中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种多巴双加氧酶hhdoda1在甜菜色素合成中的应用，其特征在于，所述多巴双加氧酶hhdoda1的氨基酸序列如seq id no:1所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述多巴双加氧酶hhdoda1来源于河南高生熊虫。
3.编码权利要求1中所述的多巴双加氧酶hhdoda1的基因在甜菜色素合成中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如seq id no:2所示。
5.含有权利要求3或...
【专利技术属性】
技术研发人员：张令强，李磊，杨冬，李亚琪，葛正平，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：
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