【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植入类医疗器械领域，涉及一种具有润滑性的可注射重组胶原蛋白凝胶及其制备方法。
技术介绍
1、目前，市场上主流的真皮层填充类产品的主要原料为透明质酸钠，主要作用为锁水和保湿。研究表明，透明质酸只能短期内改善皮肤情况，使皮肤短暂维持充盈状态；而当透明质酸钠锁住的水分流失后，皮肤就会重新回到治疗前的状态甚至较之前状态更差，其原因是透明质酸钠对成纤维细胞合成胶原没有促进作用且手术操作已对皮肤组织造成了损伤。因此，透明质酸钠在延缓皮肤衰老和解决皮肤皱纹方面并不是最佳材料。
2、在人体皮肤中，胶原蛋白含量高达71.9％，其维持着人体皮肤的弹性和韧性。随着年龄的增长和光老化的影响，皮肤成纤维细胞活性逐渐降低，胶原蛋白合成受阻，导致细胞变异、衰老、凋亡。另外，体内产生的氧化自由基也会攻击机体细胞，破坏胶原蛋白。日积月累，人体皮肤中缺乏胶原蛋白，就会导致胶原蛋白纤维交联固化，皮肤进一步失去水分，最终造成皮肤老化及皱纹的产生。补充胶原蛋白将会成为延缓皮肤衰老和解决皮肤皱纹的有效方法。
3、重组胶原蛋白作为一种新型的生物材料，与天然胶原相比具有分子量小、水溶性好、吸收率高的独特优势。研究表明，分子量在1200～1500道尔顿的胶原蛋白吸收率可达到96％～99％，能够为人体提供高纯度、好吸收、无负担的优质胶原补充，在保证吸收率的前提下，提高有效作用量。中国专利申请cn113880940a公开了一种分子量为38kda的重组人源化ⅰ型胶原蛋白，其是基于类人胶原蛋白的主要功能氨基酸序列设计并以毕赤酵母作为宿主利用生物基因
4、中国专利申请cn 101244290a采用化学交联方法制备了透明质酸微粒凝胶，通过挤压装置将凝胶块制备成微粒，但这种挤压力对凝胶结构破坏较大，且凝胶微粒的流动性较差。中国专利申请cn 103333508 a采用胶原蛋白为原料，使用酶或环氧类化合物作为交联剂使原料形成水凝胶，同时采用挤压、研磨、切割等粉碎方式制备成凝胶微粒，但产品中没有润滑剂的加入，患者的使用感较差。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种具有润滑性的可注射重组胶原蛋白凝胶及其制备方法。该方法采用交联方法将重组胶原蛋白制备成可注射凝胶，在保证吸收效果的前提下又满足了皱纹填充的需求。
2、实现本专利技术目的的技术方案如下：
3、具有润滑性的可注射重组胶原蛋白凝胶的制备方法，包括以下步骤：
4、(1)搅拌条件下，将碳二亚胺类水溶性交联剂溶液流加到ph为4.0～5.5的重组胶原蛋白溶液中，混合均匀后停止搅拌，室温下交联反应至完全胶凝，得到重组胶原蛋白凝胶，所述的重组胶原蛋白由保藏编号为cgmcc no.16463的巴斯德毕赤酵母pichiapastorisjy0401产生，分子量为38.345kda；
5、(2)将重组胶原蛋白凝胶切成块状，进行搅拌透析清洗，除去残留的交联剂，得到透析后的重组胶原蛋白凝胶块；
6、(3)将透明质酸钠和氯化钠溶于氢氧化钠溶液中并溶胀过夜，得到钠离子浓度为1wt.％、ph为11.5～13.0、粘度为50～250mpa·s的分散液，所述的分散液中，氢氧化钠溶液浓度为0.02～0.1m，透明质酸钠的浓度为0.2wt.％～0.8wt.％，氯化钠的浓度为0.2wt.％～0.8wt.％；
7、(4)根据重组胶原蛋白在成品中的含量，将重组胶原蛋白凝胶块和分散液按比例混合，使分散液均匀包裹凝胶块，然后在2～10℃下低温粉碎，得到可注射凝胶颗粒；
8、(5)将可注射凝胶颗粒灌装于预灌封注射器中，经湿热灭菌后，制成具有润滑性的可注射重组胶原蛋白凝胶成品。
9、进一步地，步骤(1)中，重组胶原蛋白溶液的浓度为10wt.％～18wt.％，ph为5～5.2。
10、进一步地，步骤(1)中，碳二亚胺类水溶性交联剂包括但不限于二环己基碳二亚胺(dcc)、n,n'-二异丙基碳二亚胺(dic)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(edc)等。在本专利技术具体实施方式中以edc作为代表例。碳二亚胺类水溶性交联剂溶液的浓度为10wt.％～20wt.％。
11、进一步地，步骤(1)中，重组胶原蛋白与碳二亚胺类水溶性交联剂的质量比为100:3～100:8，更优选为100:6。
12、进一步地，步骤(1)中，搅拌转速为100～600rpm，优选为300～450rpm；流加完全后继续搅拌时间为10～120s，优选为30～90s；交联反应时间为1～4h，优选为2～3.5h。
13、进一步地，步骤(2)中，凝胶块的长宽高尺寸为0.5～1.5cm；搅拌透析清洗方式为先用蒸馏水或纯化水透析2～5次，每次1～2小时，再用0.9％氯化钠溶液透析2～5次，每次1～2小时，搅拌转速为200～500rpm，透析液体积与凝胶块重量的比例为10～20ml:1g，优选为15:1。
14、进一步地，步骤(3)中，钠离子浓度由透明质酸钠和氯化钠共同决定，氢氧化钠溶液不影响分散液中的钠离子浓度，氢氧化钠溶液仅作为ph调节剂。
15、进一步地，步骤(3)中，氢氧化钠溶液浓度为0.05m；透明质酸钠的分子量为70万～150万道尔顿，优选为100万道尔顿，浓度为0.5wt.％～0.7wt.％；氯化钠的浓度为0.3wt.％～0.5wt.％。
16、进一步地，步骤(4)中，重组胶原蛋白凝胶块和分散液的使用比例是根据成品中重组胶原蛋白含量而计算，成品中重组胶原蛋白含量浓度为5.0wt.％～8.0wt.％。
17、进一步地，步骤(4)中，粉碎转速为6000～14000rpm，优选为8000～12000rpm；低温粉碎温度为4～5℃；粉碎次数为2～5次，优选为3～4次；可注射凝胶颗粒的粒径为20～600μm，优选为50～300μm。
18、进一步地，步骤(5)中，灌装方式为真空灌装；湿热灭菌温度为121℃，灭菌时间为10～30分钟；成品的粘度为50～800pa·s，ph为6.0～8.0，成品中重组胶原蛋白含量浓度为5.0wt.％～8.0wt.％。
19、与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：
20、(1)本专利技术以分子量为38.345kda的ⅰ型重组人胶原蛋白为原料，其分子量小、水溶性好、容易被机体吸收、安全性高、产量稳定、适合产业化，以碳二亚胺类水溶性交联剂制备凝胶，使胶原蛋白的肽链发生分子内或分子间的原位交联，得到具有三维立体结构的重组胶原蛋白凝胶，稳定性高，具有很好的抗降解能力。
21、(2)本专利技术在低温条件下制备凝胶微粒，与常规粉碎相比，既避免了因机械产热对凝胶结构造成的不可逆的损害，又能满足注射类填充剂的粒径要求。
22、(3)本专利技术添加了由透明质酸钠和氯化钠组成的分散本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.具有润滑性的可注射重组胶原蛋白凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，重组胶原蛋白溶液的浓度为10wt.%~18wt.%，pH为5~5.2；碳二亚胺类水溶性交联剂为二环己基碳二亚胺、N,N'-二异丙基碳二亚胺或1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，碳二亚胺类水溶性交联剂溶液的浓度为10wt.%~20wt.%；重组胶原蛋白与碳二亚胺类水溶性交联剂的质量比为100:3~100:8；搅拌转速为100~600rpm；流加完全后继续搅拌时间为10~120s；交联反应时间为1~4h。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，重组胶原蛋白与碳二亚胺类水溶性交联剂的质量比为100:6；搅拌转速为300~450rpm；流加完全后继续搅拌时间为30~90s；交联反应时间为2~3.5h；步骤（2）中，凝胶块的长宽高尺寸为0.5~1.5cm；搅拌透析清洗方式为先用蒸馏水或纯化水透析2~5次，每次1~2小时，再用0.9%氯化钠溶液透析2~5次，每次1~2小时，搅拌转速为200~500
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，透析液体积与凝胶块重量的比例为15mL:1g。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，透明质酸钠的分子量为70万~150万道尔顿。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，氢氧化钠溶液浓度为0.05M；透明质酸钠的分子量为100万道尔顿，浓度为0.5wt.%~0.7wt.%；氯化钠的浓度为0.3wt.%~0.5wt.%。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，粉碎转速为6000~14000rpm；低温粉碎温度为4~5℃；粉碎次数为2~5次；可注射凝胶颗粒的粒径为20~600μm。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，粉碎转速为8000~12000rpm；粉碎次数为3~4次；可注射凝胶颗粒的粒径为50~300μm。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（5）中，灌装方式为真空灌装；湿热灭菌温度为121℃，灭菌时间为10~30分钟；成品的粘度为50~800Pa·s，pH为6.0~8.0，成品中重组胶原蛋白含量浓度为5.0wt.%~8.0wt.%。
10.根据权利要求1~9任一所述的制备方法制得的具有润滑性的可注射重组胶原蛋白凝胶。
...【技术特征摘要】
1.具有润滑性的可注射重组胶原蛋白凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，重组胶原蛋白溶液的浓度为10wt.%~18wt.%，ph为5~5.2；碳二亚胺类水溶性交联剂为二环己基碳二亚胺、n,n'-二异丙基碳二亚胺或1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，碳二亚胺类水溶性交联剂溶液的浓度为10wt.%~20wt.%；重组胶原蛋白与碳二亚胺类水溶性交联剂的质量比为100:3~100:8；搅拌转速为100~600rpm；流加完全后继续搅拌时间为10~120s；交联反应时间为1~4h。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，重组胶原蛋白与碳二亚胺类水溶性交联剂的质量比为100:6；搅拌转速为300~450rpm；流加完全后继续搅拌时间为30~90s；交联反应时间为2~3.5h；步骤（2）中，凝胶块的长宽高尺寸为0.5~1.5cm；搅拌透析清洗方式为先用蒸馏水或纯化水透析2~5次，每次1~2小时，再用0.9%氯化钠溶液透析2~5次，每次1~2小时，搅拌转速为200~500rpm，透析液体积与凝胶块重量的比例为10~20ml:1g。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2...
【专利技术属性】
技术研发人员：王永会，谢艺，李冲，
申请(专利权)人：浙江诸暨聚源生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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