重组Ⅲ型胶原蛋白的肽图检测方法技术

本发明专利技术公开了一种重组Ⅲ型胶原蛋白的肽图检测方法。所述方法先对重组Ⅲ型胶原蛋白供试品进行胰蛋白酶酶解，再进行酸化处理，通过高效液相HPLC检测，对获得的重组Ⅲ型胶原蛋白肽图图谱与参比品进行比较分析，从而确定供试品的质量和结构。本发明专利技术方法可以有效地对由保藏编号为CGMCC No.5021的巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris发酵产生的重组Ⅲ型胶原蛋白进行鉴别分析，满足日常质量检测的要求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于重组ⅲ型胶原蛋白鉴别分析，涉及一种重组ⅲ型胶原蛋白的肽图检测方法。

技术介绍

1、近30多年，重组胶原蛋白受到了广泛研究，目前已有多种不同表达体系的重组胶原蛋白类产品，在护肤品、食品和医药领域均有应用。然而，由于各重组胶原蛋白类产品的表达体系等重组工艺不尽相同，所选择的核酸序列长短不同，片段的组合与拼接等千差万别，重组胶原蛋白的鉴别分析成为了该类产品质量评价和质量控制的重要项目。重组胶原蛋白的结构特征决定其生物功能和产品稳定性。《中国药典》中虽有肽图检查法，但因各重组胶原蛋白具有不同的结构特征，常规的检查步骤无法适用于具有不同特征的重组胶原蛋白。此外，肽图检查法通常使用的仪器为质谱仪，该仪器准确度虽高但是价格昂贵，难以满足日常质量监控的低成本、高准确度的要求。

技术实现思路

1、本专利技术的目的在于提供一种重组ⅲ型胶原蛋白的肽图检测方法。该方法采用高效液相色谱法，得到重组ⅲ型胶原蛋白的肽图，从而满足日常监测。

2、实现本专利技术目的的技术方案如下：

3、重组ⅲ型胶原蛋白的本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.重组Ⅲ型胶原蛋白的肽图检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的肽图检测方法，其特征在于，步骤（1）中，供试品溶液中，重组Ⅲ型胶原蛋白的浓度为1mg/mL。

3.根据权利要求1所述的肽图检测方法，其特征在于，步骤（2）中，超滤离心时，Tris-HCl溶液与供试品溶液的体积比为1:1。

4. 根据权利要求1所述的肽图检测方法，其特征在于，步骤（2）中，离心时，离心转速为11000 g。

5.根据权利要求1所述的肽图检测方法，其特征在于，步骤（2）中，胰蛋白酶溶液与供试品溶液的体积比为1:33，胰蛋白酶溶液的浓度为200...

【技术特征摘要】

1.重组ⅲ型胶原蛋白的肽图检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的肽图检测方法，其特征在于，步骤（1）中，供试品溶液中，重组ⅲ型胶原蛋白的浓度为1mg/ml。

3.根据权利要求1所述的肽图检测方法，其特征在于，步骤（2）中，超滤离心时，tris-hcl溶液与供试品溶液的体积比为1:1。

4. 根据权利要求1所述的肽...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨梦飞，杨佳丹，邵秀萍，
申请(专利权)人：浙江诸暨聚源生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：