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【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及二代测序的,尤其是涉及利用二代测序技术检测多发性骨髓瘤的方法及其检测试剂盒。
技术介绍
1、多发性骨髓瘤(multiple myeloma,mm)是一种以骨髓中单克隆浆细胞大量增生为特征的恶性疾病。克隆性浆细胞浸润组织、器官及其分泌的m蛋白直接导致临床上各种症状,其中以贫血、高钙血症、骨骼疼痛或溶骨性骨质破坏和肾功能不全为其特征。在很多国家是血液系统第2位常见恶性肿瘤,多发于老年。流行病学数据显示我国多发性骨髓瘤发病率和死亡率呈上升趋势,尤其对于60岁以上年龄人群。尽管随着医疗技术的发展,各种新型药物如蛋白酶体抑制剂(如硼替佐米等)、免疫调节药物(如来那度胺等)、cd38单克隆抗体(如达雷妥尤单抗等)、cart细胞治疗的出现改善了预后,但多发性骨髓瘤仍是一种不可治愈的疾病。在人口老龄化的当代,该疾病极大的威胁着公众健康并成为社会和家庭的经济负担。mm的发病机制复杂,涉及细胞遗传学异常、染色体易位、致癌基因的激活及骨髓微环境改变等。mm在生物学及临床上都具有明显的异质性,建议进行预后分层。mayo骨髓瘤分层及风险调整治疗(mayo stratification of myeloma and risk-adapted therapy,msmart)分层系统较为广泛使用,包涵相关基因突变和染色体改变进行预后分层,以此提出基于危险分层的治疗;nccn指南中也根据遗传学改变列出多发性骨髓瘤疾病高侵袭性和复发性风险因子,例如del(1p32),t(4;14),t(14;16),t(14;20),del(17p)/-17/tp5
2、第二代测序(next-generation sequencing,ngs)又称为高通量测序(high-throughput sequencing),具有通量高、多重建库法对dna起始量要求低、快速检测、准确度高、成本低等特点。ngs技术因其高效和低廉的单碱基测序成本为临床应用提供了不可估量的优势。目前靶向基因ngs技术已应用在分子诊断,可以根据已经明确的致病基因通过ngs技术给出更为准确的诊断证据,甚至可以根据不同的致病基因类型给出更为个体化的治疗方式。
3、确定多发性骨髓瘤遗传改变是诊断必要的,并可能指导治疗决策。目前,骨髓瘤的基因组分析需要荧光原位杂交(fish)、单核苷酸多态性阵列和测序技术,以覆盖具有预后影响的各种改变,这些技术成本高、劳动强度大,需要大量的浆细胞。为了克服这些限制,需要设计一种靶向捕获的二代测序方法,用于一步鉴定体细胞突变、ig易位和v(d)j克隆重组,以快速识别风险群体和特定的靶向分子病变。
技术实现思路
1、针对目前的技术问题,本专利技术的一个方面涉及一种用于多发性骨髓瘤二代测序的方法,其靶向基因为:
2、多发性骨髓瘤相关突变基因:tm、braf、cdkn1b、crbn、cxcr4、dis3、egr1、fam46c、idh1、idh2、irf4、kras、myd88、nras、pik3ca、prkd2、pten、stat3、tp53、zfhx4;
3、多发性骨髓瘤相关重排基因:igh、igk、igl、myc。
4、所述方法包括:
5、1)分选富集cd138阳性细胞;
6、2)从富集的cd138阳性细胞中提取dna;
7、3)多发性骨髓瘤相关突变基因和相关重排基因的dna文库;
8、4)利用捕获探针杂交捕获相关突变基因以及相关重排基因,并且应用二代测序方法进行基因测序检测。
9、本专利技术涉及的一种用于多发性骨髓瘤二代测序的检测试剂盒,其包括靶向多发性骨髓瘤相关突变基因的捕获探针以及靶向多发性骨髓瘤相关重排基因;
10、其中,多发性骨髓瘤相关突变基因:tm、braf、cdkn1b、crbn、cxcr4、dis3、egr1、fam46c、idh1、idh2、irf4、kras、myd88、nras、pik3ca、prkd2、pten、stat3、tp53、zfhx4;
11、多发性骨髓瘤相关重排基因:igh、igk、igl、myc。
12、本专利技术设计的mm dna二代测序检测方法以及检测试剂盒,使用杂交捕获法进行文库构建,高gc区域覆盖度更好,均一性更好,较扩增法更适合多基因大组套二代测序检测。
13、本组套选择了临床意义比较明确的基因,去除一些意义不明的突变基因,更适合临床应用。
14、本专利技术设计加入了igh、igk、igl和myc相关靶探针,能同时检测igh、igk、igl和myc相关基因重排,弥补fish检测不足,增加检测敏感性,明确融合伙伴基因。本专利技术技术方案增加的多发性骨髓瘤中常见的ig重排检测,近一半的多发性骨髓瘤具有igh基因重排,许多融合基因具有明确的预后意义,如:igh::ccnd1、igh:ccnd3重排预后属于标危组,igh::fgfr3、igh::maf、igh::mafb预后属于高危组,本组套弥补fish检测不足,增加检测敏感性,明确融合伙伴基因,能更好的辅助诊断和预后评估,最终实现个体化预后分层治疗。
15、本专利技术能同时检测v(d)j克隆性重组,得到的单克隆序列可以作为mrd追踪的标志,无需进行单独检测克隆性。
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1.一种用于多发性骨髓瘤二代测序的方法,其特征在于,其靶向基因为:
2.根据权利要求1所述的用于多发性骨髓瘤二代测序的方法,其特征在于,所述方法包括:
3.一种用于多发性骨髓瘤二代测序的检测试剂盒,其包括靶向多发性骨髓瘤相关突变基因的捕获探针以及靶向多发性骨髓瘤相关重排基因;
【技术特征摘要】
1.一种用于多发性骨髓瘤二代测序的方法,其特征在于,其靶向基因为:
2.根据权利要求1所述的用于多发性骨髓瘤二代测序的方法,其特征在于,所...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈晓军,肖晟,郎兴萍,刘灵枫,谢郁非,
申请(专利权)人:苏州精准医疗科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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