【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于农业微生物。更具体地，涉及一株产蛋白酶的bx1菌株及其应用。
技术介绍
1、蛋白酶是催化蛋白质水解的一类酶。蛋白酶作为关键因子具有多功能性，包括调节新陈代谢、基因表达，以及将较大的蛋白质水解成短肽运输，主要存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中，是最重要的三大工业用酶之一。蛋白酶在食品制作、洗涤剂生产、皮革软化、纸浆和生产纸张，纺织品，高温灭菌乳的去稳定化等工业生产领域具有重要商业价值，目前工业酶全球销售额估计为10亿美元。
2、根据蛋白酶来源不同，可以分为微生物蛋白酶、动物蛋白酶和植物蛋白酶三种类型。其中，微生物来源的蛋白酶具有广泛的底物特异性，适应宽范围酸碱度和温度，并且在各种金属离子、抑制剂和有机溶剂存在的情况下仍能够保持较高活性和稳定性。与传统的动植物资源相比，微生物蛋白酶具有生产周期短、生产成本低、易于管理控制、不受土地和季节限制等优点，且微生物产生的蛋白酶多为胞外酶，纯化制备相对容易，回收率较高，规模化生产的成本大大降低。同时，产蛋白酶微生物还被报导具有促进植物生长和杀线虫活性。产蛋白酶微生物具有非常广阔的市场价值和突出的社会环保效益。
3、近年来产蛋白酶菌株筛选研究工作非常活跃，国内外许多学者从土壤、海洋等不同环境中分离得到了大量具有不同优势的菌株。谈家金等分离到一株蜡样芽胞杆菌(bacillus cereus)njsz-13能够粘附于松材线虫体表，主要通过分泌蛋白酶将松材线虫杀死，并能够以线虫虫体为营养进行生长繁殖；马正等筛选到一株产蛋白酶菌株解淀粉芽孢杆菌(bacillu
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题是克服现有能分泌蛋白酶且具有抑菌作用的伯克霍尔德氏菌的不足，提供一株产蛋白酶的bx1菌株及其应用。
2、本专利技术的目的是提供一株稳定伯克霍尔德氏菌(burkholderia stabilis)bx1菌株。
3、本专利技术另一目的是提供稳定伯克霍尔德氏菌bx1菌株的应用。
4、本专利技术又一目的是提供一种病原菌抑制剂或生防菌剂。
5、本专利技术再一目的是提供一种制备蛋白酶的方法。
6、本专利技术还一目的是提供一种防治植物病害的方法。
7、本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：
8、本专利技术从烟草根际土壤样品中分离得到一株稳定伯克霍尔德氏菌(burkholderiastabilis)bx1菌株，该菌株已于2023年9月28日保存于广东省微生物菌种保藏中心，菌株编号为gdmcc no:63848，保藏地址为广州市先烈中路100大院59号楼5楼。稳定伯克霍尔德氏菌bx1菌株的单菌落呈规则圆形，白色，乳状，菌落表面光滑，菌体杆状，为革兰氏阴性菌。本专利技术研究显示，bx1菌株具有产生蛋白酶能力，在常见发酵培养基中培养均能产蛋白酶，在蚕豆粉培养基中的酶活能达到16.2u/ml；并且，bx1菌株对多种植物病原真菌具有显著的抑制性，对菜心炭疽病菌、水稻稻瘟病菌、棉花黄萎病菌和葡萄灰霉病菌具有广谱抑菌效果，其抑菌率分别为73.68％，83.63％，87.5％，35.3％，能够作为生防菌防治多种植物病害。
9、因此，本专利技术提供稳定伯克霍尔德氏菌(burkholderia stabilis)bx1菌株和/或其发酵液在分泌蛋白酶、在制备蛋白酶、在抑制植物病原菌、在防治由植物病原菌引起的植物病害、在制备病原菌抑制剂或生防菌剂中的应用。
10、本专利技术提供一种病原菌抑制剂或生防菌剂，含稳定伯克霍尔德氏菌bx1菌株和/或其发酵液。
11、本专利技术提供一种制备蛋白酶的方法，在发酵培养基中接入稳定伯克霍尔德氏菌bx1菌株制备蛋白酶。
12、优选地，所述发酵培养基为：l-可溶性淀粉培养基、l-lb液体培养基、l-pdb培养基、l-nb培养基、大豆蛋白胨培养基、蚕豆粉液体培养基或脱脂奶粉培养基。
13、更优选地，所述发酵培养基为蚕豆粉液体培养基(蚕豆粉30g，葡萄糖8g，水1000ml，121℃灭菌20min)。
14、本专利技术提供一种防治植物病害的方法，采用稳定伯克霍尔德氏菌bx1菌株和/或其发酵液进行处理。
15、优选地，所述植物病原菌为菜心炭疽病菌(colletotrichum higginsianum)、水稻稻瘟病菌(pyricularia oryzae)、棉花黄萎病菌(verticillium dahliae)或葡萄灰霉病菌(botrytis cinerea)中的一种或多种。
16、本专利技术具有以下有益效果：
17、本专利技术分离得到一株能产蛋白酶且能够防治多种植物病害的稳定伯克霍尔德氏菌(burkholderia stabilis)bx1菌株，该菌株具有产蛋白酶能力，在常见发酵培养基中培养均能产生蛋白酶，在蚕豆粉培养基中的酶活能达到16.2u/ml，能用于蛋白酶的制备；同时，bx1菌株还具有广谱的抑菌作用，对多种植物病原真菌：菜心炭疽病菌、水稻稻瘟病菌、棉花黄萎病菌和葡萄灰霉病菌具有显著的抑制效果，能够作为生防菌防治多种植物病害。本专利技术丰富了蛋白酶以及生防菌的菌种资源，且该菌株未经遗传改造，可应用于工业蛋白酶生产和生物农药的开发。
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1.一株稳定伯克霍尔德氏菌(Burkholderia stabilis)BX1菌株，其特征在于，该菌株已于2023年9月28日保存于广东省微生物菌种保藏中心，菌株编号为GDMCC NO:63848。
2.权利要求1所述稳定伯克霍尔德氏菌BX1菌株和/或其发酵液在分泌蛋白酶中的应用。
3.权利要求1所述稳定伯克霍尔德氏菌BX1菌株和/或其发酵液在制备蛋白酶中的应用。
4.权利要求1所述稳定伯克霍尔德氏菌BX1菌株和/或其发酵液在抑制植物病原菌中的应用。
5.权利要求1所述稳定伯克霍尔德氏菌BX1菌株和/或其发酵液在防治由植物病原菌引起的植物病害中的应用。
6.权利要求1所述稳定伯克霍尔德氏菌BX1菌株和/或其发酵液在制备病原菌抑制剂或生防菌剂中的应用。
7.一种病原菌抑制剂或生防菌剂，其特征在于，含权利要求1所述稳定伯克霍尔德氏菌BX1菌株和/或其发酵液。
8.一种制备蛋白酶的方法，其特征在于，在发酵培养基中接入权利要求1所述稳定伯克霍尔德氏菌BX1菌株制备蛋白酶。
9.一种防治植物病害
10.根据权利要求4-6任一项所述应用，其特征在于，所述植物病原菌为菜心炭疽病菌(Colletotrichum higginsianum)、水稻稻瘟病菌(Pyricularia oryzae)、棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)或葡萄灰霉病菌(Botrytis cinerea)中的一种或多种。
...【技术特征摘要】
1.一株稳定伯克霍尔德氏菌(burkholderia stabilis)bx1菌株，其特征在于，该菌株已于2023年9月28日保存于广东省微生物菌种保藏中心，菌株编号为gdmcc no:63848。
2.权利要求1所述稳定伯克霍尔德氏菌bx1菌株和/或其发酵液在分泌蛋白酶中的应用。
3.权利要求1所述稳定伯克霍尔德氏菌bx1菌株和/或其发酵液在制备蛋白酶中的应用。
4.权利要求1所述稳定伯克霍尔德氏菌bx1菌株和/或其发酵液在抑制植物病原菌中的应用。
5.权利要求1所述稳定伯克霍尔德氏菌bx1菌株和/或其发酵液在防治由植物病原菌引起的植物病害中的应用。
6.权利要求1所述稳定伯克霍尔德氏菌bx1菌株和/或其发酵液在制备病原菌抑制剂或生防菌剂...
【专利技术属性】
技术研发人员：舒灿伟，刘小雪，海维西，黄美壬，唐晓琳，李淮源，王寒，冉静，孙思，刘建春，唐维燕，廖思思，刘明伟，周而勋，许永泰，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：
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