【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物，具体涉及一株高产耐温速溶型黄原胶的野油菜黄单胞菌及其应用。
技术介绍
1、黄原胶（xanthan gum）是一种由野油菜黄单胞菌（xanthomonas campestris）以碳水化合物为主要原料经好氧发酵产生的一种水溶性微生物胞外多糖，又称黄胶、汉生胶，是目前世界上生产规模最大的微生物多糖。黄原胶由糖类经黄单胞菌好氧发酵，切断1,6-糖苷键，打开支链后，按1,4-键合成直链组成的一种酸性胞外杂多糖。1963年在美国农业部的北方区域研究中心发现黄原胶是由野油菜黄单胞菌nrrl b-1459合成的多糖b-1459，1964年初开始大批量商业生产。黄原胶由于其大分子特殊结构和胶体特性，具有优良的理化特性，例如悬浮性、乳化性、增稠性、假塑性、热稳定性等，可作为增稠剂、乳化剂、稳定剂、凝胶剂、浸润剂、膜成型剂等广泛应用于各个领域，是性能最为优越的生物胶之一。黄原胶具有长链高分子的一般性能，但它比一般高分子含有较多的官能团，在特定条件下会显示独特性能。黄原胶的分子侧链末端含有丙酮酸基团的多少，对其性能有很大影响。在工业生产中，利用野油菜黄单胞菌进行有氧发酵，将发酵液进行沉淀、离心、洗涤、分离、干燥、磨粉、分装等工艺最终得到黄原胶产品。
2、菌种在发酵产业中是一个十分重要的问题，目前较为常见的工业生产菌株为黄单胞菌发酵制备黄原胶，通过菌株进行发酵，将产物分泌胞外，对发酵液进行处理提取获得目的产物，然而现有的菌株随着菌株传代次数不断增加而导致的菌种退化直接影响了黄原胶的工业化生产，且生产的黄原胶产品性能单一
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一株高产耐温速溶型黄原胶的野油菜黄单胞菌及其应用，以解决现有黄原胶工业产胶率较低、生产的黄原胶耐高温性能和溶解性不理想的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
3、一株高产耐温速溶型黄原胶的野油菜黄单胞菌，所述野油菜黄单胞菌为xanthomonas campestris y-11，分类学名称为：xanthomonas campestris，并于2023年05月12日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmcc no：63460，保藏地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
4、具体地，其筛选过程如下：
5、（1）将原始菌株（保藏编号为cicc no：10258）的保藏菌液解冻，用接种环蘸取保藏菌液在平板培养基上划线，待长出单个菌落后挑取单菌落，按1%接种量接种至液体种子培养基中，30℃，180 r/min恒温摇床培养24 h，进行传代2次，使原始菌恢复原有活性；
6、（2）将活化完成的原始菌株按1%接种量接种至装有100ml液体种子培养基的250ml锥形瓶中，30℃，180 r/min恒温摇床培养24 h，完成液体种子培养；
7、（3）取生长至对数期的原始菌株的菌液，用涡旋仪混匀成均一的菌悬液；将制备好的菌悬液取1ml在35mm辐照小皿中，用封口膜密封好，利用12c6+离子束进行辐照诱变，该离子束的引出能量为80 mev/u，let为35.5 kev /mm；诱变剂量选取0 gy、20gy、40 gy、60gy、80 gy、100 gy、120 gy、140 gy、160 gy、180 gy、200 gy共11个剂量进行辐照；
8、（4）观察不同辐照剂量下菌落的形态和大小，分别挑取较大较光滑透亮的菌落点种到筛选培养基上，并进行编号，37℃恒温培养72 h；待菌落长出后，在筛选培养基上滴加卢戈氏碘液，观测菌落周围透明圈；测量菌落直径c和透明圈直径h，计算h/c值；h/c值较大的菌株接入液体培养基，30℃、180 r/min恒温摇床培养72 h，这些菌种为初筛菌种；
9、（5）将初筛菌种进行编号，培养至对数期后按10%接种量分别接入75 ml发酵培养基中，37℃、180 r/min恒温摇床培养96 h，发酵结束后，测定其产胶率和发酵产物黄原胶水溶液的透光率；比较初筛菌株的产胶率和水溶液透光率，选择最优菌株，为复筛菌株，并对复筛菌株进行遗传稳定性测试，最终选取产胶率和水溶液透光率以及遗传稳定性测试最好的菌株为目标菌株。
10、本专利技术还提供了上述野油菜黄单胞菌在作为发酵菌种发酵制备黄原胶中的应用。
11、进一步地，上述应用包括以下步骤：
12、（1）菌种活化：将含有保藏编号为gdmcc no：63460的野油菜黄单胞菌的保藏菌液解冻后，用接种环蘸取保藏菌液在平板培养基上划线，待长出单个菌落后挑取单菌落，按1%接种量接种至液体种子培养基中，发酵温度30℃，180 r/min恒温摇床培养24 h，进行传代2次，使gdmcc63460恢复原有活性；
13、（2）液体种子培养：将活化完成的野油菜黄单胞菌按1%接种量接种至液体种子培养基中，发酵温度30℃，180 r/min恒温摇床培养24 h，完成液体种子培养；
14、（3）发酵培养：将生长至对数期的液体种子以5~20%的接种量接种至发酵培养基中，发酵温度30~40℃，180 r/min摇床恒温培养96h；
15、（4）采用乙醇沉淀法提取发酵液中的黄原胶。
16、进一步地，步骤（1）中所述平板培养基包括如下重量百分比的组分：可溶性淀粉0.5%、蛋白胨1%、牛肉膏0.3%、氯化钠0.5%、琼脂2%，平板培养基的ph为6.5-7.0，灭菌温度为115℃，灭菌时间为30 min，平板培养时间为72 h。
17、进一步地，步骤（1）和步骤（2）中，所述液体种子培养基中均包括如下重量百分比的组分：可溶性淀粉2.0%、蛋白胨0.5%、磷酸二氢钾0.3%、氯化钠0.2%，液体种子培养基的ph值为7.0。
18、进一步地，步骤（3）中的接种量为15%。
19、进一步地，步骤（3）中的发酵温度为40℃。
20、进一步地，步骤（3）中的发酵培养基包括如下重量百分比的组分：可溶性淀粉4.5%、葡萄糖0.5%、大豆蛋白1.0%、七水硫酸镁0.1%、磷酸氢二钾0.1%、磷酸二氢钾0.1%，且发酵培养基的ph值为7.0。
21、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
22、1、本专利技术提供的野油菜黄单胞菌（保藏编号为gdmcc no：63460），黄原胶产胶率相比于原始菌株提升10%~20%，发酵所得黄原胶溶解速度快、不易结团并耐高温等特性，适用于耐温速溶型黄原胶的发酵生产中。
23、2、本专利技术对保藏编号为gdmcc no：63460的野油菜黄单胞菌进行遗传稳定性分析，进行连续传代培养，每隔 2 次传代测定黄原胶的产胶率，可以看出，该野油菜黄单胞菌在连续传代12次后的黄原胶产胶率和胶品质变化幅度不显著，证本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一株高产耐温速溶型黄原胶的野油菜黄单胞菌，其特征在于，所述野油菜黄单胞菌为Xanthomonas campestris Y-11，并于2023年05月12日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：63460，保藏地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
2.如权利要求1所述的野油菜黄单胞菌在作为发酵菌种发酵制备黄原胶中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤（1）中所述平板培养基包括如下重量百分比的组分：可溶性淀粉0.5%、蛋白胨1%、牛肉膏0.3%、氯化钠0.5%、琼脂2%，平板培养基的pH为6.5-7.0，灭菌温度为115℃，灭菌时间为30 min，平板培养时间为72 h。
5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤（1）和步骤（2）中，所述液体种子培养基中均包括如下重量百分比的组分：可溶性淀粉2.0%、蛋白胨0.5%、磷酸二氢钾0.3%、氯化钠0.2%，液体种子培养基的pH值为7.0。
6.如权利要求3所述的应用
7.如权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤（3）中的发酵温度为40℃。
8.如权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤（3）中的发酵培养基包括如下重量百分比的组分：可溶性淀粉4.5%、葡萄糖0.5%、大豆蛋白1.0%、七水硫酸镁0.1%、磷酸氢二钾0.1%、磷酸二氢钾0.1%，且发酵培养基的pH值为7.0。
...【技术特征摘要】
1.一株高产耐温速溶型黄原胶的野油菜黄单胞菌，其特征在于，所述野油菜黄单胞菌为xanthomonas campestris y-11，并于2023年05月12日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmcc no：63460，保藏地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
2.如权利要求1所述的野油菜黄单胞菌在作为发酵菌种发酵制备黄原胶中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤（1）中所述平板培养基包括如下重量百分比的组分：可溶性淀粉0.5%、蛋白胨1%、牛肉膏0.3%、氯化钠0.5%、琼脂2%，平板培养基的ph为6.5-7.0，灭菌温度为115℃，灭菌时间为3...
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