【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种针对人腺病毒的纳米抗体3a2及其制备方法与应用。
技术介绍
1、全球多次报道由腺病毒引发的呼吸道疾病在新兵中暴发流行，流行的病毒株主要为b组55型、7型和14型腺病毒，其中55型是近几年新发现的病毒，由11型和14型重组而来，人群缺乏免疫力，普遍易感，且症状较重，引起各方重视。目前尚无明确针对腺病毒的特效治疗，临床上以对症支持、提高机体免疫力和针对并发症的治疗为主。研究发现人体感染腺病毒后可产生长时间的免疫保护，康复后一般不会再次感染同型病毒，且有研究显示：腺病毒感染所产生的起保护作用的中和抗体通常可持续10年。因此利用腺病毒中和抗体进行被动免疫治疗，作为一种有效而特异的抗腺病毒治疗手段，应该是未来腺病毒感染治疗的一个重要研究方向。
2、纳米抗体(nanobody)是一种小型、单链的抗体片段，来源于骆驼科动物(如骆驼、双峰驼和羊驼)和鲨鱼的重链抗体。与传统的抗体相比，纳米抗体具有尺寸小、稳定性高、易于生产和改造的特点。纳米抗体的起源可以追溯到上世纪90年代对骆驼科动物的抗体研究。与大多数哺乳动物(它们的抗体由两个重链和两个轻链组成)不同，骆驼科动物的抗体中有一部分只由两个重链组成。纳米抗体是这种重链抗体的可变区(vhh)，不包含常数区。因其小型结构，纳米抗体的分子量大约为15kda。由于其结构简单，纳米抗体容易进行遗传和化学改造，以增强其亲和力、特异性或增加功能性标签，尺寸小使得纳米抗体可以进入传统抗体无法到达的细胞部位或病原体上的结构。此外，纳米抗体对温度、酸碱性和其他化学物质具有高
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的主要问题是开发一种能够与人55型腺病毒特异性结合的纳米抗体，并能在针对人腺病毒的诊断或治疗中发挥作用。
2、为了解决上述问题，本专利技术提供了一种靶向人腺病毒的纳米抗体或含有所述纳米抗体的抗原结合片段。
3、本专利技术提供的靶向人腺病毒的纳米抗体或含有所述纳米抗体的抗原结合片段，具有3个互补决定簇cdr1、cdr2和cdr3；所述cdr1的氨基酸序列如seq id no.1所示，所述cdr2的氨基酸序列如seq id no.2所示，所述cdr3的氨基酸序列如seq id no.3所示。
4、上述cdr是根据imgt编号系统定义的序列。
5、本文中所述的纳米抗体通常包括由4个构架区(frs)和3个互补决定区(cdrs)组成的vhh，称为fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3及fr4，所述抗原结合片段包含该纳米抗体的至少一部分，该部分足以赋予该片段特异性结合人55型腺病毒的能力。
6、所述4个框架区可为fr1、fr2、fr3和fr4。
7、所述fr1的氨基酸序列为seq id no.12或seq id no.16；
8、所述fr2的氨基酸序列为seq id no.13；
9、所述fr3的氨基酸序列为seq id no.14或seq id no.18；
10、所述fr4的氨基酸序列为seq id no.15或seq id no.19。
11、上文所述的纳米抗体或抗原结合片段中，所述纳米抗体可为下述任一种：
12、a1)氨基酸序列如seq id no.4所示的纳米抗体；
13、a2)氨基酸序列如seq id no.5所示的纳米抗体；
14、a3)在seq id no.4或seq id no.5所示氨基酸序列的n端和/或c端连接上蛋白标签后得到的纳米抗体融合蛋白。
15、所述蛋白标签(protein-tag)是指利用与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和/或纯化。所述蛋白标签可为his标签、flag标签、mbp标签、ha标签、myc标签、gst标签和/或sumo标签、免疫球蛋白的fc段等。
16、本专利技术中，所述蛋白标签可为人免疫球蛋白g的fc段(hfc)。
17、上述纳米抗体中，所述纳米抗体由所述互补决定簇区和框架区组成。
18、本专利技术中术语“抗体”是有相同结构特征的约150000道尔顿的异四聚糖蛋白，其由两个相同的轻链(l)和两个相同的重链(h)组成。每条轻链通过一个共价二硫键与重链相连，而不同免疫球蛋白同种型的重链间的二硫键数目不同。每条重链和轻链也有规则间隔的链内二硫键。每条重链的一端有可变区(vh)，其后是多个恒定区。每条轻链的一端有可变区(vl)，另一端有恒定区；轻链的恒定区与重链的第一个恒定区相对，轻链的可变区与重链的可变区相对。特殊的氨基酸残基在轻链和重链的可变区之间形成界面。
19、本专利技术中术语“单域抗体(vhh)”、“纳米抗体”(nanobody)具有相同的含义，指克隆抗体重链的可变区，构建仅由一个重链可变区组成的单域抗体(vhh)，它是具有完整功能的最小的抗原结合片段。
20、上述抗原结合片段可为含有所述纳米抗体的完整抗体、融合抗体、抗体药物偶联物、fab片段、fv片段、fab′片段、f(ab′)2片段、单链抗体(scfv)、或最小识别单位(mru)。
21、术语“fab片段”是由重链fd和完整轻链通过二硫键结合而成的异二聚体，仅含一个抗原结合位点。上述重链fd指fab中约1/2的h链部分(约含225个氨基酸残基，包括vh、ch1和部分铰链区)。
22、术语“fv片段”是指可分别构建含有vh和vl基因的载体，共转染细胞，使之分别表达，再组装成功能性fv抗体；也可在载体中的vh和vl之间设置终止密码，分别表达两个小分子蛋白片段，再通过非共价键结合而形成fv抗体(fv片段)。
23、术语“fab′片段”含有一条轻链和包含vh结构域和ch1结构域以及ch1和ch2结构域之间区域的一条重链的部分，由此可在两个fab′片段的两条重链之间形成链间二硫键以形成f(ab′)2分子。
24、术语“f(ab′)2片段”含有两条轻链和两条包含ch1和ch2结构域之间的恒定区的部分的重链，由此在两条重链间形成链间二硫键。因此，f(ab′)2片段由通过两条重链间的二硫键保持在一起的两个fab′片段组成。
25、本专利技术中术语“可变”表示抗体中可变区的某些部分在序列上有所不同，它形成了各种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。然而，可变性并不均匀地分布在整个抗体可变区中。它集中于轻链和重链可变区中称为互补决定区(cdr)或超变区中的三个片段中。可变区中较保守的部分称为构架区(fr)。天然重链和轻链的可变区中各自包含四个fr区，它们大致上呈β-折叠构型，由形成连接环的三个cdr相连，在某些情况下可形成部分β折叠结构。每条链中的cdr通过fr区紧密地靠在一起并与另一链的cdr一起形成了抗体的抗原结合部位(参见kabat等，nih本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.靶向人腺病毒的纳米抗体或含有所述纳米抗体的抗原结合片段，其特征在于，所述纳米抗体具有3个互补决定簇CDR1、CDR2和CDR3；所述CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，所述CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。
2.根据权利要求1所述的纳米抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述纳米抗体为下述A1)或A2)：
3.与权利要求1或2所述纳米抗体相关的生物材料，所述生物材料为下述任一种：
4.根据权利要求3所述的生物材料，其特征在于，B1)所述核酸分子为编码权利要求1或2所述纳米抗体的核酸分子，所述核酸分子中，所述CDR1的编码基因是SEQ ID No.6的第76-99位核苷酸，所述CDR2的编码基因如SEQ ID No.6的第151-174位核苷酸，所述CDR3的编码基因如SEQ ID No.6的第289-324位核苷酸。
5.权利要求1或2所述纳米抗体的制备方法，包括以下步骤：将编码权利要求1或2所述纳米抗体的核酸分子导入受体细胞得到表达所述纳米抗体的转
6.根据权利要求3或4所述的生物材料或权利要求5所述的制备方法，其特征在于，B1)所述核酸分子为如下任一：
7.纳米抗体融合蛋白，其特征在于，所述纳米抗体融合蛋白为将权利要求1或2所述的纳米抗体或抗原结合片段与另一分子融合，所述另一分子包括免疫球蛋白的Fc结构域、荧光蛋白或具有不同特异性的VHH。
8.根据权利要求7所述的纳米抗体融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白为下述任一种：
9.一种靶向人腺病毒的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1或2所述的纳米抗体、权利要求3-5中任一所述生物材料或权利要求7或8所述的融合蛋白。
10.下述任一种应用：
...【技术特征摘要】
1.靶向人腺病毒的纳米抗体或含有所述纳米抗体的抗原结合片段，其特征在于，所述纳米抗体具有3个互补决定簇cdr1、cdr2和cdr3；所述cdr1的氨基酸序列如seq id no.1所示，所述cdr2的氨基酸序列如seq id no.2所示，所述cdr3的氨基酸序列如seq id no.3所示。
2.根据权利要求1所述的纳米抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述纳米抗体为下述a1)或a2)：
3.与权利要求1或2所述纳米抗体相关的生物材料，所述生物材料为下述任一种：
4.根据权利要求3所述的生物材料，其特征在于，b1)所述核酸分子为编码权利要求1或2所述纳米抗体的核酸分子，所述核酸分子中，所述cdr1的编码基因是seq id no.6的第76-99位核苷酸，所述cdr2的编码基因如seq id no.6的第151-174位核苷酸，所述cdr3的编码基因如seq id no.6的第289-324位...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨志新，陈蕾，王荣，陆健昇，余云舟，杜鹏，王茜，郭家正，蒋雨佳，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：
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