【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及兽用生物制品，尤其涉及一种猪瘟病毒阳性血清及其制备方法和应用。
技术介绍
1、猪瘟(infection with classical swine fever virus)俗称“烂肠瘟”，是由黄病毒科猪瘟病毒属的猪瘟病毒引起的一种急性、发热、接触性传染传染病，以病畜高热、内脏器官严重出血和高死亡率为特征。猪瘟为一类传染病，在自然条件下只感染猪，不同年龄、性别、品种的猪和野猪都易感，一年四季均可发生。研制针对该传染病的疫苗对养猪业的健康发展具有重大意义。
2、中和抗体效价是评价猪瘟疫苗质量好坏的主要技术指标。猪瘟阳性血清是中和抗体检测重要的标准物质。目前制备该阳性血清主要是通过利用猪瘟活疫苗或灭活疫苗免疫动物后进行阳性血清的制备，但这些方法存在一些缺陷，主要包括以下几个方面：第一，利用猪瘟病毒进行水相的制备，本身需要对病毒安全性进行环境的控制。第二，需要多次反复免疫才能达到一个高效价。这就给猪瘟病毒阳性血清的制备过程带来了很大的控制要求与时间成本。
3、有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种猪瘟病毒阳性血清及其制备方法和应用。本专利技术以猪瘟病毒e2蛋白作为抗原蛋白，配合isa206佐剂，通过免疫猪瘟病毒弱阳性猪，制得的猪瘟病毒阳性血清具有中和效价滴度高、特异性好的优点。同时，本专利技术提供的猪瘟病毒阳性血清制备方法具有生产周期短、安全风险控制要求低、免疫持效期长(免疫后的血清中和效价长时间维持高水
2、具体的，本专利技术提供的技术方案如下：
3、第一方面，本专利技术提供了一种猪瘟病毒阳性血清，所述猪瘟病毒阳性血清以蛋白疫苗免疫猪瘟病毒弱阳性猪制得；所述蛋白疫苗的组成成分包括猪瘟病毒e2蛋白和isa206佐剂；其中，所述猪瘟病毒e2蛋白在所述蛋白疫苗中的浓度为30-60μg/ml；所述isa206佐剂在所述蛋白疫苗中的质量含量为45％-55％；所述猪瘟病毒弱阳性猪的血清中和抗体效价为1:(8-23)。
4、猪瘟病毒e2蛋白是猪瘟病毒的包膜糖蛋白，具有较多的抗原区，抗原性良好，常用于猪瘟新型疫苗开发和临床检测。本专利技术研究发现，isa206佐剂能显著提升猪瘟病毒e2蛋白的抗原性，尤其是在免疫猪瘟病毒弱阳性猪时，获得的阳性血清中和效价具有非常高的滴度，且特异性良好。
5、本专利技术将猪瘟病毒e2蛋白和isa206佐剂按比例配制得到蛋白疫苗，然后将该蛋白疫苗用于弱阳性猪(血清中和抗体效价为1:(8-23)的免疫，免疫后的动物血样能迅速产生高滴度中和抗体(二免7天的中和抗体可以达到4096以上)，滴度高，免疫次数少，不用重复免疫2次以上，注射剂量仅用1毫升，且免疫持效期长达至少7个月。
6、第二方面，本专利技术提供了一种猪瘟病毒阳性血清的制备方法，使用蛋白疫苗免疫猪瘟病毒弱阳性猪，制得中和抗体效价为1：n，≥4096的猪瘟病毒阳性血清；所述蛋白疫苗的组成成分包括猪瘟病毒e2蛋白和isa206佐剂；其中，所述猪瘟病毒e2蛋白在所述蛋白疫苗中的浓度为30-60μg/ml；所述isa206佐剂在所述蛋白疫苗中的质量含量为45％-55％，优选为48％-52％，更优选为50％。
7、本专利技术中，猪瘟病毒e2蛋白作为抗原蛋白，在所述蛋白疫苗中的浓度为30-60μg/ml，优选为40-50μg/ml，更优选为50μg/ml。
8、本专利技术对所述猪瘟病毒e2蛋白的来源不作特别限定，本领域常规渠道获取的猪瘟病毒e2蛋白即可。
9、优选地，在本专利技术中，所述抗原蛋白由cho重组细胞表达得到。相较于其他来源，cho重组细胞表达得到的抗原蛋白免疫原性更好，安全性高。
10、在本专利技术较为优选的实施方式中，所述猪瘟病毒e2蛋白的基因序列如下所示：
11、gccgccaccatggaaacagatacactcctcctctgggtgctgctcctctgggtgccaggatctacaggacggctagcctgcaaggaagattacaggtacgcaatatcgtcaaccgatgagatagggctacttggggccggaggtctcaccaccacctggaaggaatacaaccacgatttgcaactgaatgacgggaccgtcaaggccagttgcgtggcaggttcctttaaagtcacagcacttaatgtggtcagtaggaggtatttggcgtcattgcataagaaggctttacccacttccgtgacattcgagctcctgttcgacgggaccaacccatcaactgaggaaatgggagatgacttcaggtccgggctgtgcccgtatgatacgagtcctgttgttaagggaaagtacaatacgaccttgttgaacggtagtgctttctatcttgtctgcccaatagggtggacgggtgtcatagagtgcacagcagtgagcccaacaactctgaggacagaagtggtaaagaccttcaggagagacaagccctttccgcacagaatgaattgtgtgaccaccatattcaggagagacaagccctttccgcacagaatgaattgtgtgaccaccatagtggaaaatgaagatttattctattgtaagctggggggcaactggacatgtgtgaaaggcgagccagtggtctacacagggggggtagtaaaacaatgtagatggtgtggcttcgacttcgatgggcctgacggactcccgcattaccccataggtaagtgcattttggcagcagagacaggttacagaatagtagattcaacggactgtaacagagatggcgttgtaatcagcacagaggggagtcatgagtgcttgatcggtaacacgaccgtcaaggtgcatgcatcagatgaaagactgggccctatgccatgcagacctaaagagattgtctctagtgctggtcctgtaaagaaaacctcctgtacattcaactacacaaaaactttgaagaacaggtactatgagcccagggacagctacttccagcaatatatgcttaagggtgagtatcagtactggtttgacctggatgcgtgcaacttcaacgtgtccgtggaggacaccctgtacggcgaccacgagtgcggttctctgctgcaggacgctgccctgtacctcgtggacggcatgaccaacacaatcgagaacgccaggcagggcgctgctagggtgacaagctggctgggcaggcaactgtccaccgctggcaagaggctggagggcaggagcaagacctggttcggcgcttacgc本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.猪瘟病毒阳性血清，其特征在于，所述猪瘟病毒阳性血清以蛋白疫苗免疫猪瘟病毒弱阳性猪制得；所述蛋白疫苗的组成成分包括猪瘟病毒E2蛋白和ISA206佐剂；其中，所述猪瘟病毒E2蛋白在所述蛋白疫苗中的浓度为30-60μg/ml；所述ISA206佐剂在所述蛋白疫苗中的质量含量为45％-55％；所述猪瘟病毒弱阳性猪的血清中和抗体效价为1:(8-23)。
2.根据权利要求1所述猪瘟病毒阳性血清，其特征在于，所述猪瘟病毒阳性血清的中和抗体效价为1：n，n≥4096。
3.猪瘟病毒阳性血清的制备方法，其特征在于，使用蛋白疫苗免疫猪瘟病毒弱阳性猪，制得中和抗体效价为1：n，n≥4096的猪瘟病毒阳性血清；所述蛋白疫苗的组成成分包括猪瘟病毒E2蛋白和ISA206佐剂；其中，所述猪瘟病毒E2蛋白在所述蛋白疫苗中的浓度为30-60μg/ml；所述ISA206佐剂在所述蛋白疫苗中的质量含量为45％-55％；所述猪瘟病毒弱阳性猪的血清中和抗体效价为1:(8-23)。
4.根据权利要求3所述猪瘟病毒阳性血清的制备方法，其特征在于，所述猪瘟病毒E2蛋白的基因序列如SEQ I
5.根据权利要求3或4所述猪瘟病毒阳性血清的制备方法，其特征在于，所述免疫的接种剂量按每次接种的抗原蛋白总质量计，为30-60μg/头份。
6.根据权利要求3-5任意一项所述猪瘟病毒阳性血清的制备方法，其特征在于，所述猪瘟病毒E2蛋白由CHO重组细胞表达得到。
7.根据权利要求3-6任意一项所述猪瘟病毒阳性血清的制备方法，其特征在于，所述猪瘟病毒弱阳性猪的抗原检测结果为阴性；且所述猪瘟病毒弱阳性猪的猪瘟病毒抗体检测效价为1:(8-23)；所述抗原包括猪瘟病毒抗原；优选地，所述抗原还包括猪伪狂犬病病毒抗原、非洲猪瘟病毒抗原、猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原和猪圆环病毒抗原中的至少一种。
8.根据权利要求7所述猪瘟病毒阳性血清的制备方法，其特征在于，所述猪瘟病毒弱阳性猪的抗原检测结果为阴性；且所述猪瘟病毒弱阳性猪的猪瘟病毒抗体检测效价为1:(16-23)；所述抗原包括猪瘟病毒抗原、猪伪狂犬病病毒抗原、非洲猪瘟病毒抗原、猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原和猪圆环病毒抗原。
9.根据权利要求2-8任意一项所述猪瘟病毒阳性血清的制备方法，其特征在于，所述免疫的接种次数为两次；第一次接种和第二次接种的时间间隔为14-28天；猪瘟病毒阳性血清的收获时间为第二次接种后的第N天，N≥7；
10.权利要求1所述猪瘟病毒阳性血清，或者权利要求2～9所述制备方法获得的猪瘟病毒阳性血清的应用，所述应用包括如下方式中的至少一种：
...【技术特征摘要】
1.猪瘟病毒阳性血清，其特征在于，所述猪瘟病毒阳性血清以蛋白疫苗免疫猪瘟病毒弱阳性猪制得；所述蛋白疫苗的组成成分包括猪瘟病毒e2蛋白和isa206佐剂；其中，所述猪瘟病毒e2蛋白在所述蛋白疫苗中的浓度为30-60μg/ml；所述isa206佐剂在所述蛋白疫苗中的质量含量为45％-55％；所述猪瘟病毒弱阳性猪的血清中和抗体效价为1:(8-23)。
2.根据权利要求1所述猪瘟病毒阳性血清，其特征在于，所述猪瘟病毒阳性血清的中和抗体效价为1：n，n≥4096。
3.猪瘟病毒阳性血清的制备方法，其特征在于，使用蛋白疫苗免疫猪瘟病毒弱阳性猪，制得中和抗体效价为1：n，n≥4096的猪瘟病毒阳性血清；所述蛋白疫苗的组成成分包括猪瘟病毒e2蛋白和isa206佐剂；其中，所述猪瘟病毒e2蛋白在所述蛋白疫苗中的浓度为30-60μg/ml；所述isa206佐剂在所述蛋白疫苗中的质量含量为45％-55％；所述猪瘟病毒弱阳性猪的血清中和抗体效价为1:(8-23)。
4.根据权利要求3所述猪瘟病毒阳性血清的制备方法，其特征在于，所述猪瘟病毒e2蛋白的基因序列如seq id no.1所示。
5.根据权利要求3或4所述猪瘟病毒阳性血清的制备方法，其特征在于，所述免疫的接种剂量按每次接种的抗原蛋白总质量计，为30...
【专利技术属性】
技术研发人员：武春芳，狄栋栋，特日棍，张建华，
申请(专利权)人：金宇保灵生物药品有限公司，
类型：发明
国别省市：
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