【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药中疫苗的制备，具体涉及一种猪伪狂犬ge基因缺失灭活疫苗及其制备方法，尤其涉及一种安全性高、免疫效果好、免疫持续期较长的猪伪狂犬ge基因缺失灭活疫苗及其制备方法。
技术介绍
1、伪狂犬病是由伪狂犬病毒(pseudorabies virus，prv)引起的多种家畜和野生动物的急性传染病，国际兽医局将其定为b类传染病。该病对猪呈爆发性流行，能够引起妊娠母猪流产、死胎、公猪不育、新生仔猪的大量死亡、育肥猪呼吸困难、增长停滞等，是危害全球养猪业的重大传染病之一。
2、目前，疫苗接种是控制猪场prv疫情的主要手段，本申请人已经利用ge基因缺失毒株js-2012δge株开发了一种免疫效果好(一次免疫后28天检测的平均中和抗体水平为1:96)、安全性高(疫苗接种后不会出现猪伪狂犬临床症状)且保存期长(在2-8℃条件下的保存期为18个月以上)的猪伪狂犬基因缺失灭活疫苗(专利文献cn113633765a)，可以用于预防猪伪狂犬病的大规模蔓延。然而目前猪伪狂犬病毒流行毒株容易发生变异，且其致病能力越来越强，因此仍有必要开发免疫效果更好的猪伪狂犬基因缺失灭活疫苗，以应对可能发生的更严重的猪场prv疫情。
技术实现思路
1、针对现有技术中存在的一个或多个问题，本专利技术的一个方面提供一种猪伪狂犬ge基因缺失灭活疫苗，其包含猪伪狂犬ge基因缺失毒株灭活抗原和疫苗佐剂；
2、其中所述疫苗佐剂包括：75wt％-85wt％的注射用油、1wt％-5wt％的精制司本-85和
3、在一些实施方式中，所述猪伪狂犬ge基因缺失毒株灭活抗原的含量以灭活前病毒含量计为107.00tcid50/0.1ml以上。
4、在一些实施方式中，所述猪伪狂犬ge基因缺失毒株灭活抗原与所述疫苗佐剂的质量比为(1-4):1，可选为(1-2):1，进一步可选为1:1。
5、在一些实施方式中，所述精制中过滤为首先使用过滤孔径为0.40μm-0.65μm的过滤装置进行粗滤，滤液再使用过滤孔径为0.10μm-0.22μm的过滤装置进行精滤。
6、在一些实施方式中，所述注射用油包括注射用矿物油、注射用植物油、或其组合；可选地，所述注射用矿物油包括白油。
7、在一些实施方式中，所述白油包括marcol-52白油、primol 352白油、total130#白油、total150#白油、total170#白油、drakeol-5白油、drakeol-7白油和sonneborn 4#白油、sonneborn 10#白油paracos kf40、paracos kf50、角鲨烯、角鲨烷。
8、本专利技术另一方面提供一种猪伪狂犬ge基因缺失灭活疫苗的制备方法，其包括将猪伪狂犬ge基因缺失毒株的配苗用病毒抗原液与疫苗佐剂按照质量比为(1-4):1混合乳化，得到猪伪狂犬ge基因缺失灭活疫苗。
9、在一些实施方式中，获得所述猪伪狂犬ge基因缺失毒株的配苗用病毒抗原液的方式包括以下操作：
10、s1：向悬浮培养的bhk-21细胞中接种猪伪狂犬ge基因缺失毒株的种毒，培养获得病毒液；
11、s2：对步骤s1获得的病毒液进行澄清、灭活和浓缩纯化处理，得到所述猪伪狂犬ge基因缺失毒株的配苗用病毒抗原液。
12、在一些实施方式中，所述疫苗佐剂由包括以下组分的原料制成：75wt％-85wt％的注射用油、1wt％-5wt％的精制司本-85和精制司本-80中之一或两者、和10wt％-24wt％的精制吐温-80；
13、所述精制司本-85为通过以下方式对司本-85进行处理获得的产物：
14、1)使用h2o2对司本-85进行处理，使所述司本-85的颜色由深至浅变化，待所述司本-85的颜色不再变化时，得到第一处理产物；
15、2)去除所述第一处理产物中未反应的h2o2，得到第二处理产物；
16、3)对所述第二处理产物进行过滤，得到所述精制司本-85；
17、所述精制司本-80为通过以下方式对司本-80进行处理获得的产物：
18、1)使用h2o2对司本-80进行处理，使所述司本-80的颜色由深至浅变化，待所述司本-80的颜色不再变化时，得到第一处理产物；
19、2)去除所述第一处理产物中未反应的h2o2，得到第二处理产物；
20、3)对所述第二处理产物进行过滤，得到所述精制司本-80；
21、所述精制吐温-80为通过以下方式对吐温-80进行处理获得的产物：
22、(1)使用h2o2对吐温-80进行处理，使所述吐温-80的颜色由深至浅变化，待所述吐温-80的颜色不再变化时，得到第三处理产物；
23、(2)去除所述第三处理产物中未反应的h2o2，得到第四处理产物；
24、(3)对所述第四处理产物进行过滤，得到所述精制吐温-80。
25、在一些实施方式中，制备所述疫苗佐剂的操作包括：
26、t1：将按照重量百分比计为75wt％-85wt％的注射用油加热至30℃-40℃；
27、t2：将按照重量百分比计为1wt％-5wt％的精制司本-85和精制司本-80中之一或两者、和10wt％-24wt％的精制吐温-80加入步骤t1中加热后的注射用油中，混匀后经过滤处理得到疫苗佐剂。
28、在一些实施方式中，所述猪伪狂犬ge基因缺失毒株为js-2012δge毒株。
29、基于以上技术方案提供的猪伪狂犬ge基因缺失灭活疫苗由猪伪狂犬ge基因缺失毒株灭活抗原和由包括精制司本-85和精制司本-80中之一或两者、和精制吐温-80的原料制成的疫苗佐剂配制而成。相对于利用现有的seppic isa 201疫苗佐剂或seppic isa70vg疫苗佐剂配制而成的疫苗，本专利技术提供的猪伪狂犬ge基因缺失灭活疫苗能够提供更好的免疫保护效果(一免后14天、21天和28天检测的平均中和抗体水平分别约为1:22、1:91和1:128，优选为1:64、1:256和1:362；二免后7日、14日、21日、28日的血清prv中和抗体效价水平分别达到约1:256、1:512、1:362、1:256，优选为1:512、1:1024、1:762、1:762)，免疫后仔猪日体温＞40.5℃持续不超过3日，且免疫持续期长，因此，本专利技术提供的猪伪狂犬ge基因缺失灭活疫苗可以有效应对致病能力越来越强的猪伪狂犬病毒流行毒株可能引发的更严重的猪场prv疫情。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗，其包含猪伪狂犬gE基因缺失毒株灭活抗原和疫苗佐剂；
2.根据权利要求1所述的猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗，其中所述猪伪狂犬gE基因缺失毒株灭活抗原的含量以灭活前病毒含量计为107.00TCID50/0.1ml以上。
3.根据权利要求1或2所述的猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗，其中所述猪伪狂犬gE基因缺失毒株灭活抗原与所述疫苗佐剂的质量比为(1-4):1，可选为(1-2):1，进一步可选为1:1。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗，其中所述精制中过滤为首先使用过滤孔径为0.40μm-0.65μm的过滤装置进行粗滤，滤液再使用过滤孔径为0.10μm-0.22μm的过滤装置进行精滤。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗，其中所述注射用油包括注射用矿物油、注射用植物油、或其组合；
6.权利要求1-5中任一项所述的猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗的制备方法，其包括将猪伪狂犬gE基因缺失毒株的配苗用病毒抗原液与疫苗佐剂按照质量比为(1-4)
7.根据权利要求6所述的制备方法，其中获得所述猪伪狂犬gE基因缺失毒株的配苗用病毒抗原液的方式包括以下操作：
8.根据权利要求6或7所述的制备方法，所述疫苗佐剂由包括以下组分的原料制成：75wt％-85wt％的注射用油、1wt％-5wt％的精制司本-85和精制司本-80中之一或两者、和10wt％-24wt％的精制吐温-80；
9.根据权利要求6-8中任一项所述的制备方法，其中制备所述疫苗佐剂的操作包括：
10.根据权利要求7-9中任一项所述的制备方法，所述猪伪狂犬gE基因缺失毒株为JS-2012ΔgE毒株。
...【技术特征摘要】
1.一种猪伪狂犬ge基因缺失灭活疫苗，其包含猪伪狂犬ge基因缺失毒株灭活抗原和疫苗佐剂；
2.根据权利要求1所述的猪伪狂犬ge基因缺失灭活疫苗，其中所述猪伪狂犬ge基因缺失毒株灭活抗原的含量以灭活前病毒含量计为107.00tcid50/0.1ml以上。
3.根据权利要求1或2所述的猪伪狂犬ge基因缺失灭活疫苗，其中所述猪伪狂犬ge基因缺失毒株灭活抗原与所述疫苗佐剂的质量比为(1-4):1，可选为(1-2):1，进一步可选为1:1。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的猪伪狂犬ge基因缺失灭活疫苗，其中所述精制中过滤为首先使用过滤孔径为0.40μm-0.65μm的过滤装置进行粗滤，滤液再使用过滤孔径为0.10μm-0.22μm的过滤装置进行精滤。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的猪伪狂犬ge基因缺失灭活疫苗，其中所述注射用油包括注射用矿物油、...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈坚，李超，李晓艳，王岩，宋庆庆，赵丽霞，杨波，俎红丽，杨青春，宋志刚，贺瑶，齐志涛，吉格木德，王秉坤，
申请(专利权)人：金宇保灵生物药品有限公司，
类型：发明
国别省市：
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