【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因治疗领域。具体而言，本专利技术涉及一种分离的核酸分子、重组病毒或其应用。更具体而言，本专利技术的核酸分子、重组病毒可用于治疗或预防与vegf相关的眼部疾病，特别是湿性年龄相关性黄斑变性。
技术介绍
1、年龄相关黄斑变性(age-related macular degeneration，amd)是一种中央视网膜的进行性慢性疾病，主要影响视网膜黄斑区域，多发于60岁以上老年人，是老年人不可逆的致盲的主要原因之一(1)。amd可分为干性和湿性两种。其中，干性为非渗出型，主要表现为玻璃膜疣生成和视网膜色素上皮增生或者脱失。湿性为新生血管型，主要以脉络膜新生血管形成导致出血和渗出(2)。血管可以将营养物质输送到组织和器官并去除分解代谢产物，因此，新生血管供应或血管生成的发展对很多重要的生理过程起着稳态作用。但不受控制的血管生长会促进多种疾病的发生和发展过程，主要包括肿瘤和眼内血管疾病(2)。现有的研究结果显示，眼部的许多疾病都涉及血管的异常发生，其中视网膜和脉络膜新生血管异常增生是眼部疾病视力丧失的主要原因。湿性年龄相关性黄斑变性(wet-amd)主要为异常的新生血管在黄斑部的视网膜下生长，称为脉络膜新生血管(cnv)，导致黄斑区局部水肿或出血引起黄斑区的隆起和局限性色素上皮脱离，最终导致疤痕形成，损伤视网膜感光细胞从而引起视力丧失。
2、血管内皮生长因子(vegf)是一种具有重要促血管生成活性的生长因子，可以促进对内皮细胞的有丝分裂和抗凋亡作用，增加血管通透性，促进细胞迁移等，可以调节生理和病理性血管生成过
3、目前比较成熟的治疗方案除了使用光动力疗法(pdt)和激光光凝术等手术疗法以外，还主要包括抗体和重组蛋白类药物治疗。
4、光动力疗法属于光化学疗法的一种，是用激光照射被化学物质染色的生物组织，产生光化学效应损伤靶组织从而达到治疗目的。此方法治疗wamd属于利用低强度激光结合光敏剂对视网膜下黄斑部生长的异常新生血管，和由于黄斑区局部水肿或出血引起黄斑区的隆起和局限性色素上皮脱离导致的疤痕进行手术切除治疗(7)。
5、但是，对于光动力疗法，有些患者一次治疗后病变可复发，可能需要重复治疗。有的患者每年甚至需要治疗3次以上。许多研究证实光敏剂可以在肿瘤的血管组织中大量潴留，沾染光敏剂的血管内皮细胞膜被破坏，使血管内形成血栓和新生血管闭塞(7)。
6、抗体和重组蛋白类药物治疗通过阻断vegf与血管内皮细胞表面的vegfr结合，抑制结合后细胞信号向下游传导，使用vegf的单克隆抗体或者重组蛋白药物进行针对性的治疗。
7、vegf为血管内皮生长因子，是导致wamd等的多种眼病中异常的血管从脉络膜生长到神经视网膜这个过程发生的主要中介因子。其可以与细胞表面的vegfr结合，激活血管再生的下游通路。利用竞争性蛋白类药物抑制vegf的活性，成为wamd治疗的重要手段。已经用于临床的此类药物包括：阿柏西普、雷珠单抗、贝伐珠单抗、康柏西普等(5)。其中雷珠单抗、贝伐珠单抗是vegf的单克隆抗体，阿柏西普和康柏西普是vegfr的结构类似重组蛋白，由vegf受体1和2胞外结构域和igg的fc部分组成(8)。两者都是通过与游离的vegf特异性结合，阻碍vegf与细胞表面的vegfr结合，通过降低结合效率来抑制vegfr对促血管生成信号向细胞内部的传递(9)。研究证实由于抗体类和重组蛋白类药物的使用，vegf异常表达导致的眼科疾病的致盲率有所降低。
8、wamd的蛋白类药物，药物结构主要有两个设计方向。其一为vegf的单克隆抗体，可以特异性与vegf分子结合。其二为vegf的受体类似蛋白，主要设计结构为vegfr1和vegfr2的与vegf结合的结构域的组合。
9、但抗体药和重组蛋白药物由于其游离蛋白的性质，导致药物在体内的半衰期较短，需要患者1-2个月就要进行一次玻璃体内注射(例如老年性黄斑变性患者需要以平均每1-3个月一针的频率进行玻璃体内注射)，这无疑对于患者和医护人员都增加了负担，并且还会带来了注射导致的眼内炎症、视网膜脱离和眼出血的风险(6)。并且必须长期坚持用药，确诊2年不用药发展为失明的几率将极大提高。一年内多次的双眼玻璃体内常年持续注射对于病人的依从性和医生都带来比较大的负担。
10、除了上述两种方法，目前也正在研究开发基因药物治疗。aav具有独特的特性(例如非致病性)并且具有持久的转基因表达，这使其成为极具吸引力的治疗性基因递送载体。
11、aav病毒载体基因治疗的原理是将具有治疗作用的药物结构基因插入到病毒载体的基因组中，药物结构基因随aav病毒感染被释放到患者体内，并转录表达药物结构蛋白。由于aav病毒的免疫源性低，不会对宿主致病，可以免受宿主免疫系统攻击，病毒载体中携带的药物结构基因可以在动物体内长时间高效表达药物蛋白，从而达到一针注射就长时间有效的目的。
12、例如，美国诺华公司开发的治疗脊髓性肌萎缩症(sma)的药物zolgensma就是利用aav病毒为递送载体，携带并在体内表达smn基因，补充体内缺乏的相关蛋白，一次注射目前已经有7.5年有效的相关数据。与渤健的蛋白药诺西那生钠注射液(spinraza)一年多次注射相比，有更多的优势。
13、wamd的基因治疗药物，携带并表达的药物结构基因是表达的药物蛋白的基因基础，也是基因治疗药物的药效的核心内容。有必要对药物结构基因进行进一步改进。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种改进的药物结构基因，并将其包装到aav病毒的衣壳中，其表达产物是vegfr类似物，可以对视网膜处异常新生血管的生长进行抑制。用药时，随着aav病毒被注射到患者眼内，aav感染血管细胞后可以表达药物结构蛋白，药物结构蛋白在信号肽的作用下被分泌到细胞外。这种药物结构蛋白，可以与血管内皮细胞表面表达的vegfr竞争性结合游离的vegf，从而抑制游离vegf与细胞表面的vegfr结合，进而抑制细胞增殖信号的传导，达到抑制细胞增殖的作用。
2、在一个方面，本专利技术提供一种分离的核酸分子，所述核酸分子包含seq id no:3所示的核苷酸序列。
3、在一个实施方式中，所述核酸分子还包含seq id no:9所示的信号肽编号核苷酸序列。
4、在一个实施方式中，所述核酸分子包含seq id no:1所示的核苷酸序列。
5、在一个实施方式中，所述核酸分子编码包含seq id no:5或7的氨基酸序列。
6、在一个方面，本专利技术提供一种分离的核酸分子，所述核酸分子包含seq id no:4所示的核苷酸序列。
7、在一个实施方式中，所述核酸分子还包含seq id no:10所本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种分离的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子还包含SEQ ID NO:9所示的信号肽编号核苷酸序列。
3.根据权利要求1所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码包含SEQ ID NO:5或7的氨基酸序列。
5.一种分离的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列。
6.根据权利要求5所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子还包含SEQ ID NO:10所示的信号肽编号核苷酸序列。
7.根据权利要求5所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。
8.根据权利要求5-7中任一项所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码包含SEQ ID NO:6或8的氨基酸序列。
9.一种重组病毒，其特征在于
10.根据权利要求9所述的重组病毒，其特征在于，所述重组病毒还包括以下多核苷酸表达盒内的调控元件的组合：
11.根据权利要求10所述的重组病毒，其特征在于，所述病毒是腺病毒相关病毒(AAV)，例如，所述AAV病毒选自以下任一血清型：AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10或AAV11。
12.根据权利要求11所述的重组病毒，其特征在于，所述病毒是AAV8。
13.权利要求1-8中任一项所述的核酸分子或权利要求9-12中任一项所述的重组病毒在制备用于治疗或预防与VEGF相关的眼部疾病的药物中的应用。
14.根据权利要求13所述的应用，其特征在于，所述与VEGF相关的眼部疾病是眼内新生血管生成的眼部疾病。
15.根据权利要求13或14所述的应用，其特征在于，所述与VEGF相关的眼部疾病是年龄相关黄斑变性，优选湿性年龄相关性黄斑变性。
...【技术特征摘要】
1.一种分离的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含seq id no:3所示的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子还包含seq id no:9所示的信号肽编号核苷酸序列。
3.根据权利要求1所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含seq id no:1所示的核苷酸序列。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码包含seq id no:5或7的氨基酸序列。
5.一种分离的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含seq id no:4所示的核苷酸序列。
6.根据权利要求5所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子还包含seq id no:10所示的信号肽编号核苷酸序列。
7.根据权利要求5所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含seq id no:2所示的核苷酸序列。
8.根据权利要求5-7中任一项所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码包含seq id no:6或8的氨基酸序列。
<...【专利技术属性】
技术研发人员：李莉莉，郭彦岑，赵玉秀，魏洋洋，闫君宇，李辛，栗子谦，杨晗，
申请(专利权)人：北京生物制品研究所有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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