一种筛选新冠病毒早期毒种的方法和制造疫苗的方法技术

技术编号：39975875 阅读：9 留言：0更新日期：2024-01-09 01:08

本发明专利技术涉及一种筛选新冠病毒早期毒种的方法和制造疫苗的方法。所述方法包括：(1)提供新冠病毒毒株的候选毒种；(2)测定各毒种的总蛋白含量；(3)保持总蛋白上样量一致，比较各毒种的S蛋白含量，选择S蛋白含量高的毒种。该方法的筛选速度明显快于传统的噬斑及有限稀释法，因此可以作为一种辅助方法用于前期毒种的筛选。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种筛选新冠病毒早期毒种的方法和制造疫苗的方法。更具体而言，本专利技术涉及一种新型的快速筛选方法，可辅助用于毒种的筛选。

技术介绍

1、随着新型冠状病毒突变位点不断增加，变异株的免疫逃逸能力也提高。omicron株内部的亚系不断突变，目前已进化的ba.5、ba.7以及刚刚崛起的xbb.1.5。

2、疫苗是有效的新冠病毒预防方式，现有技术主要为灭活类新冠疫苗、重组类新冠疫苗、mrna类新冠疫苗、载体类如腺病毒类新冠疫苗。其中灭活疫苗占全球提供的新冠疫苗剂量的一半，其在大幅减少住院、重症和死亡率方面发挥着重要作用（https://www.nature.com/articles/d41586-021-02796-w）。在灭活疫苗的制备过程中，毒种的筛选是最为关键的一步。选择一个高毒力、高效力的优势毒种对于疫苗的质量至关重要。

3、目前大部分毒种的筛选方法为蚀斑克隆法以及有限稀释法。例如中国专利申请公开cn104109654a公开了一种筛选病毒毒种的方法，其利用蚀斑克隆及有限稀释2种方法通过3次筛选获得了高滴度、高免疫原性的病毒。然而这两种方法耗时较长，采取微量病变法判别一个代次滴度的时间至少需要3-4天。其次，在早期毒种阶段，筛选出的单斑的滴度差异不大，不利于快速判别，需要传代更多次数以便区分。毒种的筛选速度影响整体疫苗的开发速度。

4、因此目前需要开发一种快速的方法用来(辅助)筛选毒种。

技术实现思路

1、本专利技术提供了一种新型的毒种

2、另外，该方法筛选完的毒种的关键抗原（刺突蛋白spike）的相对浓度占比提高、结合特异性抗体的抗原的效价增强以及中和抗体提高。同时后期的滴度也表明筛选出的毒种较好。因此可作为一种新型的方法，辅助用于毒种的筛选。

3、在一个方面，本专利技术提供一种筛选新冠病毒早期毒种的方法，所述方法包括：(1)提供新冠病毒毒株的候选毒种；(2) 测定各毒种的总蛋白含量；和(3) 保持总蛋白上样量一致，比较各毒种的s蛋白含量，选择s蛋白含量高的毒种。

4、在一个实施方式中，步骤(1)还包括对候选毒种进行滴度测定以进行初筛。

5、在一个实施方式中，步骤(2)采用lowry法进行。

6、在一个实施方式中，步骤(3)采用蛋白质印迹western blot进行。

7、在一个实施方式中，所述方法在步骤(3)后还包括步骤(4)：采用elisa筛选有效抗原含量高的毒种。

8、在一个实施方式中，所述步骤(4)包括先采用多抗法进行初筛，然后采用单抗法对初筛结果进行复验证。

9、在一个实施方式中，所述方法在步骤(3)后还包括步骤(5)：采用表面等离子共振法(surface plasmon resonance, spr)测定所选择毒种的亲和力。

10、在一个实施方式中，所述方法在步骤(3)后还包括步骤(6)：测定所选择毒种的免疫原性。

11、在一个实施方式中，所述新冠病毒是阿尔法毒株、贝塔毒株、伽马毒株、德尔塔毒株或奥密克戎毒株，优选是奥密克戎毒株。

12、在另一方面，本专利技术提供一种制造疫苗的方法，将通过上述方法筛选出的新冠病毒早期毒种进一步利用蚀斑克隆及有限稀释法进行筛选，获得所需滴度和/或免疫原性的病毒毒种。

13、有益效果

14、本专利技术与现有技术的蚀斑克隆法以及有限稀释法相比，将病毒毒种的筛选速度提高了3-4倍，特别适合于变异快的rna病毒(例如单链rna病毒)、尤其是新冠病毒的毒种的筛选。通过本专利技术的方法筛选出的毒种无论抗原浓度、免疫原性均显示出优势，且与滴度的结果一致性良好。鉴于该方法的筛选速度明显快于传统的噬斑及有限稀释法，因此可以作为一种辅助方法用于前期毒种的筛选。

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【技术保护点】

1.一种筛选新冠病毒早期毒种的方法，其特征在于，所述方法包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)还包括对候选毒种进行滴度测定以进行初筛。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)采用Lowry法进行。

4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)采用Western blot进行。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法在步骤(3)后还包括步骤(4)：采用ELISA筛选有效抗原含量高的毒种。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)包括先采用多抗法进行初筛，然后采用单抗法对初筛结果进行复验证。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法在步骤(3)后还包括步骤(5)：采用表面等离子共振法SPR测定所选择毒种的亲和力。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法在步骤(3)后还包括步骤(6)：测定所选择毒种的免疫原性。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述新冠病毒是奥密克戎毒株。

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【技术特征摘要】

1.一种筛选新冠病毒早期毒种的方法，其特征在于，所述方法包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)还包括对候选毒种进行滴度测定以进行初筛。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)采用lowry法进行。

4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)采用western blot进行。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法在步骤(3)后还包括步骤(4)：采用elisa筛选有效抗原含量高的毒种。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)包括先采用多抗法进行初...

【专利技术属性】
技术研发人员：张云涛，何振玉，赵玉秀，常恒祯，谢思曼，王宜川，刘英微，
申请(专利权)人：北京生物制品研究所有限责任公司，
类型：发明
国别省市：

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