【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及兽用生物制品，尤其涉及一种a型塞内卡病毒阳性血清及其制备方法。
技术介绍
1、a型塞内卡病毒(senecavirus a，sva)又称为塞内加谷病毒(svv)，是一种小rna病毒，无囊膜包裹，衣壳蛋白呈二十面体，直径在30nm左右，内含一个大小约7.2kb的单股正链rna基因组。猪被认为是sva的易感宿主。sva感染病畜的临床特征与其他水泡疾病的临床特征难以区分，例如口蹄疫(fmd)、猪水疱病(svd)、水疱性口炎(vs)和猪水疱疹(ves)。sva感染的特征性病变包括吻突部、口腔粘膜、蹄和冠状动脉带上出现囊泡，典型的临床症状包括跛行、嗜睡和厌食。近年来，随着越来越多的地区出现sva病例，sva出现了进化并具有了导致猪发病率和死亡率增高的能力，造成的经济损失巨大，严重威胁着养猪业的绿色健康发展。
2、因此开发特定且有效的诊断试剂及疫苗对sva的监测、流行病学调查以及控制非常重要。
3、a型塞内卡病毒阳性血清是目前主要应用于鉴别、检验、诊断的蛋白类物质，在清除细菌和病毒中起着重要的作用，对于兽用生物制品行业的健康发展具有重要意义。在a型塞内卡病毒生物制品的研发过程中，产品免疫效力的检验是至关重要、不可或缺的环节，sva灭活疫苗的效力检验主要依靠动物进行。应用家兔作为兽用疫苗检验替代动物具有价格低、运输便捷等优点。在a型塞内卡病毒诊断产品的研制中，标准参考品主要用于评价该项试验结果是否有效和试验结果的稳定性与可比性，研究者先期进行标准参考品的研制是必要的。
4、目前尚未有商品化的猪塞
技术实现思路
1、基于此，本专利技术首先提供了一种疫苗，其中含有塞内卡病毒svv/ch/zz/2016株病毒液以及montanide isa206佐剂。
2、本专利技术通过对佐剂的大量筛选后发现，选择双相油乳佐剂montanide isa206与svv/ch/zz/2016株病毒液搭配制备的疫苗，注射到动物体内可延长svv/ch/zz/2016株病毒抗原在体内的存留时间，缓慢释放抗原，从而持续刺激机体，更强的激发免疫动物的免疫反应；其中的乳剂成分有助于包裹svv/ch/zz/2016株抗原，保护该病毒抗原不被体液中的酶迅速分解，延长抗原刺激机体的时间；同时，其中的乳剂成分会在注射部位引起细胞浸润，促使抗原呈递细胞的聚集和增殖，从而提高免疫应答水平，获得极高的阳性血清效价。
3、本专利技术的svv/ch/zz/2016病毒株已于2017年11月20日由位于中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所(邮政编码100101)的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为cgmcc no.14886，分类命名为塞尼卡谷病毒seneca valley virus。
4、所述疫苗为灭活疫苗。
5、优选地，疫苗的制备方法包括：
6、(1)将病毒含量为108tcid50/ml以上的初始病毒液灭活后，进行8倍以上浓缩，制得水相；
7、(2)将所述水相与montanide isa206佐剂混合。
8、优选地，步骤(2)中，所述水相与montanide isa206佐剂的体积比为(45～50)：(52～60)。
9、优选地，步骤(2)中，将所述水相与montanide isa 206佐剂在28～32℃下混合。
10、优选地，所述初始病毒液为采用悬浮培养方式培养塞内卡病毒svv/ch/zz/2016株后收获的病毒液。
11、优选地，所述悬浮培养中采用的悬浮细胞为pk-15jy悬浮细胞，所述悬浮培养中采用的培养基为cdpk15培养基。
12、更优选地，步骤(1)中的初始病毒液的病毒含量为108.5tcid50/ml以上。
13、在本专利技术中，所述灭活选用的灭活剂优选为二乙烯亚胺，所述二乙烯亚胺的工作浓度优选为0.001mol/l-0.005mol/l，更优选为0.003mol/l。所述灭活的温度优选为28-32℃，更优选为30℃；所述灭活的时间优选为28-35h，更优选为33h。
14、本专利技术还发现选择二乙烯亚胺(bei)用作病毒灭活剂时，对塞内卡病毒svv/ch/zz/2016株病毒蛋白质成分结构的影响微小，能最大限度地保留该病毒的抗原性。
15、在一些实施方案中，在所述灭活后进行检验，然后将检验合格的病毒液用于纯化浓缩处理。
16、在本专利技术中，所述浓缩采用中空纤维柱，其规格优选为300-500kd，更优选为500kd。500kd的中空纤维柱可截留90％的sva病毒蛋白，收率相较更高，免疫效果好。
17、优选地，所述浓缩的倍数为8～12倍。
18、进一步，本专利技术提供了一种a型塞内卡病毒阳性血清的制备方法，包括：采用上述任一实施方案中的疫苗免疫动物，然后分离动物血清。
19、优选地，所述动物为兔或猪。
20、优选地，所述兔为家兔。
21、优选地，所述动物为健康动物。
22、优选地，在免疫动物前，所述动物的病毒抗原和/或抗体检测结果为阴性；所述病毒包括但不限于：
23、a型塞内卡病毒、口蹄疫病毒、猪瘟病毒、非洲猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型、家兔轮状病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、
24、采用上述经过病毒筛选的动物时，保证了获得血清的纯净性，不含有除a型塞内卡病毒抗体外的其他猪常见病原抗体，且获得的血清特异性好。
25、优选地，所述免疫动物的条件包括：每次免疫动物的所述疫苗的剂量为0.5～5ml/只；免疫次数为2次以上。
26、当所述动物为兔时，兔的体重为1.5～2.0kg；每次免疫动物的所述疫苗的剂量为0.5～2ml/只；免疫次数为2次以上。
27、优选地，所述免疫动物的次数为两次；第一次接种和第二次接种的时间间隔为14-28天，优选为27天；a型塞内卡病毒阳性血清的收获时间为第二次接种后的第n天，n≥7。
28、更优选的，a型塞内卡病毒阳性血清的收获时间为第二次接种后的第14-21天。
29、进一步，本专利技术提供了采用上述任一实施方案中a型塞内卡病毒阳性血清的制备方法制得的a型塞内卡病毒阳性血清。
30、优选地，所述a型塞内卡病毒阳性血清中，塞内卡病毒中和抗体的效价在1:2048以上。
31、进一步，本专利技术还提供了上述任一实施方案中a型塞内卡病毒阳性血清的应用，包本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种疫苗，其特征在于，其中含有塞内卡病毒SVV/CH/ZZ/2016株病毒液以及MONTANIDE ISA 206佐剂。
2.根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于，其制备方法包括：
3.根据权利要求2所述的疫苗，其特征在于，步骤(2)中，所述水相与MONTANIDE ISA206佐剂的体积比为(45～50)：(52～60)。
4.根据权利要求2所述的疫苗，其特征在于，步骤(2)中，将所述水相与MONTANIDEISA206佐剂在28～32℃下混合。
5.根据权利要求2所述的疫苗，其特征在于，所述初始病毒液为采用悬浮培养方式培养塞内卡病毒SVV/CH/ZZ/2016株后收获的病毒液。
6.一种A型塞内卡病毒阳性血清的制备方法，其特征在于，包括：采用权利要求1～5中任一项所述的疫苗免疫动物，然后分离动物血清。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述动物为兔或猪；
8.一种A型塞内卡病毒阳性血清，其特征在于，其由权利要求6或7所述的制备方法制得。
9.根据权利要求8所述的A型
10.权利要求8或9所述的A型塞内卡病毒阳性血清的应用，其特征在于，包括以下至少一方面：
...【技术特征摘要】
1.一种疫苗，其特征在于，其中含有塞内卡病毒svv/ch/zz/2016株病毒液以及montanide isa 206佐剂。
2.根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于，其制备方法包括：
3.根据权利要求2所述的疫苗，其特征在于，步骤(2)中，所述水相与montanide isa206佐剂的体积比为(45～50)：(52～60)。
4.根据权利要求2所述的疫苗，其特征在于，步骤(2)中，将所述水相与montanideisa206佐剂在28～32℃下混合。
5.根据权利要求2所述的疫苗，其特征在于，所述初始病毒液为采用悬浮培养方式培养塞...
【专利技术属性】
技术研发人员：侯丽娜，齐志涛，吉格木德，陈坚，陈九连，刘玉梅，李晓艳，李超，俎红丽，宋志刚，杨青春，贺瑶，张静，王岩，杨波，闫聪，王华，
申请(专利权)人：金宇保灵生物药品有限公司，
类型：发明
国别省市：
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