一种体外诱导IPS细胞分化生成人子宫内膜上皮细胞的方法技术

技术编号：40305678 阅读：5 留言：0更新日期：2024-02-07 20:50

本发明专利技术公开了一种体外诱导IPS细胞分化生成人子宫内膜上皮细胞的方法，具体包括如下步骤：(1)准备IPS细胞和培养基，所述培养基包括培养基A、培养基B和培养基C；(2)将IPS细胞接种到DMEM细胞培养瓶中培养得到第一代细胞；(3)将第一代细胞置于培养基A上培养用胰蛋白酶消化处理，然后离心分离，得到第二代细胞；(4)将第二代细胞接种到培养基B上进行培养，诱导第二代细胞生产细胞株；(5)将细胞株离心后接种到培养基C上进行诱导培养，即可分化生成子宫内膜上皮细胞；本发明专利技术属于细胞分化培养技术领域，具体是一种体外诱导IPS细胞分化生成人子宫内膜上皮细胞的方法，可以通过广泛的细胞来源，简单快速高效的培养出大量子宫内膜上皮细胞。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细胞分化培养，具体是指一种体外诱导ips细胞分化生成人子宫内膜上皮细胞的方法。

技术介绍

1、由机械或者感染等原因引起的子宫内膜基底层损伤，将导致子宫内膜纤维化、斑痕化、宫腔粘连及不孕，治疗困难。利用组织工程技术修复受损子宫内膜是一种非常具有前景的新手段，然而种子细胞来源困难，因此需要将人子宫内膜上皮细胞来源诱导多能干细胞(ips)细胞定向分化用于子宫内膜再生的效应和机制研究。

技术实现思路

1、针对上述情况，为弥补上述现有缺陷，本专利技术提供一种体外诱导ips细胞分化生成人子宫内膜上皮细胞的方法，有充足的子细胞可以用于简单便捷快速制备获得大量的子宫内膜上皮细胞。

2、本专利技术采取的技术方案如下：本专利技术提出的一种体外诱导ips细胞分化生成人子宫内膜上皮细胞的方法，具体包括如下步骤：

3、(1)准备ips细胞和培养基，所述培养基包括培养基a、培养基b和培养基c；

4、(2)取ips细胞接种到盛有dmem培养液的细胞培养瓶中贴壁培养1天，待细胞贴壁后用胰蛋白酶消化离心，得到第一代细胞；

5、(3)将第一代细胞置于培养基a上培养，培养温度为37℃，环境空气为5％co2，待细胞长至85％-90％融合时，用胰蛋白酶消化处理，然后离心分离，得到第二代细胞；

6、(4)将第二代细胞按照8×104～1×104/cm的密度接种到培养基b上进行培养，培养基b诱导第二代细胞生产细胞株；

7、(5)将细胞株转移到离

8、进一步的，所述培养基a以无血清培养基为基础培养基，还包括：质量浓度为10％的胎牛血清、青霉素(100～120u/ml)、链霉素(50～100u/ml)、表皮生长因子(15μg/l)、地塞米松(3mg/l)。

9、进一步的，所述培养基b以dmem/f12为基础培养基，还包括：胎牛血清(10％)、胰岛素(5％)、egf(2nmol/l)、tgf-α(2nmol/l)、胰岛素样生长因子(5nmol/l)、纤维连接蛋白(10mg/ml)和抗坏血酸(20mg/ml)。

10、进一步的，所述培养基c以dmem为基础培养基，还包括：胎牛血清(10％)、胰岛素(5％)、地塞米松(3mg/l)、纤维连接蛋白(10mg/ml)、抗坏血酸(20mg/ml)、表皮生长因子(15μg/l)、wnt抑制剂(3nmol/l)、成纤维细胞生长因子(5nmol/l)和组蛋白乙酰化酶抑制剂(3nmol/l)。

11、进一步的，所述培养基a、培养基b和培养基c的ph值均为7.2。

12、采用上述结构本专利技术取得的有益效果如下：本专利技术提出的一种体外诱导ips细胞分化生成人子宫内膜上皮细胞的方法，通过培养基a、培养基b和培养基c的定向诱导，有效的提高了ips细胞定向分化效率，从而增高了子宫内膜上皮细胞的形成率，且由于ips来源广泛，可以用于迅速大量分化制备子宫内膜上皮细胞。

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【技术保护点】

1.一种体外诱导IPS细胞分化生成人子宫内膜上皮细胞的方法，其特征在于：具体包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种体外诱导IPS细胞分化生成人子宫内膜上皮细胞的方法，其特征在于：所述培养基A以无血清培养基为基础培养基，还包括：质量浓度为10％的胎牛血清、青霉素(100～120U/mL)、链霉素(50～100U/mL)、表皮生长因子(15μg/L)、地塞米松(3mg/L)。

3.根据权利要求1所述的一种体外诱导IPS细胞分化生成人子宫内膜上皮细胞的方法，其特征在于：所述培养基B以DMEM/F12为基础培养基，还包括：胎牛血清(10％)、胰岛素(5％)、EGF(2nmol/L)、TGF-α(2nmol/L)、胰岛素样生长因子(5nmol/L)、纤维连接蛋白(10mg/ml)和抗坏血酸(20mg/ml)。

4.根据权利要求1所述的一种体外诱导IPS细胞分化生成人子宫内膜上皮细胞的方法，其特征在于：所述培养基C以DMEM为基础培养基，还包括：胎牛血清(10％)、胰岛素(5％)、地塞米松(3mg/L)、纤维连接蛋白(10mg/ml)、抗坏血酸(20

5.根据权利要求1所述的一种体外诱导IPS细胞分化生成人子宫内膜上皮细胞的方法，其特征在于：所述培养基A、培养基B和培养基C的PH值均为7.2。

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【技术特征摘要】

1.一种体外诱导ips细胞分化生成人子宫内膜上皮细胞的方法，其特征在于：具体包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种体外诱导ips细胞分化生成人子宫内膜上皮细胞的方法，其特征在于：所述培养基a以无血清培养基为基础培养基，还包括：质量浓度为10％的胎牛血清、青霉素(100～120u/ml)、链霉素(50～100u/ml)、表皮生长因子(15μg/l)、地塞米松(3mg/l)。

3.根据权利要求1所述的一种体外诱导ips细胞分化生成人子宫内膜上皮细胞的方法，其特征在于：所述培养基b以dmem/f12为基础培养基，还包括：胎牛血清(10％)、胰岛素(5％)、egf(2nmol/l)、tgf-α(2nmol/l)、胰岛素样生长...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈风辉，
申请(专利权)人：广东金专生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：

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