一种用于修复膝关节损伤的干细胞制剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种用于修复膝关节损伤的干细胞制剂，通过间接共同培养得到的冻存间充质干细胞与富集血小板血浆结合制得，冻存间充质干细胞通过间充质干细胞、软骨细胞和滑膜细胞间接共同培养得到，冻存间充质干细胞培养时添加细胞生长因子，并同时公开了一种用于修复膝关节损伤的干细胞制剂及其制备方法。本发明专利技术涉及生物技术技术领域，具体提供了一种用于修复膝关节损伤的干细胞制剂及其制备方法，通过间充质干细胞、软骨细胞和滑膜细胞的配合有效实现了膝关节的损伤的修复，并通过富集血小板血浆的联合在减轻膝关节损伤症状的同时，又可促进间充质干细胞在膝关节腔内成软骨分化，以实现在对膝关节软骨损伤进行细胞修复与再生。实现在对膝关节软骨损伤进行细胞修复与再生。

【技术实现步骤摘要】
一种用于修复膝关节损伤的干细胞制剂及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物技术
，具体为一种用于修复膝关节损伤的干细胞制剂及其制备方法。

技术介绍

[0002]关节软骨是一层覆盖于关节表面的透明软骨，由软骨细胞和基质组成。关节软骨表面光滑，能够减少摩擦，在承受运动力学负荷的同时保护关节不易磨损，在关节活动中起重要作用。造成关节软骨损伤/缺损的原因主要包括长期大量、高负荷运动及中老年骨性关节炎等。由于关节软骨缺少血管、神经及淋巴组织，所以自我修复能力有限，一旦受损除影响正常关节活动外，还易发生其他进行性病变。
[0003]根据调查研究的显示，我国的骨关节患者达到了一亿以上，骨关节患者占我国总人口的近10％之多，而骨关节炎中最为常见的便是膝关节炎，根据相关数据显示，膝关节炎致残率全球第二，且发病率会随着年龄的增长而变高，可见，膝关节炎已经是伴随和困扰现代人的一个常见病。一般膝关节软骨在青春期时期软骨厚度为2.5公分，随着年龄的慢慢的增长和使用劳损，软骨厚度会变得越来越薄，一般在55岁时软骨厚度只剩下仅仅0.5公分，而且如果膝关节受损或者长期受压的话，软骨厚度可能更薄，严重时还可能会出现骨刺或破裂。
[0004]常规的治疗为通过NSAIDs类药物、润滑剂及类固醇激素关节腔注射、软骨保护剂为主的治疗方法，但是这些治疗方法的疗效较为有限，不能够有效的阻止疾病的进展，随着干细胞研究的不断发展和普及，越来越多的研究者将干细胞技术应用于膝关节损伤的修复。

技术实现思路

[0005]针对上述情况，为弥补上述现有缺陷，本专利技术提供了一种疗效稳定性高，且制备方法简单的用于修复膝关节损伤的干细胞制剂及其制备方法。
[0006]本专利技术提供如下的技术方案：本专利技术提供的一种用于修复膝关节损伤的干细胞制剂，通过间接共同培养得到的冻存间充质干细胞与富集血小板血浆结合制得，所述冻存间充质干细胞通过间充质干细胞、软骨细胞和滑膜细胞间接共同培养得到，所述冻存间充质干细胞培养时添加细胞生长因子，促进细胞培养。
[0007]进一步地，所述间充质干细胞为脐带间充质干细胞或自体脂肪间充质干细胞。
[0008]进一步地，所述富集血小板血浆为自体富集血小板血浆。
[0009]作为优选地，所述间充质干细胞、软骨细胞和滑膜细胞的接种密度为1：1：3。
[0010]进一步地，所述冻存间充质干细胞与富集血小板血浆的联用体积比为4：1。
[0011]本专利技术提供的一种用于修复膝关节损伤的干细胞制剂及其制备方法，具体包括下列步骤：
[0012](1)在培养瓶内的培养基上均匀涂抹分布细胞生长因子，将间充质干细胞、软骨细
胞和滑膜细胞按照1：1：3的接种密度接种在涂抹有细胞生长因子的培养基上；
[0013](2)将培养瓶放置于37℃、CO2的浓度为5％的恒温培养箱中培养4～7天；
[0014](3)将培养瓶中的液体移至离心管内，在1500r/min的条件下离心5～7min得到一级上清液和一级下层细胞，将一级上清液再以1900r/min离心3～5min得到二级上清液和二级下层细胞，弃一级上清液和二级上清液，取一级下层细胞和二级下层细胞，将一级下层细胞和二级下层细胞混合，再加入生理盐水稀释后以1300r/min的速度离心9～15min，弃上层上清液，取下层沉淀细胞，对下层沉淀细胞冻存即可得到冻存间充质干细胞；
[0015](4)使用时将冻存间充质干细胞经水浴复苏，用生理盐水洗后、离心，弃上清；
[0016](5)将步骤(4)复苏得到的冻存间充质干细胞与富集血小板血浆混合制成干细胞制剂，再加入生理盐水为辅剂重悬细胞，调整细胞浓度后即可采用注射器吸入用于修复膝关节损伤。
[0017]采用上述结构本专利技术取得的有益效果如下：本专利技术提出的一种用于修复膝关节损伤的干细胞制剂及其制备方法，通过间充质干细胞、软骨细胞和滑膜细胞的配合有效实现了膝关节的损伤的修复，并通过富集血小板血浆的联合在减轻膝关节损伤症状的同时，又可促进间充质干细胞在膝关节腔内成软骨分化，以实现在对膝关节软骨损伤进行细胞修复与再生。该干细胞制剂的治疗效果显著，且治疗周期短，对于膝关节损伤修复有着优良的防治作用。
具体实施方式
[0018]下面将结合本专利技术的实施例，对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例；基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0019]一种用于修复膝关节损伤的干细胞制剂，通过间接共同培养得到的冻存间充质干细胞与富集血小板血浆结合制得，所述冻存间充质干细胞与富集血小板血浆的联用体积比为4：1，所述冻存间充质干细胞通过间充质干细胞、软骨细胞和滑膜细胞间接共同培养得到，所述冻存间充质干细胞培养时添加细胞生长因子，促进细胞培养，所述间充质干细胞为脐带间充质干细胞或自体脂肪间充质干细胞，所述富集血小板血浆为自体富集血小板血浆，所述间充质干细胞、软骨细胞和滑膜细胞的接种密度为1：1：3。
[0020]本专利技术提供的一种用于修复膝关节损伤的干细胞制剂及其制备方法，具体包括下列步骤：
[0021](1)在培养瓶内的培养基上均匀涂抹分布细胞生长因子，将间充质干细胞、软骨细胞和滑膜细胞按照1：1：3的接种密度接种在涂抹有细胞生长因子的培养基上；
[0022](2)将培养瓶放置于37℃、CO2的浓度为5％的恒温培养箱中培养4～7天；
[0023](3)将培养瓶中的液体移至离心管内，在1500r/min的条件下离心5～7min得到一级上清液和一级下层细胞，将一级上清液再以1900r/min离心3～5min得到二级上清液和二级下层细胞，弃一级上清液和二级上清液，取一级下层细胞和二级下层细胞，将一级下层细胞和二级下层细胞混合，再加入生理盐水稀释后以1300r/min的速度离心9～15min，弃上层上清液，取下层沉淀细胞，对下层沉淀细胞冻存即可得到冻存间充质干细胞；
[0024](4)使用时将冻存间充质干细胞经水浴复苏，用生理盐水洗后、离心，弃上清；
[0025](5)将步骤(4)复苏得到的冻存间充质干细胞与富集血小板血浆混合制成干细胞制剂，再加入生理盐水为辅剂重悬细胞，调整细胞浓度后即可采用注射器吸入用于修复膝关节损伤。
[0026]患者1，女，年龄56岁，膝关节磨损，注射本方案提供的干细胞制剂，每周注射1次，注射9周，膝关节肿胀消失，步行无疼痛，屈曲角度增大效果明显。
[0027]患者2，女，年龄65岁，膝关节磨损，注射本方案提供的干细胞制剂，每周注射1次，注射15周，膝关节肿胀部分消失，步行偶有疼痛，屈曲角度增大效果明显。
[0028]要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于修复膝关节损伤的干细胞制剂，其特征在于，通过间接共同培养得到的冻存间充质干细胞与富集血小板血浆结合制得，所述冻存间充质干细胞通过间充质干细胞、软骨细胞和滑膜细胞间接共同培养得到，所述冻存间充质干细胞培养时添加细胞生长因子。2.根据权利要求1所述的一种用于修复膝关节损伤的干细胞制剂，其特征在于，所述间充质干细胞为脐带间充质干细胞或自体脂肪间充质干细胞。3.根据权利要求1所述的一种用于修复膝关节损伤的干细胞制剂，其特征在于，所述富集血小板血浆为自体富集血小板血浆。4.根据权利要求1所述的一种用于修复膝关节损伤的干细胞制剂，其特征在于，所述间充质干细胞、软骨细胞和滑膜细胞的接种密度为1：1：3。5.根据权利要求1所述的一种用于修复膝关节损伤的干细胞制剂，其特征在于，所述冻存间充质干细胞与富集血小板血浆的联用体积比为4：1。6.根据权利要求1～3任一项所述的一种用于修复膝关节损伤的干细胞制剂及其制备方法，其特征在于，具体包括下列步骤：(1)在培养瓶内的...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈风辉，
申请(专利权)人：广东金专生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：