具有改善免疫应答作用的软骨提取物、其制备方法及其用途技术

本发明专利技术公开了具有改善免疫应答作用的软骨提取物、其制备方法及其用途。本发明专利技术的软骨提取物是以动物软骨为原料，通过加入质量比为4：1至1：1的透明质酸钠与香菇多糖，得到含有对于改善免疫应答为有效量的未变性II型胶原蛋白的软骨提取物，能够同时防止所述软骨提取物在贮存期间的微生物腐败和II型胶原蛋白的变性，从而提高了产品的安全性和耐贮性。本发明专利技术的所得软骨提取物具有安全性高、有效性强等优点，具有改善免疫应答、提高血清抗炎因子如TGF

【技术实现步骤摘要】
具有改善免疫应答作用的软骨提取物、其制备方法及其用途


[0001]本专利技术涉及一种具有改善免疫应答作用的软骨提取物、其制备方法及其用途。更具体地，本专利技术涉及一种具有改善免疫应答作用的、含有对于改善免疫应答为有效量的非变性II型胶原蛋白的软骨提取物，以及涉及所述软骨提取物的制备方法及其用途。

技术介绍

[0002]胶原蛋白(collagen)是一种生物高分子，是动物结缔组织中的主要成分，也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白。胶原蛋白一般占动物体内蛋白质总量的25～30质量％，在某些动物体内甚至高达80质量％以上。目前已发现的胶原蛋白有27种，常见类型为Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、
Ⅴ
型和
Ⅺ
型。由于胶原蛋白具有低毒性、低抗原性、低免疫性、引导细胞再生和与人体相容性较好等特点，因此已被广泛应用于食品、保健食品、生物医学材料和临床医疗等领域。目前市售的胶原蛋白多为经过水解后的胶原蛋白，其主要成分是多肽，分子量分布在200～20000道尔顿(Da)的范围内。
[0003]软骨(cartilage)即软骨组织，是一种以支持作用为主的结缔组织，由软骨细胞和软骨基质组成，含有丰富的Ⅱ型胶原蛋白和软骨多糖。II型胶原蛋白是一种典型的纤维状蛋白质，由三条相同的α链组成的，主链以β
‑
折叠和无规则卷曲结构为主，不包含α
‑
螺旋；甘氨酸残基占氨基酸总数的30％左右，是羟脯氨酸含量的4～5倍；不含有色氨酸，且芳香族氨基酸含量较少；水解的α1肽链分子质量均在110～130千道尔顿(KDa)之间；变性温度均在34℃以上。
[0004]现有技术中已有报道从软骨中提取出含非变性II型胶原蛋白的软骨提取物。例如，CN106916870A中公开了一种含非变性II型胶原蛋白的软骨提取物的制备方法，所述方法依次包括脱脂、消毒、匀浆、酶解、过滤和干燥步骤。在该CN106916870A的实施例中，所制备出的软骨提取物中含有3.9～12.6质量％的II型胶原蛋白。但是，上述CN106916870A对于其制备的软骨提取物如何实现稳定贮存没有任何提及。
[0005]对于包括II型胶原蛋白在内的蛋白质产品，如何实现在贮存期内蛋白质的防腐(防止腐败菌、致病菌的生长繁殖)是非常重要的。目前已有的用于实现贮存期内有效防腐的手段可包括高温处理(H)、低温冷藏或冻结(t)、酸化(pH)、降低氧化还原值、添加防腐剂等等。但是，上述高温处理(H)、低温冷藏或冻结(t)、酸化(pH)、降低氧化还原值这些方法在实现防腐的同时，几乎都会造成蛋白质变性的后果，而添加防腐剂不符合现代人们追求绿色、不加防腐剂的消费潮流。另外，蛋白质产品自身随着贮存时间的增长，蛋白质发生变性的风险也会逐渐增加。
[0006]为了在蛋白质贮存期内实现防腐的同时有效防止蛋白质变性，现有技术中也有提出了一些方法，其中的一种方法是教导将抗微生物介质(例如次氯酸盐)与离子化盐(例如氯化钠、氯化钾)组合用于提高蛋白质产品(例如II型胶原蛋白)在贮存过程中的防腐及防止蛋白质变性。但是，所述抗微生物介质(例如次氯酸盐)具有氧化性能、本身对人体健康是有害的，若摄入人体会导致潜在的健康风险；而所述离子化盐(例如氯化钠、氯化钾)若过量
摄入人体可能导致体内高钠、高钾，存在引发高钠血症或高钾血症的风险。因此，这种教导的方法并非理想。
[0007]对于II型胶原蛋白分子而言，根据免疫应答机制，能够引起免疫应答反应的必须是完整的未变性II型胶原蛋白分子。II型胶原蛋白在贮存过程中如果发生腐败菌和/或致病菌的生长繁殖，则会因制品安全性问题而带来巨大的使用风险。另一方面，II型胶原蛋白在贮存过程中一旦发生变性，则不能发挥有效的免疫应答作用。因此，现有技术中对于含II型胶原蛋白的制品如何在防腐的同时防止蛋白质变性的技术一直存在需求。

技术实现思路

[0008]本专利技术正是为解决上述现有技术中的问题而作出的。本专利技术的目的在于提供一种具有改善免疫应答作用的软骨提取物，所述软骨提取物含有对于改善免疫应答为有效量的II型胶原蛋白，并且在贮存期间能够在防腐的同时有效防止所述II型胶原蛋白的变性，从而在贮存后仍维持改善免疫应答的作用。本专利技术还提供所述软骨提取物的制备方法和用途。
[0009]出人意料地，本专利技术人发现通过在所述含有非变性II型胶原蛋白的软骨提取物的制备过程中加入特定质量比的透明质酸钠与香菇多糖，则所述透明质酸钠与香菇多糖能够在所制得的软骨提取物的贮存期间同时实现防腐的作用与防止所述II型胶原蛋白变性的作用。本专利技术正是基于这一发现而作出的。
[0010]具体地，本专利技术的一个实施方式涉及一种具有改善免疫应答作用的软骨提取物，该软骨提取物含有对于改善免疫应答为有效量的非变性II型胶原蛋白，其中该软骨提取物中加入了透明质酸钠与香菇多糖，其中所述透明质酸钠对香菇多糖的质量比为4:1
‑
1:1。
[0011]在一个优选实施方式中，所述软骨提取物含有2～20质量％的非变性II型胶原蛋白。
[0012]在一个优选实施方式中，所述透明质酸钠对香菇多糖的质量比为4:1
‑
2:1。
[0013]在一个优选实施方式中，所述软骨提取物是以软骨作为原料制得的，并且基于作为原料的软骨的总质量，所述透明质酸钠与香菇多糖的总加入量为10～60质量％，优选为20～30质量％。
[0014]本专利技术的另一个实施方式涉及一种制备具有改善免疫应答作用的软骨提取物的方法，其中在以软骨为原料制备软骨提取物的过程中，加入了透明质酸钠与香菇多糖，其中所述透明质酸钠对香菇多糖的质量比为4:1
‑
1:1。
[0015]在一个优选实施方式中，所述方法包括以下步骤：
[0016]1)以软骨为原料，去除软骨中的脂质成分；
[0017]2)将步骤1)中所得去除脂质成分后的软骨破碎而实现匀浆化；
[0018]3)向步骤2)所得的匀浆中加入选自弹性蛋白酶、无花果蛋白酶和生姜蛋白酶中的至少一者进行酶解；
[0019]4)向步骤3)所得的酶解物中加入透明质酸钠与香菇多糖；
[0020]5)将步骤4)的所得物进行冷冻干燥获得软骨提取物。
[0021]在一个优选实施方式中，在所述步骤3)中，加入弹性蛋白酶、无花果蛋白酶和生姜蛋白酶这三者。
[0022]在一个优选实施方式中，所述透明质酸钠对香菇多糖的质量比为4:1
‑
2:1。
[0023]在一个优选实施方式中，基于作为原料的软骨的总质量，所述透明质酸钠与香菇多糖的总加入量为10～60质量％，优选为20～30质量％。
[0024]在一个优选实施方式中，将所述步骤5)冷冻干燥之后的软骨提取物进一步粉碎获得粉碎物，然后在常温下保存。
[0025]在一个优选实施方式中，在所述步骤1)与步骤2)之间还包括以乙醇进行的消毒步骤。
[0026]在一个优选实施方式中，在所述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有改善免疫应答作用的软骨提取物，所述软骨提取物含有对于改善免疫应答为有效量的非变性II型胶原蛋白，其特征在于，该软骨提取物中加入透明质酸钠和香菇多糖，其中透明质酸钠对香菇多糖的质量比为4:1
‑
1:1。2.根据权利要求1所述的具有改善免疫应答作用的软骨提取物，其特征在于，所述软骨提取物含有2～20质量％的非变性II型胶原蛋白。3.根据权利要求1或2所述的具有改善免疫应答作用的软骨提取物，其特征在于，所述透明质酸钠对香菇多糖的质量比为4:1
‑
2:1。4.根据权利要求1～3中任一项所述的具有改善免疫应答作用的软骨提取物，其特征在于，所述软骨提取物是以软骨作为原料制得的，基于作为原料的软骨的总质量，所述透明质酸钠和香菇多糖的总加入量为10～60质量％，优选为20～30质量％。5.一种制备权利要求1所述的具有改善免疫应答作用的软骨提取物的方法，其特征在于，所述方法包括在以软骨为原料制备软骨提取物的过程中，加入透明质酸钠和香菇多糖，其中透明质酸钠对香菇多糖的质量比为4:1
‑
1:1。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1)以软骨为原料，去除软骨中的脂质成分；2)将步骤1)中所得去除脂质成分后的软骨进行破碎而实现匀浆化；3)向步骤2)所得的匀浆...

【专利技术属性】
技术研发人员：王海燕，刘爱青，闫征，刘利格，
申请(专利权)人：北京盛美诺生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：