给药人IL-18治疗创伤的方法技术

本发明专利技术一般涉及人ＩＬ－１８在治疗皮肤创伤、外科创伤、腿部溃疡、糖尿病患者溃疡、胃肠道粘膜炎、口腔粘膜炎以及肺损伤中的用途，所述人ＩＬ－１８也被认为是干扰素－γ－诱导因子（ＩＧＩＦ）。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术一般涉及人IL-18在治疗创伤中的应用，所述人IL-18被认为是干扰素-γ-诱导因子(IGIF)。
技术介绍
本研究的起因是由于将分泌性蛋白质治疗靶向用于其发挥功能的部位(体液或细胞膜)会相对减轻痛苦。分泌性蛋白质以及跨膜蛋白质的胞外区域可以直接被给药至体液，或者能通过自然途径到达体液或膜。将蛋白质分泌至细胞外空间的自然途径是通过真核生物中的内质网以及原核生物中的内膜(Palade，Science，189，347(1975)；Milstein等，Nature New Biol.，239，117(1972)；Blobel等，J.Cell Biol.，67，835(1975))。另一方面，还不清楚蛋白质从细胞外部导入至细胞液的自然途径(除了胞饮，蛇毒素侵入至细胞的机制)。因此细胞靶向蛋白治疗法在本
是非常困难的。IL-18是最近发现的新的细胞因子。活性人IL-18含有157个氨基酸残基。其具有有效的生物活性，包括诱导T细胞和脾细胞生成干扰素γ-，增强NK细胞的杀伤活性以及促进幼稚CD4+T细胞分化成Th1细胞。另外，人IL-18增加GM-CSF的生成并减小IL-10的生成。IL-18已显示出较IL-12更强的干扰素γ诱导作用，以及具有不同的受体并且利用特殊的信号转导通路。CD4+T细胞是所用免疫应答的重要调控因素。它被分为两个亚型，即Th1和Th2。根据其能分泌的不同细胞因子来确定各个亚型。有趣的是，对分化最有效的诱导剂是细胞因子本身。从幼稚前体至Th2细胞的发育受到IL-4的诱导。IL-12早于IL-18被发现，被认为是重要的Th1诱导细胞因子。IL-18也是一种Th1诱导细胞因子，并且在刺激干扰素γ生成方面比IL-12更有效。Th1细胞分泌IL-2、干扰素γ以及TNF-β。干扰素γ是Th1细胞因子的特征，它直接作用于巨噬细胞增强其杀微生物作用(microbiocidal)和吞噬活性。结果，激活的巨噬细胞可以有效地破坏细胞内的病原体以及肿瘤细胞。Th2细胞产生IL-4、IL-5、IL-6、IL-10以及IL-13，它们通过协助B细胞发育成产生抗体的细胞而发挥作用。综合考虑，Th1细胞是形成细胞介导的免疫的主要原因，而Th2细胞是体液免疫的原因。创伤修复涉及包括多个细胞类型、细胞外基质成分以及多种介质包括生长因子和细胞因子的的高度的有机相互作用。创伤修复可以由外伤、微生物或化学物质而启动，这些引起组织损伤。虽然组织的完整性的修复是先天的宿主免疫应答，但是当创伤修复过程受到破坏时有多种情况。一些生长因子已经用于或尝试用于经放射或化学治疗但效果有限的癌症患者来预防粘膜炎。Peterson Adv.Stud.Med.，4(4B)S299-S310，(2005)。在四项涉及接受治疗的癌症患者的研究的2项以上中，粒细胞集落刺激因子(优保津)对粘膜炎的发病率以及严重度有中等的效果。虽然结果不一致，但是粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(沙格司亭)减轻由化学治疗和放射诱导的粘膜炎的严重度。对于粒细胞集落刺激因子和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子均仅证明了其对预防口腔粘膜炎的效果。研究显示，角化细胞生长因子(Palifermin)非常有可能预防粘膜炎，它可以减少口腔粘膜炎的发病率并可以缩短口腔粘膜炎的病程。随着针对粘膜炎病理生理学的制剂的出现，临床医生不再需要改变放射或者化学治疗法，而是要调整治疗设计，加入可以减少粘膜炎的发病率的制剂。非常明显，这需要开发一种可以增强创伤修复的新的治疗性蛋白质，特别是治疗皮肤创伤，外科创伤，腿部溃疡，糖尿病患者溃疡，粘膜炎特别是胃肠道粘膜炎和口腔粘膜炎，以及肺损伤。附图说明图1显示了天然人IL-18的氨基酸序列(SEQ ID NO1)。图2显示了鼠IL-18的氨基酸序列(SEQ ID NO2)。图3显示了鼠血小板来源的生长因子-β(PDGF-β)的氨基酸序列(SEQ IDNO3)。通过除去一个信号肽(-20--1)以及N-端(1-61)和C-端(171-221)的前肽(划线部分)，得到成熟的小鼠PDGF-β。图4显示了人KGF的氨基酸序列(SEQ ID NO4)。图5显示了局部给药在腺病毒中编码的鼠IL-18(SEQ ID NO2)对ob/ob小鼠的创伤修复的作用。每个数据均表示各组的平均值。图6显示每日通过腹膜内注射全身递送鼠IL-18的纯化蛋白(SEQ IDNO2)对ob/ob小鼠的创伤修复的作用。每个数据均表示各组的平均值。图7显示了每日局部递送人IL-18(SEQ ID NO1)对ob/ob小鼠的创伤修复的作用。每个数据均表示各组的平均值。
技术实现思路
在EP 0692536A2、EP 0712931A2、EP0767178A1以及WO 97/2441号专利中公开了人IL-18多肽。人IL-18的氨基酸序列以SEQ ID NO1列出。人IL-18多肽为干扰素γ-诱导多肽。它们对诱导细胞介导的免疫起重要的作用，包括通过T细胞和脾细胞诱导干扰素γ生成、增强NK细胞的杀伤活性以及促进天然CD4+T细胞分化成Th1细胞。IL-18可以用于修复患者创伤，包括但不限于皮肤创伤，外科创伤，腿部溃疡，糖尿病溃疡，压迫性溃疡、粘膜炎，特别是胃肠道粘膜炎、口腔粘膜炎，以及肺修复。创伤修复与受损细胞再生成同类细胞有关。创伤修复的过程包括下列细胞性活动的系统协调增殖、迁移、分化以及再塑。细胞因子、化学因子、生长因子以及作为细胞介质的与特殊细胞有机相连(orchestrate)的粘附分子均参与这些活动。Kampfer等，Molec.Med.6(12)10160-1027(2000)。白介素-18(IL-18)是一种促炎症反应细胞因子，可以诱导肿瘤坏死因子-α、白介素1-β以及CC和CXC化学因子，它们在创伤修复过程中的炎症性阶段发挥重要作用。Puren等，J.Clin.Invest.，101711-721(1998)。已经确定，一些不同的细胞类型包括角质化细胞和活化的巨噬细胞可以合成IL-18，所述角质化细胞和活化的巨噬细胞均在创伤修复中发挥重要作用。用人IL-18处理ConA-刺激的外周血液单核细胞(PBMC)的体外培养物可以诱导粒细胞单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)的生成。Ushio等，J.Immunol.，1564274-4279(1996)。另外，IL-18显示出诱导T-细胞和NK细胞生成干扰素γ(IFN-γ)的作用。粒细胞单核细胞集落刺激因子显示出促进伤口愈合的作用(Arnold等，J.Wound Care)，54400-402(1995)，并已经在临床用于治疗患有慢性静脉腿部溃疡(venous legulcers)的患者。DaCosta等，Wound Rep.Reg.717-25(1999)。在创伤修复的鼠切除模型中，我们已经证明IL-18促进创伤修复。IL-18促进创伤修复的机制可能是由于细胞因子的促炎症反应的性质，或者是作为生长因子的诱导剂例如粒细胞单核细胞集落诱导因子。本专利技术的多肽可以通过公知的方法从重组细胞培养物中回收和纯化，这些公知方法包括硫酸铵或乙醇沉淀、酸提取、阴离子或阳离子交换色谱法、磷酸纤维素色谱法、疏水作用色谱法、亲和色谱法、羟磷灰石色谱法、凝集素色谱法以本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在需要治疗的患者中治愈创伤的方法，包括向所述患者给药治疗有效剂量的人ＩＬ－１８多肽（ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１）的步骤。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱迪森李，金伯利A戴德，
申请(专利权)人：史密丝克莱恩比彻姆公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]