本发明专利技术涉及基因工程和医药领域，具体地，本发明专利技术涉及人蛋白神经突起生长素在创伤愈合中的应用。本发明专利技术提供了人蛋白神经突起生长素在创伤愈合中的应用。创伤愈合是一个非常复杂的过程。创伤不仅使生物体局部发生一系列变化，同时还可引发不同程度的全身性反应，并且创伤处会给患者带来不同程度的痛苦感，因此，患者总是希望创伤尽快愈合。本发明专利技术的神经突起生长素能促进血管生长，增强血管内皮细胞的粘附和迁移能力，可以用于制备促进创伤愈合的药剂，帮助患者缩短疗程，减轻痛苦。本发明专利技术的神经突起生长素可以用作制备促进血管生长药剂，还可以用于断肢再植辅助药剂。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程和医药领域，具体地，本专利技术涉及人蛋白神经突起生长素 在创伤愈合中的应用。
技术介绍
神经突起生长素(Neuritin, NRN1)是1997年发现的一个神经营养因子，全长 142aa，分子量15.3KD。主要表达于脑、肝脏、骨骼肌的卫星细胞，心脏和肺也有 少量表达。以磷酯酰肌醇锚定位点(GPI),锚定于细胞膜上，可通过磷脂酶C(PLC) 的作用，从膜上脱离并以可溶的形式分布于体液中。作为一种细胞因子起作用；神 经突起生长素具有很强的促进神经突起生长，突触连接及成熟的作用，用重组表达 的神经突起生长素蛋白刺激原代培养的海马神经元和大脑皮质细胞，可引起神经轴 突和树突明显增多延长，在爪蟾和哺乳动物视神经元突起生长的研究中，神经突起 生长素也表现出相同的作用。在我们的前期研究中同样证实了神经突起生长素可以 促进PC12细胞突起的生长。神经突起生长素是一个进化上非常保守的蛋白，人与 大鼠的蛋白质序列100%同源，而且其表达谱也并不局限于神经系统，证明它是一个 生物学功能非常重要的蛋白。特别是近两年，神经突起生长素在神经系统之外的作 用逐渐被人们所认识。神经突起生长素在与骨骼肌再生密切相关的卫星细胞中呈高 表达，有助于骨骼肌的损伤后修复，证明神经突起生长素能够调节细胞骨架的运动， 在神经系统外也具有引导功能。创伤愈合是一个非常复杂的过程。创伤不仅使生物体局部发生一系列变化，同 时还可引发不同程度的全身性反应；在这一过程有许多细胞参与，每种细胞又分泌 多种因子，这些细胞之间、因子之间、细胞和因子之间存在错综复杂的关系，因此 它涉及细胞运动、粘附、通讯、增殖和分化等细胞生物学的各个方面。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供人蛋白神经突起生长素(即人神经突起生长素NRN1， NCBI登录号为NP一057672)的新用途。本专利技术提供了人蛋白神经突起生长素在创伤愈合中的应用。 本专利技术中，小鼠角膜实验表明，蛋白神经突起生长素可明显促进小鼠角膜处的 血管生成；划痕实验表明，蛋白神经突起生长素可明显促进血管内皮细胞迁移；细 胞粘附实验表明，蛋白神经突起生长素可明显增强细胞的粘附力。可见，神经突起 生长素可以促进创伤处血管愈合。本专利技术中，术语神经突起生长素蛋白(NRN1)指可促进肿瘤生长的、序 列与(NCBI登陆号NP 057672)所示多肽序列至少70%同源性的NRN1多肽及其 变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)若干个(通常为1-50个，较佳地1-30 个，更佳地l-20个，最佳地1-10个)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端 和/或N末端添加一个或数个(通常为20个以内，较佳地为10个以内，更佳地为5 个以内)氨基酸。例如，在本领域中，用性能相近或相似的氨基酸进行取代时，通常 不会改变蛋白质的功能。又比如，在C末端和/或N末端添加一个或数个氨基酸通常 也不会改变蛋白质的功能。该术语还包括人NRN1蛋白的活性片段和活性衍生物。该多肽的变异形式包括同源序列、保守性变异体、等位变异体、天然突变 体、诱导突变体、在高或低的严紧度条件下能与人NRN1DNA杂交的DNA所编码 的蛋白、以及利用抗人NRN1多肽的抗血清获得的多肽或蛋白。本专利技术还提供了其 他多肽，如包含人NRN1多肽或其片段的融合蛋白。除了几乎全长的多肽外，本发 明还包括了人NRN1多肽的可溶性片段。通常，该片段具有人NRN1多肽序列的至 少约10个连续氨基酸，通常至少约30个连续氨基酸，较佳地至少约50个连续氨基 酸，更佳地至少约80个连续氨基酸，最佳地至少约IOO个连续氨基酸。本专利技术还提供人NRN1蛋白或多肽的类似物。这些类似物与天然人NRN1多 肽的差别可以是氨基酸序列上的差异，也可以是不影响序列的修饰形式上的差异， 或者兼而有之。这些多肽包括天然或诱导的遗传变异体。诱导变异体可以通过各种 技术得到，如通过辐射或暴露于诱变剂而产生随机诱变，还可通过定点诱变法或其他已知分子生物学的技术。类似物还包括具有不同于天然L-氨基酸的残基(如D-氨 基酸)的类似物，以及具有非天然存在的或合成的氨基酸(如e、 Y-氨基酸)的类似物。 应理解，本专利技术的多肽并不限于上述例举的具有代表性的多肽。修饰(通常不改变一级结构)形式包括体内或体外的多肽的化学衍生形式如乙 酰化或羧基化。修饰还包括糖基化，如那些在多肽的合成和加工中或进一步加工步 骤中进行糖基化修饰而产生的多肽。这种修饰可以通过将多肽暴露于进行糖基化的 酶(如哺乳动物的糖基化酶或去糖基化酶)而完成。修饰形式还包括具有磷酸化氨基酸 残基(如磷酸酪氨酸，磷酸丝氦酸，磷酸苏氨酸)的序列。还包括被修饰从而提高了其 抗蛋白水解性能或优化了溶解性能的多肽。本专利技术的NRN1蛋白可以采用各种常规的制备方法制备。如基因工程方法或者人工合成方法等。例如，可将NRN1基因表达为蛋白而得。本专利技术的NRN1基因可以采用各种常规的制备方法制备。本专利技术的NRN1基 因序列通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法， 可根据本专利技术的NRN1核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售 的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板，扩增 而得有关序列。在本专利技术中，术语NRN1基因指编码具有NRN1蛋白活性的多肽的核苷 酸序列，如核苷酸的序列号为(NCBI登陆号NM一016588)的序列及其简并序列。 该简并序列是指该核酸序列开放阅读框中，有一个或多个密码子被编码相同氨基酸 的简并密码子所取代后而产生的序列。由于密码子的简并性，所以与该核酸序列开 放阅读框序列同源性低至约70%的简并序列也能编码出神经元分化相关基因NRN1 的序列。该术语还包括能在中度严紧条件下，更佳地在高度严紧条件下，与 NM一016588开放阅读框序列杂交的核苷酸序列。该术语还包括与NM—016588开放 阅读框序列的同源性至少70%，较佳地至少80%，更佳地至少90%的核苷酸序列。该术语还包括能编码序列号为NP一057672氨基酸序列的核苷酸序列变异形 式。这些变异形式包括(但并不限于)若干个(通常为1-90个，较佳地l-60个，更佳 地l-20个，最佳地1-10个)核苷酸的缺失、插入和/或取代，以及在5'和/或3'端添 加数个(通常为60个以内，较佳地为30个以内，更佳地为10个以内，最佳地为5 个以内)核苷酸。获得了 NRN1基因序列后，就可以将NRN1基因序列插入适当的表达载体， 以获得重组表达质粒。 一旦获得了含有NRN1基因序列的重组表达质粒，就可将其 转化到相应宿主中进行蛋白表达。在本专利技术中，可选用本领域己知的各种载体，如市售的载体。比如，选用市售 的载体，然后将编码本专利技术多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，可以形 成蛋白表达载体。如本文所用，可操作地连于指这样一种状况，即线性DNA序列的某些部 分能够影响同一线性DNA序列其他部分的活性。例如，如果信号肽DNA作为前体 表达并参与多肽的分泌，那么信号肽(分泌前导序列)DNA就是可操作地连于多肽 DNA;如果启动子控制序列的转录，那么它是可操作地连于编码序列；如果核糖体 结合位点被置于能使其翻译的位置时，那么它是可操作地连于编码序列。 本文档来自技高网...
【技术保护点】
神经突起生长素在制备创伤愈合药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.神经突起生长素在制备创伤愈合药物中的应用。2. 如权利要求1所述的应用，其特征是，所述的创伤愈合药物是将神经 突起生长素蛋白与药学上的载体或者赋形剂组成的药物组合物。3. 如权利要求l所述的应用，其特征是，所述的药物剂型是片剂、针剂、...
【专利技术属性】
技术研发人员：余龙，仙玲玲，秦波，韩丁丁，黄瑾，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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