【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抗体制备，特别涉及抗人lin28a蛋白的兔单克隆抗体及其应用。
技术介绍
1、lin28a又名lin-28同系物a，是一种结构上高度保守的rna结合蛋白，在胚胎干细胞中高度表达，是胚胎干细胞自我更新的主要调控因子，而且它可以将人类体细胞重新编程为多潜能干细胞，在调节细胞生长分化、新陈代谢以及细胞多能性等方面起重要作用。有研究表明，lin28a与oct-4、sox2和nanog等基因联合可以使人成纤维细胞重编程为多能es样细胞，葡萄糖代谢的调节和atp产量的增加被认为是lin28a的主要作用方式，因此，lin28a被作为一个鉴定干细胞的重要特异性指标。在哺乳动物基因组中，存在两个同源基因lin28a和lin28b，lin28a和lin28b在大量癌症类型中异常表达，它们的异常表达与临床肿瘤分期和不良预后相关。lin28a及其类似物lin28b可以抑制let-7mirna的加工并调节mrna翻译，即，在let-7mirna的成熟过程中lin28a和和lin28b起负反馈调节作用，已经有大量的证据表明lin28/let-7双向负反馈机制可以与一些细胞因子(如scr家族、myc家族、nf-kb)结合，形成一个复杂的因子调节系统参与癌症的发生。最近已证实，原发性人肿瘤和人癌细胞系中lin28a和lin28b的上调与let-7mirna的下调相关。这些发现暗示lin28a蛋白还可以作为一种重要的癌症诊断的生物标志物。
2、鉴于lin28a的诊断和标记价值，开发特异性好、灵敏度高的抗lin28a抗体不仅有助于发现相关
技术实现思路
1、针对现有技术中抗人lin28a蛋白抗体的特异性差、难以用于免疫学检测等问题，本专利技术提供了抗人lin28a蛋白的兔单克隆抗体，并提供了该兔单克隆抗体在制备人lin28a蛋白免疫检测试剂和/或试剂盒中的应用。
2、为实现上述目的，本专利技术具体通过以下技术方案实现：
3、本专利技术第一方面提供了一种抗人lin28a蛋白的兔单克隆抗体，包括轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区和所述重链可变区均包括3个互补决定区，其中：轻链互补决定区1、轻链互补决定区2和轻链互补决定区3的氨基酸序列分别如seq id no.5-7所示；重链互补决定区1、重链互补决定区2和重链互补决定区3的氨基酸序列分别如seq id no.8-10所示。
4、进一步地，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.3所示，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no.4所示。
5、进一步地，所述兔单克隆抗体的轻链的氨基酸序列如seq id no.1所示，所述兔单克隆抗体的重链的氨基酸序列如seq id no.2所示。
6、进一步地，所述兔单克隆抗体为全长抗体或具有免疫活性的抗体片段；所述抗体片段选自fab片段、f(ab)2片段、fv片段、(fv)2片段、scfv片段和sc(fv)2片段中的至少一种。
7、进一步地，用来制备所述兔单克隆抗体的免疫原为人lin28a蛋白174-193aa偶联血蓝蛋白klh所得，所述人lin28a蛋白174-193aa的氨基酸序列如seq id no.11所示。
8、本专利技术第二方面提供了一种核酸分子，所述核酸分子用于编码如上所述的抗人lin28a蛋白的兔单克隆抗体。
9、本专利技术第三方面提供了一种重组载体，所述重组载体包含如上所述的核酸分子。
10、本专利技术第四方面提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包含如上所述的重组载体或者所述宿主细胞的基因组中整合有如上所述的核酸分子。
11、本专利技术第五方面提供了如上所述的抗人lin28a蛋白的兔单克隆抗体、如上所述的核酸分子、如上所述的重组载体、如上所述的宿主细胞在制备人lin28a蛋白免疫检测试剂和/或试剂盒中的应用。
12、进一步地，免疫检测方法为免疫印迹法、免疫荧光法或免疫组织化学法。
13、进一步地，免疫检测细胞样本为人畸胎癌细胞、人乳腺管癌细胞和人宫颈癌细胞中的一种或多种，组织样本为人精原细胞瘤、睾丸、胎盘和胚胎性癌中的一种或多种。
14、本专利技术的优点及积极效果为：
15、本专利技术制备得到的具备上述cdr序列的抗人lin28a蛋白兔单克隆抗体可以识别和结合人细胞或组织表达的天然lin28a蛋白，且抗体特异性高，亲和力良好，保证了在免疫检测尤其是免疫印迹、免疫荧光和免疫组织化学检测人lin28a蛋白时具有高准确性、高灵敏度、高特异性以及优良的抗干扰能力，有利于避免假阳性或假阴性结果。
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1.一种抗人Lin28A蛋白的兔单克隆抗体，其特征在于，包括轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区和所述重链可变区均包括3个互补决定区，其中：
2.根据权利要求1所述的抗人Lin28A蛋白的兔单克隆抗体，其特征在于，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
3.根据权利要求2所述的抗人Lin28A蛋白的兔单克隆抗体，其特征在于，所述兔单克隆抗体的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述兔单克隆抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
4.根据权利要求1或2所述的抗人Lin28A蛋白的兔单克隆抗体，其特征在于，所述兔单克隆抗体为全长抗体或具有免疫活性的抗体片段；
5.根据权利要求1所述的抗人Lin28A蛋白的兔单克隆抗体，其特征在于，用来制备所述兔单克隆抗体的免疫原为人Lin28A蛋白174-193aa偶联血蓝蛋白所得，所述人Lin28A蛋白174-193aa的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示。
6.一种核酸分子，其特征在
7.一种重组载体，其特征在于，包含如权利要求6所述的核酸分子。
8.一种宿主细胞，其特征在于，包含如权利要求7所述的重组载体或者基因组中整合有如权利要求6所述的核酸分子。
9.如权利要求1-5任一项所述的抗人Lin28A蛋白的兔单克隆抗体在制备人Lin28A蛋白免疫检测试剂和/或试剂盒中的应用。
10.根据权利要求9所述的抗人Lin28A蛋白的兔单克隆抗体在制备人Lin28A蛋白免疫检测试剂和/或试剂盒中的应用，其特征在于，免疫检测方法为免疫印迹法、免疫荧光法或免疫组织化学法；
...【技术特征摘要】
1.一种抗人lin28a蛋白的兔单克隆抗体，其特征在于，包括轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区和所述重链可变区均包括3个互补决定区，其中：
2.根据权利要求1所述的抗人lin28a蛋白的兔单克隆抗体，其特征在于，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.3所示，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no.4所示。
3.根据权利要求2所述的抗人lin28a蛋白的兔单克隆抗体，其特征在于，所述兔单克隆抗体的轻链的氨基酸序列如seq id no.1所示，所述兔单克隆抗体的重链的氨基酸序列如seq id no.2所示。
4.根据权利要求1或2所述的抗人lin28a蛋白的兔单克隆抗体，其特征在于，所述兔单克隆抗体为全长抗体或具有免疫活性的抗体片段；
5.根据权利要求1所述的抗人lin28a蛋白的兔单克隆抗体，其特征在于，用来制备所述兔单克隆抗体...
【专利技术属性】
技术研发人员：李世琦，代海艳，吴萌，盛飞，吴海，牛晓晓，
申请(专利权)人：武汉爱博泰克生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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