【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及包含载有寡核苷酸的肽-脂质缀合物的纳米颗粒，用于抑制细胞中的靶蛋白或促进靶蛋白的表达，以及包含其的药物组合物。
技术介绍
1、开发了寡核苷酸，特别是sirna和mrna形式的寡核苷酸，作为控制导致癌症和传染病的基因的治疗剂。由于以mrna的形式注射以诱导免疫反应的含有编码covid 19病毒刺突蛋白的基因的rna疫苗最近已被fda批准，mrna的应用引起了极大的关注。mrna是无毒的，因为它是由体内的mrna人工合成的。然而，sirna和mrna在体内被核酸酶快速降解，带负电荷，并且不能靶向特定的病变。此外，尽管sirna和mrna只有在细胞质中起作用时才能发挥其作用，但由于其带负电荷和较大的尺寸，它们自身不能透过细胞膜。因此，为了克服这些限制，需要能够将寡核苷酸稳定递送至细胞内的载体。
2、最广泛使用的载体是脂质纳米颗粒，并且使用各种阳离子脂质的寡核苷酸载体是已知的(us2006/0083780、us2006/0240554、us2008/0020058、us2009/0263407、us2009/0285881、以及pct专利公开号wo 2009/086558、wo 2009/127060、wo 2009/132131、wo2010/042877、wo 2010/054384、wo 2010/054401、wo 2010/054405、wo 2010/054406和wo2010/105209)。传统的阳离子脂质诸如clindma和dlindma已经用于将寡核苷酸递送至肝脏，但是已知在高剂量下具有非最
3、脂质纳米颗粒是使用阳离子脂质、胆固醇和聚乙二醇(peg)制备的。阳离子脂质使得寡核苷酸穿过细胞膜，胆固醇使得寡核苷酸保持其形状，以及peg使得脂质纳米颗粒的长循环。然而，据报道peg会生成抗peg的抗体，从而诱导过敏反应。因此，需要能够安全有效地将寡核苷酸递送至细胞内的新型寡核苷酸载体。
4、因此，为了产生包含能够安全有效地将寡核苷酸递送至细胞内的肽-脂质缀合物的纳米颗粒，本专利技术人使用包含用于识别靶细胞表面的序列和具有细胞穿透功能、促进从内体中逃逸并与寡核苷酸结合的序列的肽来产生肽-脂质缀合物，并且发现，当使用该包含该肽-脂质缀合物的纳米颗粒时，寡核苷酸被有效地递送至细胞内，致癌蛋白的表达被所装载的寡核苷酸减少，并且在诱发有癌症的动物模型中获得了抗癌效果。基于此，完成了本专利技术。
5、在该
技术介绍
部分中公开的信息仅仅是为了增强对本专利技术的背景的理解而提供的，因此它可能不包括形成对本领域技术人员来说已经显而易见的现有技术的信息。
技术实现思路
1、本专利技术的一个目的是提供一种能够安全有效地将寡核苷酸递送至细胞内的肽-脂质缀合物。
2、本专利技术的另一个目的是提供用于将寡核苷酸递送至细胞内的纳米颗粒，该纳米颗粒中肽-脂质缀合物和寡核苷酸彼此结合。
3、本专利技术的又一个目的是提供一种包含该纳米颗粒的药物组合物。
4、本专利技术的再一个目的是提供一种预防或治疗疾病的方法，包括向受试者给药该纳米颗粒。
5、本专利技术的还有一个目的是提供纳米颗粒用于预防或治疗疾病的用途。
6、本专利技术的还有另一个目的是提供纳米颗粒在制备用于预防或治疗疾病的药物中的用途。
7、为了实现上述目的，本专利技术提供了一种肽-脂质缀合物，其具有下式1作为基本单元的肽-脂质缀合物：
8、[式1]
9、a-b-c-d-e
10、其中，a是具有12至20个碳原子的脂肪酸或阳离子脂质；
11、b是促进内体逃逸的肽；
12、c是rna结合肽；
13、d是具有细胞穿透功能的肽；以及
14、e是识别靶细胞表面的肽。
15、此外，本专利技术提供了其中肽-脂质缀合物和寡核苷酸彼此结合的纳米颗粒。
16、此外，本专利技术提供了一种用于将寡核苷酸递送至细胞内的组合物，其包含其中肽-脂质缀合物和寡核苷酸彼此结合的纳米颗粒。
17、此外，本专利技术提供了一种包含其中肽-脂质缀合物和寡核苷酸彼此结合的纳米颗粒的药物组合物。
18、此外，本专利技术提供了一种预防或治疗疾病的方法，包括向受试者给药该纳米颗粒。
19、此外，本专利技术提供了纳米颗粒用于预防或治疗疾病的用途。
20、此外，本专利技术提供了纳米颗粒在制备用于预防或治疗疾病的药物中的用途。
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1.一种具有下式1的肽-脂质缀合物作为基本单元的肽-脂质缀合物：
2.根据权利要求1所述的肽-脂质缀合物，其中，B是由4到12个组氨酸组成的肽。
3.根据权利要求1所述的肽-脂质缀合物，其中，D是选自由4至12个精氨酸、4至12个赖氨酸和2个半胱氨酸或其组合组成的组的肽。
4.根据权利要求1所述的肽-脂质缀合物，其中，C是由SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:15中任一氨基酸序列表示的肽。
5.根据权利要求1所述的肽-脂质缀合物，其中，E具有由SEQ ID NO:16表示的氨基酸序列。
6.根据权利要求1所述的肽-脂质缀合物，其中，式1的所述基本单元的A-B通过酰胺键连接。
7.根据权利要求6所述的肽-脂质缀合物，其中，A-B的所述酰胺键是基于化学合成形成的。
8.根据权利要求1所述的肽-脂质缀合物，其中，B-C-D-E通过化学合成或重组表达方法产生。
9.一种纳米颗粒，其中根据权利要求1至8中任一项所述的肽-脂质缀合物和寡核苷酸彼此结合。
10.根据权利要求9所述
11.根据权利要求9所述的纳米颗粒，其中，所述寡核苷酸抑制或增加靶基因的表达。
12.根据权利要求10所述的纳米颗粒，其中，所述siRNA具有与编码肿瘤诱导蛋白或致病蛋白的核苷酸序列互补的核苷酸序列。
13.根据权利要求12所述的纳米颗粒，其中，所述siRNA是天然的或经化学修饰的siRNA，或者使用在5'端被巯基或胺基取代的siRNA，与细胞穿透和靶识别肽中的半胱氨酸的巯基化学结合。
14.根据权利要求10所述的纳米颗粒，其中，所述mRNA编码需要增加表达的靶蛋白、重组嵌合蛋白或病毒抗原。
15.根据权利要求9所述的纳米颗粒，其中，在所述寡核苷酸与式1中的C结合后，通过所述肽-脂质缀合物的自组装形成所述纳米颗粒。
16.根据权利要求15所述的纳米颗粒，其中，所述纳米颗粒的大小为10至200nm。
17.根据权利要求10所述的纳米颗粒，其中，所述寡核苷酸是siRNA或mRNA，并且所述siRNA或mRNA与肽-脂质缀合物的分子量比为1∶1至1∶100。
18.一种用于将寡核苷酸递送至细胞内的组合物，其包含其中根据权利要求9所述的肽-脂质缀合物和寡核苷酸彼此结合的所述纳米颗粒。
19.一种药物组合物，其包含其中根据权利要求9所述的肽-脂质缀合物和寡核苷酸彼此结合的所述纳米颗粒。
20.根据权利要求19所述的药物组合物，其用于治疗或预防癌症或炎性疾病。
21.根据权利要求20所述的药物组合物，其中，所述癌症选自由以下组成的组：鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、肝细胞癌、肾细胞癌、膀胱癌、肠癌、乳腺癌、宫颈癌、子宫癌、结肠癌、食道癌、头癌、肾癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、白血病、良性和恶性淋巴瘤、良性和恶性黑色素瘤、骨髓增生性疾病、肉瘤包括尤文氏肉瘤、血管肉瘤、卡波西肉瘤、脂肪肉瘤、肌瘤、神经上皮肉瘤、滑膜肉瘤、神经肉瘤、星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤、脑细胞瘤、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、神经节细胞瘤、神经母细胞瘤、松果体瘤、脑膜瘤、脑膜肉瘤、神经纤维瘤和神经鞘瘤、睾丸癌、甲状腺癌、癌肉瘤、霍金斯病、维尔姆斯瘤和畸胎癌。
22.根据权利要求20所述的药物组合物，其中，用于治疗或预防选自由以下组成的组的疾病：哮喘、自身免疫性疾病、类风湿性关节炎、多发性硬化、睫状病、腭裂、糖尿病、心脏病、高血压、炎性肠病、精神发育迟滞、情绪障碍、肥胖症、屈光不正、不孕症、安格尔曼综合征、卡纳万氏病、慢性消化系统疾病、恰克-马利-杜斯氏(CMT)病、囊性纤维化、杜氏肌营养不良、血色素沉着症、血友病、克氏综合征、神经纤维瘤病、苯丙酮尿症、常染色体显性多囊肿瘤(PKD1或PKD2)、普拉德-威利综合征、镰状细胞贫血、泰-萨克斯病、特纳综合征、HIV感染和HCV感染。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种具有下式1的肽-脂质缀合物作为基本单元的肽-脂质缀合物：
2.根据权利要求1所述的肽-脂质缀合物，其中，b是由4到12个组氨酸组成的肽。
3.根据权利要求1所述的肽-脂质缀合物，其中，d是选自由4至12个精氨酸、4至12个赖氨酸和2个半胱氨酸或其组合组成的组的肽。
4.根据权利要求1所述的肽-脂质缀合物，其中，c是由seq id no:1至seq id no:15中任一氨基酸序列表示的肽。
5.根据权利要求1所述的肽-脂质缀合物，其中，e具有由seq id no:16表示的氨基酸序列。
6.根据权利要求1所述的肽-脂质缀合物，其中，式1的所述基本单元的a-b通过酰胺键连接。
7.根据权利要求6所述的肽-脂质缀合物，其中，a-b的所述酰胺键是基于化学合成形成的。
8.根据权利要求1所述的肽-脂质缀合物，其中，b-c-d-e通过化学合成或重组表达方法产生。
9.一种纳米颗粒，其中根据权利要求1至8中任一项所述的肽-脂质缀合物和寡核苷酸彼此结合。
10.根据权利要求9所述的纳米颗粒，其中，所述寡核苷酸选自由dna、sirna、mirna和mrna组成的组。
11.根据权利要求9所述的纳米颗粒，其中，所述寡核苷酸抑制或增加靶基因的表达。
12.根据权利要求10所述的纳米颗粒，其中，所述sirna具有与编码肿瘤诱导蛋白或致病蛋白的核苷酸序列互补的核苷酸序列。
13.根据权利要求12所述的纳米颗粒，其中，所述sirna是天然的或经化学修饰的sirna，或者使用在5'端被巯基或胺基取代的sirna，与细胞穿透和靶识别肽中的半胱氨酸的巯基化学结合。
14.根据权利要求10所述的纳米颗粒，其中，所述mrna编码需要增加表达的靶蛋白、重组嵌合蛋白或病毒抗原。
15.根据权利要求9所述的纳米颗粒，其中，在所述寡核苷酸与式1中的c结合后，通过所述肽-脂质缀合物的自组装形成所述纳...
【专利技术属性】
技术研发人员：朴玧贞，郑钟平，李周娟，
申请(专利权)人：纳米智能生物医学工程有限公司，
类型：发明
国别省市：
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