一种分泌表达环糊精水解酶的方法技术

本发明专利技术公开了一种分泌表达环糊精水解酶的方法，属于生物工程技术领域。通过向培养基中添加终浓度为5mM锰离子，使得重组枯草芽孢杆菌能够高效胞外分泌环糊精水解酶，总酶活力最高可达4.86U/mL，胞外酶活最高占比可达63.75％。相较于不添加锰离子，胞外环糊精水解酶占比提升了54.35％。本发明专利技术的方法能够使得重组枯草芽孢杆菌高效胞外分泌环糊精水解酶，且无需添加抗生素，没有内毒素污染的威胁，安全可靠，本发明专利技术所得到的环糊精水解酶，能够以β‑环糊精为底物，在温和的条件下通过生物转化制备单一DP的非还原性葡萄糖低聚糖，工艺简单，环境友好，该重组菌在化学、食品和制药领域中具有重要的应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种分泌表达环糊精水解酶的方法，属于生物工程。

技术介绍

1、麦芽糊精(还原性葡萄糖基低聚糖)在食品中应用广泛，但麦芽糊精因其还原性质易与其他活性成分发生反应，同时麦芽糊精的聚合度(degree of polymerization，dp)不均一，其理化性质不稳定。聚合度更集中的非还原性葡萄糖基低聚糖，由于可以抑制美拉德反应、防止还原性基团与药品中活性成分的反应、减少食品加工中产生的异味及不良颜色，所以相较于还原性葡萄糖基低聚糖，在食品、医药和日化用品等领域，具有更广阔的市场前景。

2、目前国内外有关工业化生产非还原性葡萄糖基低聚糖及其应用的研究极少，使用酶技术生产非还原性葡萄糖基低聚糖的研究也较为缺乏。根据现有技术披露，借由直链麦芽糊精的生产工艺，通过酶转换法生产非还原性葡萄糖基低聚糖可有两种方式，一是以麦芽糊精为底物，通过麦芽寡糖基海藻糖合酶(maltooligosyltrehalose synthase，mtsase)制备混合型非还原性葡萄糖基低聚糖。二是利用环糊精水解酶(cyclodextrinase，cdase)和mtsa本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种胞外表达环糊精水解酶的方法，将表达环糊精水解酶的重组枯草芽孢杆菌接种于培养基，在含锰离子的环境中发酵生产环糊精水解酶；所述环糊精水解酶来源于球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus)E-244。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述环糊精水解酶氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述重组枯草芽孢杆菌以枯草芽孢杆菌WB600(dal-)或枯草芽孢杆菌WB600为宿主。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述表达所使用的载体为质粒pUB-HpaII-P43-dal，所述质粒pUB...

【技术特征摘要】

1.一种胞外表达环糊精水解酶的方法，将表达环糊精水解酶的重组枯草芽孢杆菌接种于培养基，在含锰离子的环境中发酵生产环糊精水解酶；所述环糊精水解酶来源于球形芽孢杆菌(bacillus sphaericus)e-244。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述环糊精水解酶氨基酸序列如seqidno.1所示。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述重组枯草芽孢杆菌以枯草芽孢杆菌wb600(dal-)或枯草芽孢杆菌wb600为宿主。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述表达所使用的载体为质粒pub-hpaii-p43-dal，所述质粒pub-hpaii-p43-dal的核苷酸序列如seq id ...

【专利技术属性】
技术研发人员：江波，周瑞琦，何伟伟，郑露华，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：