【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物技术与基因工程领域，具体涉及一种干扰小胶质细胞中nlrp3蛋白表达的shrna及其应用。
技术介绍
1、帕金森病(parkinson’s disease，pd)作为继阿尔兹海默病后世界第二大神经退行性疾病，其典型病理特征为中脑黑质致密部多巴胺神经元的缺失和神经元内α-突触核蛋白的聚集，除此之外，临床上大量尸检结果也发现帕金森病患者的脑部黑质部位存在大量的小胶质细胞和炎症小体的激活。虽然帕金森病的诱发因素很多，且其具体致病原因尚不清楚，但研究表明炎症在该疾病的发病机制中起着重要的作用。
2、炎症小体是由胞浆内模式识别受体(pattern recognition receptors，prrs)参与组装的多蛋白复合物，它们作为固有免疫的重要组分，在机体免疫反应及多种疾病的发生过程中具有重要作用。
3、nlrp3炎症小体作为近年来被发现的与中枢神经系统疾病关系最为密切的炎症小体，其在中枢神经系统中主要定位在小胶质细胞和星形胶质细胞胞浆，介导炎症反应和细胞焦亡的发生。nlrp3炎症小体作为一种大分子量的细胞多蛋白复合物，由感受器nlrp3受体蛋白、适配器凋亡相关斑点样蛋白asc、效应器caspase-1前体蛋白三种成分构成，其中nlrp3受体蛋白是nlrp3炎症小体的核心部分。
4、nlrp3炎症小体能够识别病原体相关分子模式(pathogen-associated molecularpatterns，pamps)和损伤相关分子模式(damage-associated molecu
5、基于nlrp3炎症小体在帕金森病中的重要作用，如果能有效的对该蛋白的表达进行干扰，那么能在一定程度上延缓帕金森病的病理性进程。鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术提供一种干扰小胶质细胞中nlrp3蛋白表达的shrna及其应用，能有效的减轻pd相关的病理性进程。
2、本专利技术是通过以下技术方案实现的：
3、一种干扰小胶质细胞中nlrp3蛋白表达的shrna，所述shrna为shnlrp3-1725、shnlrp3-2052或shnlrp3-2411；
4、所述shnlrp3-1725的正义链如seq id no.1所示，反义链如seq id no.2所示；
5、所述shnlrp3-2052的正义链如seq id no.3所示，反义链如seq id no.4所示；
6、所述shnlrp3-2411的正义链如seq id no.5所示，反义链如seq id no.6所示；
7、其中，ttcaagaga为loop序列。
8、一种慢病毒表达载体，包括上述的干扰小胶质细胞中nlrp3蛋白表达的shrna。
9、优选地，所述载体为pglv3(h1/gfp&puro)-nlrp3-mus-1725、pglv3(h1/gfp&puro)-nlrp3-mus-2052或
10、pglv3(h1/gfp&puro)-nlrp3-mus-2411。
11、一种慢病毒表达载体的构建方法，所述慢病毒表达载体由所述shnlrp3-1725、shnlrp3-2052或shnlrp3-2411克隆到慢病毒表达载体pglv3(h1/gfp&puro)中获得。
12、上述的干扰小胶质细胞中nlrp3蛋白表达的shrna或上述的慢病毒表达载体在制备缓解或治疗帕金森病的药物中的应用。
13、一种缓解或治疗帕金森病的药物组合物，包括上述的干扰小胶质细胞中nlrp3蛋白表达的shrna或上述的慢病毒表达载体。
14、本专利技术的有益效果如下：
15、本专利技术设计了抑制nlrp3基因表达的shrna并构建了相应的shrna表达载体，在细胞模型中通过病毒转染的方式有效敲减了bv2小胶质细胞中的nlrp3蛋白的表达，之后用lps刺激bv2细胞，收集其条件培养基培养sh-sy5y，通过这种方式模拟体外pd炎症模型。本专利技术的shrna不仅表达效率高，而且工艺稳定、具有良好的适用性，通过病毒转染和共培养，能在体外直观的显示出nlrp3在pd病理性进程的重要作用，实验周期短且操作简便，为在体实验提供更充足的依据。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种干扰小胶质细胞中NLRP3蛋白表达的shRNA，其特征在于，所述shRNA为shNLRP3-1725、shNLRP3-2052或shNLRP3-2411；
2.一种慢病毒表达载体，其特征在于，包括如权利要求1所述的干扰小胶质细胞中NLRP3蛋白表达的shRNA。
3.根据权利要求2所述的一种慢病毒表达载体，其特征在于，所述载体为pGLV3(H1/GFP&Puro)-NLRP3-mus-1725、
4.权利要求2或3所述的一种慢病毒表达载体的构建方法，其特征在于，所述慢病毒表达载体由所述shNLRP3-1725、shNLRP3-2052或shNLRP3-2411克隆到慢病毒表达载体pGLV3(H1/GFP&Puro)中获得。
5.如权利要求1所述的干扰小胶质细胞中NLRP3蛋白表达的shRNA或如权利要求2或3所述的慢病毒表达载体在制备缓解或治疗帕金森病的药物中的应用。
6.一种缓解或治疗帕金森病的药物组合物，其特征在于，包括如权利要求1所述的干扰小胶质细胞中NLRP3蛋白表达的shRNA或如权利要
...【技术特征摘要】
1.一种干扰小胶质细胞中nlrp3蛋白表达的shrna，其特征在于，所述shrna为shnlrp3-1725、shnlrp3-2052或shnlrp3-2411；
2.一种慢病毒表达载体，其特征在于，包括如权利要求1所述的干扰小胶质细胞中nlrp3蛋白表达的shrna。
3.根据权利要求2所述的一种慢病毒表达载体，其特征在于，所述载体为pglv3(h1/gfp&puro)-nlrp3-mus-1725、
4.权利要求2或3所述的一种慢病毒表达载体的构建方法，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：高雅，王晨虹，周徐，牛海晨，李海英，
申请(专利权)人：徐州医科大学，
类型：发明
国别省市：
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