【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测，具体涉及检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的组合物、试剂盒及方法。
技术介绍
1、结核病是由结核分枝杆菌(mycobatmerium tuberculosis，mtb)引起的慢性呼吸道传染性疾病，是世界范围内的主要公共卫生问题。
2、早期发现耐药结核病非常重要。传统诊断方法是通过涂片、培养结核分枝杆菌后，再做药敏试验，一般需要1-3个月才能得到结核分枝杆菌的耐药信息，而患者此时已经开始治疗，治疗一段时间才发现患者的耐药情况，不仅延误病情，还可能导致耐药结核分枝杆菌的传播。who在2021年发布的《update on the use of nucleic acid amplificationtests to detetm tb and drug-resistant tb:rapid communication》中指出：结核病患者无论利福平耐药与否，都应及时开展异烟肼和氟喹诺酮类药物的耐药检测，以指导治疗决策。异烟肼用于各型各期肺结核和肺外各种结核病，是防治结核病的首选一线药，异烟肼耐药和耐多药(mdr)结核病的增加正在危及这种药物的持续效用，异烟肼耐药结核发病率统计结果不容乐观。异烟肼作为一种副作用相对较少且能强有力杀菌的抗结核药，它的损失将使结核的治疗效果大打折扣。检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性有助于耐药结核病的预测，对于耐药性结核病的预防和治疗关键是及早发现，对患者的结核耐药情况及时进行确认并制定药物选用方案，再进行针对性规范化治疗。
3、因此，提供一种灵敏度较高，特异性更强的检测结核分枝
技术实现思路
1、本专利技术提供一种检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的组合物、试剂盒及方法，以能够更灵敏、更准确地对待测样本做出结核分枝杆菌异烟肼耐药的检测判断。
2、为实现上述目的，本专利技术采取以下技术方案：
3、本专利技术第一方面提供一种检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的组合物，包括组合物1和组合物2中的至少一个；
4、所述组合物1为引物对1和探针1、引物对2和探针2以及引物对3和探针3中的任意一套；
5、所述组合物2为引物对4和探针4、引物对5和探针5以及引物对6和探针6中的任意一套；
6、所述引物对1为katg-f1和katg-r1，所述引物对2为katg-f2和katg-r2，所述引物对3为katg-f3和katg-r3，所述探针1为katg-p1，所述探针2为katg-p2，所述探针3为katg-p3；
7、所述引物对4为inha-f1和inha-r1，所述引物对5为inha-f2和inha-r2，所述引物对6为inha-f3和inha-r3，所述探针4为inha-p1，所述探针5为inha-p2，所述探针6为inha-p3；
8、所述inha-f1的序列如seq id no.1所示，所述inha-r1的序列如seq id no.2所示，所述inha-p1的序列如seq id no.3所示，所述inha-f2的序列如seq id no.4所示，所述inha-r2的序列如seq id no.5所示，所述inha-p2的序列如seq id no.6所示，所述inha-f3的序列如seq id no.7所示，所述inha-r3的序列如seq id no.8所示，所述inha-p3的序列如seq id no.9所示；
9、所述katg-f1的序列如seq id no.10所示，所述katg-r1的序列如seq id no.11所示，所述katg-p1的序列如seq id no.12所示，所述katg-f2的序列如seq id no.13所示，所述katg-r2的序列如seq id no.14所示，所述katg-p2的序列如seq id no.15所示，所述katg-f3的序列如seq id no.16所示，所述katg-r3的序列如seq id no.17所示，所述katg-p3的序列如seq id no.18所示。
10、所述的检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的组合物，优选地，所述组合物1的探针和所述组合物2的探针的荧光基团互不相同且互不干涉。
11、所述的检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的组合物，优选地，所述组合物1的探针和所述组合物2的探针的所述荧光基团可以互不干涉地选自fam、hex、rox、vic、cy5.5、tamra、tet、cy3和joe中的任一种。
12、本专利技术的第二方面提供一种检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的试剂盒，包括所述的组合物。
13、所述的检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的试剂盒，优选地，还包括：mgcl2、dntp、taq酶中的至少一种。
14、所述的检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的试剂盒，优选地，当所述组合物仅包括所述组合物1和所述组合物2中任意一个时，所述组合物1的引物对浓度为1000nm或所述组合物2的引物对浓度为600nm，所述组合物1的探针浓度为60nm或所述组合物2的探针浓度为100nm，所述mg2+浓度为3mm，所述dntp浓度为350μm，所述taq酶浓度为2u。
15、所述的检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的试剂盒，优选地，当所述组合物包括所述组合物1和所述组合物2时，所述组合物1的引物对浓度为1000nm，所述组合物2的引物对浓度为600nm，所述组合物1的探针浓度为60nm，所述组合物2的探针浓度为100nm，所述mg2+浓度为3mm，所述dntp浓度为350μm，所述taq酶浓度为2u。
16、本专利技术的第三方面提供一种以非诊断为目的的检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的方法，所述方法包括以下步骤：
17、提取待测样本的dna；
18、使用所述的组合物或所述的试剂盒对所述提取的待测样本的dna进行荧光定量pcr检测和/或熔曲实验检测；
19、分析获得检测结果。
20、所述的以非诊断为目的的检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的方法，优选地，所述进行荧光定量pcr检测和/或熔曲实验检测时使用的待测样本的dna体积为10μl，所述mgcl2、dntp、和taq酶的总体积为25μl，所述组合物1和/或所述组合物2的体积为15μl。
21、所述的以非诊断为目的的检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的方法，优选地，所述进行荧光定量pcr检测时的扩增条件为：
22、
23、本专利技术由于采取以上技术方案，其具有以下优点：
24、本专利技术对结核分枝杆菌异烟肼耐药检测具有操作简单、灵敏度高、可重复性好，特异性高的特点。
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1.一种检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的组合物，其特征在于，包括组合物1和组合物2中的至少一个；
2.根据权利要求1所述的检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的组合物，其特征在于，所述组合物1的探针和所述组合物2的探针的荧光基团互不相同且互不干涉。
3.根据权利要求2所述的检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的组合物，其特征在于，所述组合物1的探针和所述组合物2的探针的所述荧光基团可以互不干涉地选自FAM、HEX、ROX、VIC、CY5.5、TAMRA、TET、CY3和JOE中的任一种。
4.一种检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1-3中任一项所述的组合物。
5.根据权利要求4所述的检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的试剂盒，其特征在于，还包括：MgCl2、dNTP、Taq酶中的至少一种。
6.根据权利要求5所述的检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的试剂盒，其特征在于，当所述组合物仅包括所述组合物1和所述组合物2中任意一个时，所述组合物1的引物对浓度为1000nM或所述组合物2的引物对浓度为600nM，所述组合物1的探针浓度为60n
7.根据权利要求5所述的检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的试剂盒，其特征在于，当所述组合物包括所述组合物1和所述组合物2时，所述组合物1的引物对浓度为1000nM，所述组合物2的引物对浓度为600nM，所述组合物1的探针浓度为60nM，所述组合物2的探针浓度为100nM，所述Mg2+浓度为3mM，所述dNTP浓度为350μM，所述Taq酶浓度为2U。
8.一种以非诊断为目的的检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
9.根据权利要求8所述的以非诊断为目的的检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的方法，其特征在于，所述进行荧光定量PCR检测和/或熔曲实验检测时使用的待测样本的DNA体积为10μL，所述MgCl2、dNTP、和Taq酶的总体积为25μL，所述组合物1和/或所述组合物2的体积为15μL。
10.根据权利要求9所述的以非诊断为目的的检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的方法，其特征在于，所述进行荧光定量PCR检测时的扩增条件为：
...【技术特征摘要】
1.一种检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的组合物，其特征在于，包括组合物1和组合物2中的至少一个；
2.根据权利要求1所述的检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的组合物，其特征在于，所述组合物1的探针和所述组合物2的探针的荧光基团互不相同且互不干涉。
3.根据权利要求2所述的检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的组合物，其特征在于，所述组合物1的探针和所述组合物2的探针的所述荧光基团可以互不干涉地选自fam、hex、rox、vic、cy5.5、tamra、tet、cy3和joe中的任一种。
4.一种检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1-3中任一项所述的组合物。
5.根据权利要求4所述的检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的试剂盒，其特征在于，还包括：mgcl2、dntp、taq酶中的至少一种。
6.根据权利要求5所述的检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的试剂盒，其特征在于，当所述组合物仅包括所述组合物1和所述组合物2中任意一个时，所述组合物1的引物对浓度为1000nm或所述组合物2的引物对浓度为600nm，所述组合物1的探针浓度为60nm或所述组合...
【专利技术属性】
技术研发人员：潘彦鹏，柳丽萍，徐利娟，郭求真，
申请(专利权)人：鲲鹏基因北京科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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