【技术实现步骤摘要】
本专利技术是关于一种pcr仪荧光串扰系数标定技术，具体而言，是关于一种多通道pcr仪荧光串扰系数标定方法及装置、实时荧光定量pcr方法与相关应用。
技术介绍
1、聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，pcr)是一种根据dna半保留复制原理在体外扩增待测样本中特定核酸片段的分子生物学技术，实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative real-time polymerase chain reaction，qpcr）是在pcr反应体系中针对一种特定核酸片段加入一种报告基团，当特定核酸片段每经历一个反应循环（也就是经历一次复制后）报告基团发出的荧光信号强度就会增强一次，荧光定量pcr仪的光学通道可以通过检测待测样本每个反应循环后的荧光信号强度变化，实现对反应产物量变化的实时监测，并生成反应上述关系的扩增曲线图，如图1所示，图中横坐标代表反应循环数，纵坐标代表荧光信号强度，光学通道通常与报告基团为一一对应关系，当实时荧光定量聚合酶链式反应结束时，根据光学通道是否有生成扩增曲线可以判断待测样本中是否有对应的核酸片段。
2、多重核酸检测技术是在同一个pcr反应体系中同时加入多种报告基团，对待测样本的多个不同的特定核酸片段分别进行扩增产物量变化的监测。多通道荧光定量pcr仪是实现多种扩增产物量变化监测的重要仪器，多通道荧光定量pcr仪是指装载有多个不同光学通道的荧光定量pcr仪。
3、多重核酸检测技术要求qpcr反应体系单管内能兼容更多的报告基团，由于常用的报告基团波长差距小，因此
4、因此，目前需要改进多重核酸检测技术，以提供正确的检测结果，或者说是提供正确的扩增曲线图，帮助用户产生正确的判定结论。
技术实现思路
1、本专利技术的一个目的在于提供一种pcr仪荧光串扰系数标定方法。
2、本专利技术的另一目的在于提供一种pcr仪荧光串扰系数标定装置。
3、本专利技术的另一目的在于提供一种实时荧光定量pcr方法。
4、本专利技术的另一目的在于提供一种实时荧光定量pcr数据处理装置。
5、本专利技术提供的pcr仪荧光串扰系数标定方法，可以在荧光定量pcr仪投入使用前计算目标基团对其他串扰通道的串扰系数并将串扰系数标定在荧光定量pcr仪中形成串扰算法，在荧光定量pcr仪投入使用后，串扰通道接收的荧光信号值是将真实荧光信号值代入串扰算法计算得出的处理荧光信号值，从而将串扰通道的扩增曲线消除，保证最终呈现给用户的扩增曲线是准确的，帮助用户做出正确的结果判定。
6、具体而言，根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种pcr仪荧光串扰系数标定方法，该方法是用于标定目标荧光染料对非目标荧光染料光学通道的荧光串扰系数，所述方法包括：
7、提供染料标定板，所述染料标定板包括至少一种目标荧光染料体系区，每种目标荧光染料体系区包括至少一组目标荧光染料体系组，每组目标荧光染料体系组包括多个装载不同浓度目标荧光染料体系的反应管，其中，多个所述反应管中的一个所述反应管被配置为背景管，所述背景管装载浓度为零的目标荧光染料体系；装载浓度不为零的目标荧光染料体系的反应管为标定管；
8、对染料标定板的反应管运行pcr扩增程序，分别采集标定管及背景管的对应目标荧光染料的光学通道的荧光信号数据以及非目标荧光染料光学通道的荧光信号数据；
9、将采集的标定管的荧光信号数据消除背景值；
10、以消除背景值后的非目标荧光染料光学通道的荧光信号数据与对应目标荧光染料的光学通道的荧光信号数据的比值，作为目标荧光染料对非目标荧光染料光学通道的荧光串扰系数，从而对荧光定量pcr仪进行串扰系数标定。
11、本专利技术中，除特别说明外，所述目标荧光染料意指作为标定标的的荧光染料，所述非目标荧光染料光学通道意指待标定串扰系数的光学通道。例如，所述的方法用于标定vic荧光染料对pcr仪的fam光学通道的荧光串扰系数时，vic荧光染料即为目标荧光染料，fam光学通道即为非目标荧光染料光学通道，相应地，pcr仪的vic光学通道即为对应目标荧光染料的光学通道。
12、根据本专利技术的一些具体实施方案，本专利技术的pcr仪荧光串扰系数标定方法中，所述pcr仪包括至少一个对应目标荧光染料的光学通道以及至少一个非目标荧光染料光学通道。在一些具体实施例中，所述pcr仪可包括2个或3-6个非目标荧光染料光学通道，本专利技术的pcr仪荧光串扰系数标定方法可同时标定目标荧光染料对多个非目标荧光染料光学通道的荧光串扰系数。
13、根据本专利技术的一些具体实施方案，本专利技术的pcr仪荧光串扰系数标定方法中，所述每组目标荧光染料体系组包括装载至少两种不同浓度目标荧光染料体系的标定管，所述以消除背景值后的非目标荧光染料光学通道的荧光信号数据与对应目标荧光染料的光学通道的荧光信号数据的比值，作为目标荧光染料对非目标荧光染料光学通道的荧光串扰系数，从而对荧光定量pcr仪进行串扰系数标定的过程包括：对于每个浓度目标荧光染料体系的标定管分别获得消除背景值后的非目标荧光染料光学通道的荧光信号数据与对应目标荧光染料的光学通道的荧光信号数据的比值数据，以多个比值数据的均值作为目标荧光染料对非目标荧光染料光学通道的荧光串扰系数k。
14、根据本专利技术的一些具体实施方案，本专利技术的pcr仪荧光串扰系数标定方法中，所述每组目标荧光染料体系组包括装载至少两种、至少3种或至少4种浓度目标荧光染料体系的标定管。作为一些更优选的实施方案，所述每组目标荧光染料体系组包括装载5-10种浓度目标荧光染料体系的标定管。
15、根据本专利技术的一些具体实施方案，本专利技术的pcr仪荧光串扰系数标定方法中，每组目标荧光染料体系组所包括的装载不同浓度目标荧光染料体系的标定管，其中最高浓度的体系中目标荧光染料被激发产生的荧光被对应目标荧光染料的光学通道接收到的荧光值为3000-30000。
16、根据本专利技术的一些具体实施方案，本专利技术的pcr仪荧光串扰系数标定方法中，多个不同浓度目标荧光染料体系的标定管，其中目标荧光染料的浓度可分散（例如按含量比例分散，或是梯度分散）在零至最高浓度之间。
17、根据本专利技术的一些具体实施方案，本专利技术的pcr仪荧光串扰系数标定方法中，各反应管的目标荧光染料体系采用qpcr预混液添加或不添加目标荧光染料制备而成。所述的qpcr预混液包括但不限于taqman mix，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种PCR仪荧光串扰系数标定方法，该方法是用于标定目标荧光染料对非目标荧光染料光学通道的荧光串扰系数，其特征在于，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述每组目标荧光染料体系组包括装载至少两种不同浓度目标荧光染料体系的标定管；
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述每组目标荧光染料体系组包括装载5-10种浓度目标荧光染料体系的标定管，其中最高浓度的体系中目标荧光染料被激发产生的荧光被对应目标荧光染料的光学通道接收到的荧光值为3000-30000。
4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述方法还包括确定荧光串扰关系式的过程，该过程包括：
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，运行PCR扩增程序时，PCR扩增反应循环数大于等于20，对于同一反应管，采集PCR扩增时多个循环点的荧光信号求取平均值作为该反应管对应的荧光信号数据。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，每种目标荧光染料体系区包括两组及以上的目标荧光染料体系组，将每组中同一浓度的目标荧光染料体系的反应管的荧光信号数
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，各反应管的目标荧光染料体系采用qPCR预混液添加或不添加目标荧光染料制备而成。
8.一种实时荧光定量PCR方法，其特征在于，所述方法包括利用PCR仪运行PCR扩增程序的过程，其中所述PCR仪采用权利要求1-7任一项所述的方法进行了荧光串扰系数标定。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，运行PCR扩增程序的过程中，非目标荧光染料光学通道接收到的荧光值为经过串扰算法处理后的荧光值Y´，其中，所述串扰算法为Y´=Fm-K×(Vm-VN)-b，其中：
10.一种能用于实现权利要求1-7任一项所述的PCR仪荧光串扰系数标定方法的染料标定板，其特征在于，所述染料标定板包括至少一种目标荧光染料体系区，每种目标荧光染料体系区包括至少一组目标荧光染料体系组，每组目标荧光染料体系组包括多个装载不同浓度目标荧光染料体系的反应管，其中至少一个所述反应管被配置为背景管，所述背景管装载浓度为零的目标荧光染料体系。
11.一种PCR仪荧光串扰系数标定装置，其特征在于，所述装置包括：
12.根据权利要求11所述的PCR仪荧光串扰系数标定装置，其特征在于，荧光串扰系数标定模块对荧光定量PCR仪进行串扰系数标定时，采用串扰算法使得非目标荧光染料光学通道接收到的荧光值为经过串扰算法处理后的荧光值Y´；
13.一种计算机设备，其特征在于，所述设备包括：存储器和处理器，所述存储器和所述处理器之间互相通信连接，所述存储器中存储有计算机指令，所述处理器通过执行所述计算机指令，从而执行权利要求1至9任一项所述的方法。
14.一种非暂态计算机可读存储介质，其特征在于，所述非暂态计算机可读存储介质存储有计算机指令，所述计算机指令被处理器执行时实现权利要求1至9任一项所述的方法。
15.一种计算机程序产品，其特征在于，所述计算机程序产品包括计算机指令，所述计算机指令被处理器执行时实现权利要求1至9任一项所述的方法。
...【技术特征摘要】
1.一种pcr仪荧光串扰系数标定方法，该方法是用于标定目标荧光染料对非目标荧光染料光学通道的荧光串扰系数，其特征在于，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述每组目标荧光染料体系组包括装载至少两种不同浓度目标荧光染料体系的标定管；
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述每组目标荧光染料体系组包括装载5-10种浓度目标荧光染料体系的标定管，其中最高浓度的体系中目标荧光染料被激发产生的荧光被对应目标荧光染料的光学通道接收到的荧光值为3000-30000。
4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述方法还包括确定荧光串扰关系式的过程，该过程包括：
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，运行pcr扩增程序时，pcr扩增反应循环数大于等于20，对于同一反应管，采集pcr扩增时多个循环点的荧光信号求取平均值作为该反应管对应的荧光信号数据。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，每种目标荧光染料体系区包括两组及以上的目标荧光染料体系组，将每组中同一浓度的目标荧光染料体系的反应管的荧光信号数据求取均值作为该浓度的目标荧光染料体系的荧光信号数据。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，各反应管的目标荧光染料体系采用qpcr预混液添加或不添加目标荧光染料制备而成。
8.一种实时荧光定量pcr方法，其特征在于，所述方法包括利用pcr仪运行pcr扩增程序的过程，其中所述pcr仪采用权利要求1-7任一项所述的方法进行了荧光串扰系数标定。
9.根据权利要求8所...
【专利技术属性】
技术研发人员：何伟，吕倩茹，田卫星，苗秀林，章家磊，
申请(专利权)人：鲲鹏基因北京科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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