【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种棘白菌素b的提取、纯化方法。
技术介绍
1、近年来，真菌感染疾病的发病率显著升高，每年可导致数千万人感染，已经成为危害公共卫生安全的重要隐患之一，尤其是深部真菌感染的发病率和病死率逐年增加。
2、棘白菌素(echinocandin)类药物是近年来新上市的一种抗真菌药物，该类抗生素通过非竞争性作用抑制真菌细胞壁β-1,3-葡聚糖合成酶的活性，不经过肝代谢和肾清除，抗菌谱广、活性强、不良反应率低，被广泛应用于抗真菌领域，由于其独特的作用靶点和确切的疗效，已经成为临床首选。
3、目前，国外棘白菌素b的制备方法普遍工艺参在一定缺点，主要方法为：有机溶剂提取棘白菌素类化合物，萃取除去部分杂质，活性炭脱色，利用吸附剂进行吸附，最后经过解析、浓缩、沉淀得到棘白菌素类化合物。但上述方法存在问题，一是萃取中溶剂的使用量大，若直接排放造成环境污染压力大，若进行溶剂回收又会增大生产成本；二是使用的吸附剂价格贵，再生困难，使用寿命有限，不利于扩大生产；三是提取过程中使用了氯仿之类的危险化学溶剂，对人体及环境的影响较大，存在安全隐患。
4、国内也对棘白菌素的制备工艺进行了大量研究。专利cn200910133117.6采用菌体甲醇浸泡、大孔吸附树脂吸附洗脱、氧化铝柱除色素的制备方法；cn201110244359.x发酵菌体经甲醇或乙醇浸泡、滤液经大孔吸附树脂吸附解吸、活性炭脱色、乙酸乙酯萃取、丙酮重结晶的制备方法；cn201210066411.1使用膜过滤及原位浸提方法，在微滤膜中
5、基于此，开发出一种适合工业化生产、生产成本低、环境污染小、产品收率和纯度高的棘白菌素b制备方法对于满足实际工业需求具有重要意义。
技术实现思路
1、针对现有技术不足，本专利技术提供了一种棘白菌素b的提取、纯化方法，经过实验证实，通过本方法提取、纯化得到的棘白菌素b，杂质含量低，产品纯度高，生产成本低，工艺步骤简单，整体操作过程环境污染小，适合工业化生产。
2、本专利技术采用有机溶剂萃取、大孔吸附树脂吸附纯化棘白菌素b，脱色、除杂效果明显，制得的棘白菌素b中的色素和柄曲霉素几乎完全被去除，有效的降低了后续处理难度；析晶采用盐析，减少了棘白菌素b的损失，产品的收率大于89.4％；经过纯化，棘白菌素b纯度大于98.0％。
3、具体的，所述棘白菌素b提取、纯化的方法包括下列步骤：
4、(1)将低分子醇溶液加入棘白菌素b发酵液，混匀；
5、(2)加入活性炭吸附，过滤得滤液；
6、(3)滤液加水稀释后过大孔吸附树脂，用低分子醇溶液洗脱，收集洗脱液；
7、(4)洗脱液静置析晶，过滤得滤饼，干燥得棘白菌素b粗品。
8、其中，所述步骤(1)中所述的低分子醇是甲醇、乙醇、丙醇中的一种或任意2种或3种的组合，加入的低分子醇体积为原发酵液体积的50％-80％。
9、步骤(2)具体还包括加入助滤剂增强除杂效果的步骤：加入活性炭吸附，再加入助滤剂后过滤得滤液。
10、优选的，步骤(2)加入的活性炭为发酵液体积的1％-3％，即g/100ml。
11、优选的，步骤(2)加入的助滤剂为硅藻土、珍珠岩、纤维素、氧化镁、石膏、酸性白土中的一种或几种。
12、进一步优选的，步骤(2)加入的助滤剂量为5-10g/l。
13、步骤(3)中所述大孔吸附树脂是指ads-17或x-5；优选的，所述的步骤3)滤液加水稀释至低分子醇浓度为10％-30％。
14、步骤(4)收集液浓缩至1-1.6倍柱体积，25-35℃干燥。
15、此外，为进一步提升本专利技术的技术效果，是棘白菌素的收率、纯度显著提升，本专利技术所述提取、纯化方法还可以包含以下步骤：
16、(5)加低分子醇溶解棘白菌素b粗品，溶解液过反相树脂柱，用低分子醇溶液洗脱，收集收集洗脱液；
17、(6)洗脱液加入氯化钠溶液，析晶，过滤，干燥，得棘白菌素b纯品。
18、即，本专利技术所述的提取、纯化方法为：
19、(1)将低分子醇溶液加入棘白菌素b发酵液，充分搅拌；
20、(2)加入活性炭吸附剂脱色除杂，再加入助滤剂后过滤得滤液；
21、(3)滤液加水稀释后过大孔吸附树脂，用低分子醇溶液洗脱，收集富含棘白菌素b的溶液；
22、(4)收集液浓缩，加入氯化钠溶液，2-8℃下析晶，过滤，干燥得棘白菌素b粗品；
23、(5)加低分子醇溶解棘白菌素b粗品，过滤，滤液过反相树脂柱，用低分子醇溶液洗脱，收集富含棘白菌素b的溶液；
24、(6)收集液浓缩，加入氯化钠溶液，0-8℃下析晶，过滤，干燥得棘白菌素b纯品。
25、通过上述优选的技术方案，本专利技术的技术效果优于其他技术方案，收率、纯度大大提升，满足工业大生产需求。
26、优选的，步骤(5)所述的反相树脂柱是xt30树脂柱；
27、步骤(6)收集液浓缩至出现析晶，滤饼干燥10-14小时。
28、进一步的，对本专利技术技术方案描述如下：
29、(1)将低分子醇溶液加入棘白菌素b发酵液(与发酵液体积比0.5-0.8:1)，充分搅拌后，静置2小时；
30、(2)加入活性炭吸附剂脱色除杂(活性炭比例0.25％-1％)，再加入助滤剂(助滤剂5-10g/l)后过滤得滤液；
31、(3)滤液加水稀释后过大孔吸附树脂，用低分子醇溶液洗脱，收集富含棘白菌素b的溶液；
32、(4)收集液浓缩后，加入氯化钠溶液，放在2-8℃环境中析晶，并过滤得滤饼，干燥(25-35℃)得棘白菌素b粗品；
33、(5)加低分子醇溶解棘白菌素b粗品，过滤，滤液过反相树脂柱，用低分子醇溶液洗脱，收集富含棘白菌素b的溶液；
34、(6)收集液浓缩后，加入氯化钠溶液，放在0-8℃环境析晶，过滤得滤饼，干燥(25-35℃、10-14小时)后得棘白菌素b纯品，纯度大于98.9％；
35、具体的，本专利技术步骤(1)中使用低分子醇选用甲醇、乙醇、丙醇中的一种或几种，优选乙醇。
36、本专利技术步骤(2)中选用助滤剂硅藻土、珍珠岩、纤维素、氧化镁、石膏、酸性白土中的一种，优选珍珠岩作为助滤剂。
37、本专利技术步骤(3)滤液过大孔吸附树脂前要稀释，稀释本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种棘白菌素B提取、纯化的方法，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)为：加入活性炭吸附，再加入助滤剂后过滤得滤液，所述助滤剂为药学常用助滤剂。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取、纯化方法还包含以下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述提取、纯化的方法，包括以下步骤：
5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中所述的低分子醇是甲醇、乙醇、丙醇中的一种或多种，优选的，步骤1)中所述加入的低分子醇体积为原发酵液体积的50％-80％。
6.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述步骤2)加入的活性炭为发酵液体积的0.25％-1％，g/100ml；优选的，加入的助滤剂为硅藻土、珍珠岩、纤维素、氧化镁、石膏、酸性白土中的一种或几种；进一步优选的，助滤剂加入量为5-10g/L。
7.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中所述大孔吸附树脂是指ADS-17或X-5；优选的，所述的步骤3)滤液加水稀释至低
8.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于所述的步骤4)收集液浓缩至1-1.6倍柱体积，25-35℃干燥。
9.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，步骤5)所述的反相树脂柱是XT30树脂柱。
10.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于所述的步骤6)收集液浓缩至出现析晶，滤饼干燥10-14小时。
...【技术特征摘要】
1.一种棘白菌素b提取、纯化的方法，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)为：加入活性炭吸附，再加入助滤剂后过滤得滤液，所述助滤剂为药学常用助滤剂。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取、纯化方法还包含以下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述提取、纯化的方法，包括以下步骤：
5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中所述的低分子醇是甲醇、乙醇、丙醇中的一种或多种，优选的，步骤1)中所述加入的低分子醇体积为原发酵液体积的50％-80％。
6.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述步骤2)加入的活性炭为发酵液体积的0.25％-...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱茂庆，
申请(专利权)人：山东新时代药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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