【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，涉及猪圆环病毒二型和猪圆环病毒三型融合cap蛋白二联亚单位疫苗及其在杆状病毒表达系统中高效的表达方法。
技术介绍
1、目前，疫苗免疫接种是pcvd的防控最主要的手段。接种疫苗的猪增加了平均日增重和瘦肉产量百分比，同时还提高了饲料转化率，并降低了接种疫苗的猪群的用药成本(guo et al.,2022)。目前使用的pcv2商业化疫苗分为两大类：灭活疫苗和使用cap作为免疫原的亚单位疫苗。pcv2弱毒疫苗存在病原毒力易返强和安全性差等缺点使得没有发展成为商业化疫苗。pcv3目前还没有商品化疫苗，还处于实验室开发、验证阶段。
2、亚单位疫苗是由病毒的主要免疫原的成分使用基因工程制成的，具有安全高效等优点。作为pcv2唯一的结构蛋白，cap蛋白具有中和表位(nawagitgul et al.,2002)，可促进机体产生特异性免疫保护反应。目前国际市场上使用的三种亚单位疫苗分别为circoflextm、circumvent和porcilis pcv，并且都在杆状病毒表达载体系统(baculovirusexpression vector system，bevs)中进行cap蛋白的表达(guo et al.,2022)。
3、作为一种成熟的外源蛋白表达平台，bevs具有许多优点，包括安全性高，易于操作以及适用于无血清培养。此外，在该系统中表达的蛋白质经翻译后能加工完整，并且可以适应多基因或大基因插入(hong et al.,2022)。自1980年代以来，bevs已广泛用于生物医学中的疫苗生产、干细
技术实现思路
1、为了解决现有技术中的不足，本专利技术的目的在于提供pcv2和pcv3融合cap蛋白二联亚单位疫苗及其制备方法和应用。本专利技术通过杆状病毒表达系统表达的pcv2 cap、pcv3cap和pcv2cap-pcv3cap重组蛋白均具有良好的免疫原性，尤其是pcv2cap-pcv3cap重组蛋白，为pcv2/pcv3二联疫苗研制奠定了基础。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用的具体方案为：
3、第一方面，一种pcv2cap-pcv3cap重组融合蛋白，其编码基因的核苷酸序列如seqid no：3所示。
4、第二方面，一种基因，其核苷酸序列如seq id no：3所示。
5、第三方面，包含上述基因的生物材料，所述生物材料不限于重组表达载体、工程菌或转基因细胞系。
6、第四方面，一种pcv2和pcv3融合cap蛋白二联亚单位疫苗，包含上述pcv2cap-pcv3cap重组融合蛋白。
7、作为对上述疫苗的进一步优化，还包括佐剂。所述佐剂选用isa 201vg。
8、第五方面，上述pcv2和pcv3融合cap蛋白二联亚单位疫苗的制备方法，包括以下步骤：
9、步骤一、以pcv2 cap和pcv3 cap基因序列为模板，分别获取pcv2 cap和pcv3 cap蛋白的基因片段，于pcv2 cap蛋白起始密码子后引入蜂素信号肽序列，pcv2 cap蛋白终止密码子替换成ggggs连接子，并连接于删去起始密码子的pcv3 cap蛋白，最后将6个组氨酸的碱基序列加在pcv3 cap终止密码子前，得到pcv2cap-pcv3cap重组融合蛋白基因；步骤二、对pcv2cap-pcv3cap重组融合蛋白的基因序列针对昆虫细胞进行密码子优化，并人工合成得到重组杆状病毒质粒rbac-pcv2cap-pcv3cap；
10、步骤三、在sf9细胞中构建了高滴度的重组杆状病毒acpcv2cap-pcv3cap，将其接种于表达效率较高的high five细胞中进行目的蛋白的表达，获取pcv2cap-pcv3cap重组融合蛋白；
11、步骤四、将步骤三所得pcv2cap-pcv3cap重组融合蛋白与佐剂乳化制备成疫苗。
12、第六方面，上述pcv2和pcv3融合cap蛋白二联亚单位疫苗在制备防控猪圆环病毒感染药物中的应用。
13、有益效果：本专利技术基于pcv2d亚型cap和pcv3a-im亚型cap蛋白基因序列，构建单表达pcv2 cap、pcv3 cap及融合表达pcv2cap-pcv3cap蛋白的重组杆状病毒，接种于highfive细胞进行表达条件优化，获得目的蛋白，制备了免疫效果良好的pcv2 cap、pcv3 cap、pcv2/pcv3融合cap蛋白疫苗，为pcv2/pcv3亚单位疫苗研制奠定了基础。
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1.一种PCV2Cap-PCV3Cap重组融合蛋白，其编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。
2.一种基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。
3.包含权利要求2所述基因的生物材料，所述生物材料为重组表达载体、工程菌或转基因细胞系。
4.一种PCV2和PCV3融合Cap蛋白二联亚单位疫苗，其特征在于：包含权利要求1所述的PCV2Cap-PCV3Cap重组融合蛋白。
5.根据权利要求2所述的PCV2和PCV3融合Cap蛋白二联亚单位疫苗，其特征在于：还包括佐剂。
6.根据权利要求3所述的PCV2和PCV3融合Cap蛋白二联亚单位疫苗，其特征在于：所述佐剂选用ISA 201VG。
7.根据权利要求2所述的PCV2和PCV3融合Cap蛋白二联亚单位疫苗的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
8.根据权利要求1所述的PCV2Cap-PCV3Cap重组融合蛋白、权利要求2所述的基因、权利要求3所述的生物材料或权利要求4-6任意一种所述的PCV2和PCV3融合Cap蛋白二联亚单位疫苗在制备
...【技术特征摘要】
1.一种pcv2cap-pcv3cap重组融合蛋白，其编码基因的核苷酸序列如seq id no：3所示。
2.一种基因，其核苷酸序列如seq id no：3所示。
3.包含权利要求2所述基因的生物材料，所述生物材料为重组表达载体、工程菌或转基因细胞系。
4.一种pcv2和pcv3融合cap蛋白二联亚单位疫苗，其特征在于：包含权利要求1所述的pcv2cap-pcv3cap重组融合蛋白。
5.根据权利要求2所述的pcv2和pcv3融合cap蛋白二联亚单位疫苗，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈金顶，房依琦，孙亚伟，范双旗，易琳，赵明秋，何垠滔，吉俊芝，罗子鹏，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：
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