检测耐药结核分支杆菌（ＭＤＲ－ＴＢ）的方法和试剂盒技术

本发明专利技术涉及一种用于诊断耐多药结核分枝杆菌感染的双标记探针检测和熔解曲线分析的方法，以及利用所述方法同时检测多种与结核耐药相关基因突变的试剂盒，属于生命科学和生物技术领域。本发明专利技术中的试剂盒包括针对多种与结核耐多药相关基因设计的引物和能够检测多个常见的与结核耐多药相关基因突变位点的双标记寡核苷酸探针，以及一种热稳定的且不具有５’核酸酶活性的ＤＮＡ聚合酶，在合适的ＰＣＲ反应条件下，可以同时检测至少１６个常见的与结核耐多药相关基因的突变位点。本发明专利技术中的检测方法和试剂盒可以用于耐多药结核病的早期诊断，克服了现有技术耗时长，需要大量人力物力，成本高等问题。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种检测耐药结核分枝杆菌的方法，包括：　　在一个扩增反应中扩增基因组区域，其中，所述基因组区域中的突变引起了结核分枝杆菌的耐药；　　所述扩增反应的扩增体系包括至少一条标记的寡核苷酸探针，至少一对扩增引物和一个热稳定的ＤＮＡ聚合酶；　　标记的寡核苷酸探针与扩增的基因组区域杂交形成的熔解曲线分析中产生一个熔解谱；　　所述标记的寡核苷酸探针与靶核苷酸序列杂交区域至少要包含一个突变核苷酸、或包含两个甚至更多的突变核苷酸，且所述标记的寡核苷酸探针与野生型或突变型靶核苷酸序列的突变位点互补；　　所述寡核苷酸探针是双标记探针，包括一个报告标记和一个猝灭标记；　　所述猝灭标记是非荧光猝灭基团，它标记在寡核苷酸探针的３’末端；所述报告标记是荧光基团，它可以标记在寡核苷酸探针内部的核苷酸残基上或５’末端；　　当双标记寡核苷酸探针处于未与扩增的基因组区域杂交的单链构象时，猝灭标记能够猝灭报告标记所发出的荧光；当双标记寡核苷酸探针与扩增的基因组区域杂交时，形成双链结构，报告标记的荧光不能够被猝灭，此时，报告标记的荧光强度要远高于此双标记寡核苷酸探针未与扩增的基因组区域杂交而处于单链状态时的荧光强度；　　所述扩增是不对称扩增，扩增中一条引物的浓度高于另外一条与之配对引物的浓度。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：富国良，罗涛，姜丽丽，高谦，
申请(专利权)人：无锡锐奇基因生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]