【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物工程领域，具体地涉及抗tgf-β抗体及其用途。
技术介绍
1、转化生长因子β(tgf-β)是一种控制许多关键细胞功能的细胞因子，包括增殖、分化、存活、迁移和上皮间充质转化。它调节多种生物过程，如细胞外基质形成、伤口愈合、胚胎发育、骨骼发育、造血、免疫和炎症反应以及恶性转化。tgf-β的失调导致病理状况，例如出生缺陷、癌症、慢性炎症以及自身免疫和纤维化疾病。
2、tgf-β具有三种已知的同种型——tgf-β1、2和3。所有三种同种型最初都被翻译成前肽(pro-peptide)。切割后，成熟的c-末端保持与n-末端相结合(称为潜在性相关肽(latency associated peptide)或lap)，形成从细胞分泌的小潜在性复合物(slc)。slc不能结合tgf-β受体ii(tgfβrii)阻止了受体接合。通过解离n-和c-末端的活化通过几种机制之一发生，包括蛋白水解切割、酸性ph或整合蛋白结构改变(connolly等，int j biol sci(2012)8(7):964-78)。
3、tgf-β1、2和3在其功能上是多效性的并且在不同细胞和组织类型中以不同的模式表达。它们具有相似的体外活性，但是特定细胞类型中的单个敲除表明尽管它们具有共享的结合相同受体的能力，但它们在体内具有不同的作用(akhurst等,nat rev drug discov(2012)11(10):790-811)。在tgf-β与tgfβrii结合后，受体的组成型激酶活性磷酸化并激活tgfβri，其使smad2/
4、鉴于tgf-β的不同功能，需要对人类患者安全的泛-tgf-β特异性治疗性抗体(bedinger等，mabs.(2016)8(2):389–404)。但是，tgf-β在物种间高度保守。结果，在动物例如小鼠中产生抗人tgf-β的抗体是一项具有挑战性的任务。
5、对于目前没有得到有效治疗的患者而言也存在医疗需求。例如，用抗pd1抗体nivolumab单一疗法治疗的iii期checkmate-067研究中超过50％的晚期黑素瘤患者对治疗不具有完全或部分的响应(larkin等，n engl j med(2015)373:23–34；redman等，bmc med(2016)14:20-30)。
技术实现思路
1、本专利技术提供了特异性结合人tgf-β1、tgf-β2和tgf-β3(即泛-tgf-β特异性)的改进的单克隆抗体。这些抗体在制造期间不易形成半抗体(即，具有一条重链和一条轻链的二聚体复合物)。它们还具有优越的药代动力学概貌(pharmacokinetic profile)，例如增加的半衰期，并因此可以赋予患者改善的临床益处。本专利技术人还发现tgf-β抑制，例如由本专利技术的抗体和抗原结合片段实现的tgf-β抑制，减轻了肿瘤中的免疫抑制性微环境并增强了免疫疗法的功效，所述免疫疗法例如靶向程序性细胞死亡蛋白1(pd-1)、pd-1配体1(pd-l1)和2(pd-l2)的疗法。
2、一方面，本专利技术提供了与人tgf-β1、tgf-β2和tgf-β3特异性结合的分离的单克隆抗体，其包含seq id no:1中的重链互补决定区(cdr)1-3和seq id no:2中的轻链cdr 1-3，其中所述抗体包含在228位(eu编号)具有突变的人igg4恒定区。在一些实施方案中，突变是丝氨酸成为脯氨酸的突变(s228p)。在一些实施方案中，抗体包含对应于seq id no:1的残基1-120的重链可变域(vh)氨基酸序列和对应于seq id no:2的残基1-108的轻链可变域(vl)氨基酸序列。在进一步的实施方案中，抗体包含seq id no:1中所示的重链氨基酸序列(具有或不具有c-末端赖氨酸)和seq id no:2中所示的轻链氨基酸序列。本专利技术的特征还在于上述抗体的f(ab’)2抗原结合片段。
3、在优选的实施方案中，与fresolimumab治疗相比，本专利技术的抗体或片段具有增加的半衰期、增加的暴露、或两者兼有。例如，增加为10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％或更多增加。药物如本专利技术的抗体或片段的暴露是药物在体内的浓度相对于时间的函数。药物在体内的浓度通常由血液、血浆或血清中的药物水平来表示。药物的半衰期和暴露(生物暴露)可通过众所周知的方法(如下面的实施例7所示的方法)测量。
4、本专利技术还提供了包含本专利技术的抗体的组合物，其中所述组合物包含小于1％的半抗体。半抗体形成可以通过对单克隆抗体制备物的纯度分析而确定，该分析通过使用例如在非还原条件下的sds-毛细管电泳或非还原性sds-page分析，继之以密度测定法或rp-hplc(angal等,mol immunol(1993)30(1):105-8；bloom等,protein science(1997)6:407-415；schuurman等,(2001)38(1):1-8；和solanos等,anal chem(2006)78:6583-94)。在一些实施方案中，这种组合物是还包含药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
5、另一方面，本专利技术提供了在有需要的患者(人)中抑制tgf-β信号转导的方法，其包括向患者施用治疗量的本专利技术的抗体或片段。在一些实施方案中，患者患有免疫介导的疾病(例如硬皮病)、纤维化病症(例如肾纤维化病症，诸如局灶节段性肾小球硬化症(fsgs)，或肺纤维化病症诸如特发性肺纤维化)，或者出生或骨缺损(例如，成骨不全症)。在一些实施方案中，患者患有癌症。在一些实施方案中，该方法中所述供使用的抗体或片段抑制cd4+t细胞向可诱导型调节性t细胞(itreg)的分化。所述抗体或片段可以减轻免疫抑制性肿瘤微环境。抗体或片段的这种作用有助于激活免疫系统并增强免疫疗法的功效。本文所述的治疗方法的功效可以通过例如患者中(例如患者的肿瘤组织中)的以下一项或多项来指示：(1)mip2和/或kc/gro水平的增加，(2)cd8+t细胞如inf-γ阳性cd8+t细胞的活化或浸润至肿瘤组织，以及(3)自然杀伤(nk)细胞的聚集(clustering)的增加。
6、本专利技术进一步提供了治疗患者(人)中的癌症的方法，其包括向患者施用(1)治疗有效量的本专利技术的抗体或片段，和(2)治疗有效量的免疫检查点蛋白抑制剂。这两种药剂可以同时施用(例如，以单一组合物或以分开的组合物)，或以任一顺序依次施用。例如，这两种药剂可以在同一天本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种分离的核酸分子，其编码特异性结合人TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3的单克隆抗体，所述抗体包含SEQ ID NO:1中的重链互补决定区(CDR)1-3和SEQ ID NO:2中的轻链CDR1-3，其中所述抗体包含在第228位(EU编号)具有脯氨酸的人IgG4恒定区。
2.根据权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所述抗体包含对应于SEQ ID NO:1的残基1-120的重链可变结构域(VH)氨基酸序列和对应于SEQ ID NO:2的残基1-108的轻链可变结构域(VL)氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所述抗体具有以下性质中的一个或多个：
4.一种载体，其包含根据权利要求1所述的核酸分子。
5.一种哺乳动物细胞，其包含权利要求1的编码所述抗体的重链和轻链的核苷酸序列。
6.一种生产抗体的方法，其包括
7.一种分离的核酸分子，其编码单克隆抗体，其中所述单克隆抗体的重链和轻链的氨基酸序列分别包含SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2。
8.一种载体，其包含根
9.一种哺乳动物细胞，其包含权利要求7的编码所述抗体的重链和轻链的核苷酸序列。
10.一种生产抗体的方法，其包括
11.一种生产药物组合物的方法，其包括：
...【技术特征摘要】
1.一种分离的核酸分子，其编码特异性结合人tgf-β1、tgf-β2和tgf-β3的单克隆抗体，所述抗体包含seq id no:1中的重链互补决定区(cdr)1-3和seq id no:2中的轻链cdr1-3，其中所述抗体包含在第228位(eu编号)具有脯氨酸的人igg4恒定区。
2.根据权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所述抗体包含对应于seq id no:1的残基1-120的重链可变结构域(vh)氨基酸序列和对应于seq id no:2的残基1-108的轻链可变结构域(vl)氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所述抗体具有以下性质中的一个或多个：
【专利技术属性】
技术研发人员：G·夏皮罗，K·布劳恩，P·费恩，R·C·格雷戈里，R·科杜里，刘锋，N·马尔科娃，P·曼库，J·R·波拉德，邱华伟，J·泰拉伯，C·温特，俞翠琤，
申请(专利权)人：赛诺菲，
类型：发明
国别省市：
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