【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体涉及一种以s基因重组质粒为模板的hda检测新型冠状病毒核酸的方法。
技术介绍
1、sars-cov-2属于β冠状病毒，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，直径60～140nm。sars-cov-2基因组是一个单股正链核糖核酸(single strand plus ribonucleic acid，ss+rna)，包含6个开放阅读框架(open reading frame，orf)，由29903个核苷酸组成。该病毒基因组编码多聚蛋白、结构蛋白和非结构蛋白等多种蛋白质，维持病毒的转录和复制，以及侵染宿主细胞等生命活动。其中，结构蛋白主要包括暴露在磷脂膜上的刺突蛋白(spike,，s)，以及包膜蛋白(envelope，e)、膜蛋白(membrane,，m)和核衣壳蛋白(nucleocapsid，n)。covid-19大流行期间，sars-cov-2的检测是监测发病率和管理流行病学过程的重要举措，其中，核酸检测已成为快速鉴定rna病毒的可靠工具。
2、hda技术是一种类似于体内dna复制的扩增方式。hda利用解旋酶在三磷酸腺苷存在情况下的解旋活性，将dna双链打开，无需热熔解步骤。为了防止dna链再次结合，加入单链结合蛋白与解旋的dna单链结合。上游引物和下游引物与dna单链结合，在dna聚合酶的作用下延伸形成新链，新链又会被解旋酶打开并被单链结合蛋白结合，从而进入新一轮的解旋扩增循环，如此反复循环。在60-65℃的单一温度下，60-120min内即可达到指数扩增。hda系统中使用的热稳定uvrd解旋酶极
技术实现思路
1、针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本专利技术提供一种以新型冠状病毒cdna为模板的hda检测新型冠状病毒核酸的方法。
2、本专利技术是由以下技术方案来实现的：
3、根据ncbi数据库中20个新型冠状病毒基因组(om000278.1、mw763131.1、mw763124.1、ol905489.1、ou127028.1、ou116911.1、mw763127.1、mw763125.1、ol803578.1、ou368952.1、ou368912.1、ou323744.1、ok341107.1、mz578788.1、ou368765.1、ou278275.1、ou277411.1、ou215007.1、ou201283.1、ou181166.1)的s基因序列和20个新型冠状病毒基因组(om000278.1、om462035.1、om461449.1、om461404.1、om435988.1、om435957.1、om435775.1、om435768.1、om435730.1、om435712.1、om435170.1、om435118.1、om434699.1、om434693.1、om434691.1、om434519.1、om434473.1、om433870.1、om433728.1、om433704.1)的n基因序列，分别以om000278.1为模板设计新型冠状病毒s、和n基因序列检测特异性扩增引物：
4、新型冠状病毒s基因扩增引物
5、p681h-f(5’-3’)：aacaactcatatgagtgtgacatac
6、p681h-r(5’-3’)：ttgactagctacactacgtgcccgccga
7、新型冠状病毒n基因扩增引物
8、n标准引物f(5’-3’)：ggggaatttctcctgctagaat
9、n标准引物r(5’-3’)：cagacattttgctctcaagctg
10、合成新型冠状病毒s基因部分序列：
11、(tcaggccggtagcacaccttgtaatggtgttgaaggttttaattgttactttcctttacaatcatatggtttccaacccacttatggtgttggttaccaaccatacagagtagtagtactttcttttgaacttctacatgcaccagcaactgtttgtggacctaaaaagtctactaatttggttaaaaacaaatgtgtcaatttcaacttcaatggtttaacaggcacaggtgttcttactgagtctaacaaaaagtttctgcctttccaacaatttggcagagacattgatgacactactgatgctgtccgtgatccacagacacttgagattcttgacattacaccatgttcttttggtggtgtcagtgttataacaccaggaacaaatacttctaaccaggttgctgttctttatcaggatgttaactgcacagaagtccctgttgctattcatgcagatcaacttactcctacttggcgtgtttattctacaggttctaatgtttttcaaacacgtgcaggctgtttaataggggctgaacatgtcaacaactcatatgagtgtgacatacccattggtgcaggtatatgcgctagttatcagactcagactaattctcatcggcgggcacgtagtgtagctagtcaatccatcattgcctacactatgtcacttggtgcagaaaattcagttgcttactctaataactctattgccatacccataaattttactattagtgttaccacagaaattctaccagtgtctatgaccaagacatcagtagattgtacaatgtacatttgtggtgattcaactgaatgcagcaatcttttgttgcaatatggcagtttttgtacacaattaaaccgtgctttaactggaatagctgttgaacaagacaaaaacacccaagaagtttttgcacaagtcaaacaaatttacaaaacaccaccaattaaagattttggtggttttaatttttcacaaatattaccagatccatcaaaaccaagcaagaggtcatttattgaagatctacttttcaacaaagtgacacttgcagatgctggcttcatcaaacaatatggtgattgccttggtgatattgctgctagagacctcatttgtgcacaaaagtttaacggccttactgttttgccacctttgctcacagatgaaatgattgctcaatacacttctgcactgttagcgggtacaatcacttctggttgga本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.以新型冠状病毒cDNA为模板的HDA检测新型冠状病毒核酸的方法扩增引物，其特征在于，序列如下：
2.以新型冠状病毒cDNA为模板的HDA检测新型冠状病毒核酸的检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的扩增引物。
3.以新型冠状病毒cDNA为模板的HDA检测新型冠状病毒核酸的检测方法，其特征在于，包括下列步骤：
【技术特征摘要】
1.以新型冠状病毒cdna为模板的hda检测新型冠状病毒核酸的方法扩增引物，其特征在于，序列如下：
2.以新型冠状病毒cdna为模板的hda检测新型冠状病毒核...
【专利技术属性】
技术研发人员：滕新栋，刘迪，张瑾，王渊，
申请(专利权)人：青岛国际旅行卫生保健中心青岛海关口岸门诊部，
类型：发明
国别省市：
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