【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药工程领域，特别是医美原料领域，具体涉及一种重组类人源ⅲ型胶原蛋白及其制备方法和应用。
技术介绍
1、胶原蛋白(collagen)是人体和脊椎动物的主要结构蛋白，可起支持、保护、连接等多种作用。胶原蛋白正常的三螺旋构象是其理化特性和生物学活性的基础，使其具备高拉伸强度、生物降解性能等特性。人体内存在着多种胶原蛋白，根据其生理功能和作用的差异可以分为i型、ii型、ⅲ型、iv型和v型等30多种。
2、人iii型胶原蛋白主要产生在婴儿期，呈疏松的丝网状，比较细小，占皮肤的10-15％。主要散布于表皮真皮连接处，为皮肤提供弹性和抗应力性。iii型胶原具有很好的促修复愈合作用，改善皮肤弹性、愈合能力。然而随着年龄的增长，ⅲ型胶原蛋白在持续加速流失，并且不可自体再生。研究表明，可采用外源性胶原蛋白直接补充iii型胶原蛋白。比如，通过植入方式将胶原蛋白导入皮下，增加真皮层组织的容量，可以达到淡化皱纹，让皮肉更加饱满有弹性的效果。此外，胶原蛋白在烧伤治疗、创伤治疗、止血、眼科治疗和口腔科治中，发挥非常重要的作用，国外也有研究将胶原蛋白作为支架材料用于构建器官。
3、重组人源ⅲ型胶原蛋白具有如下优势：(1)相容性优，重组ⅲ型人源化胶原蛋白具有明确的三螺旋结构，相容性优，不会引起排异反应。(2)修复能力强，重组ⅲ型人源化胶原蛋白具有双向调节修复再生功能，既补充了皮肤所缺失的三型胶原蛋白，同时修复了受损老化的成纤维细胞。(3)吸水能力强，其特有活性的三螺旋网状结构含有众多的水分子，相邻三螺旋之间的相互作用形成致
4、现有技术已经公开了多种不同序列的重组人源ⅲ型胶原蛋白及其制备方法。专利文献1(cn116640206b，公告日2023.10.10)公开了一段全新的人源化ⅲ型胶原蛋白序列，其核苷酸序列经毕赤酵母密码子偏好性优化，并通过多位点整合质粒介导的重组菌构建方法，构建了一株高产重组人源化ⅲ型胶原蛋白的工程酵母菌株，该菌株较优化前发酵上清液目标蛋白的浓度提高了2倍。专利文献2(cn116854808a，公开日2023.10.10)公开了一种人源ⅲ型胶原蛋白及其制备方法，构建方法为：将人源ⅲ型胶原蛋白的基因片段插入修改后的质粒中得到重组质粒，将重组质粒线性化后电转化毕赤酵母得到重组工程菌，通过高浓度抗生素筛选得到高表达的菌株。所述人源ⅲ型胶原蛋白的氨基酸序列如seq id no.1所示，具体为iii型胶原蛋白的306～732位氨基酸片段。筛选得到的高表达菌株稳定性强，在诱导表达第9d仍未出现明显的降解，其诱导表达第9d的人源ⅲ型胶原蛋白产量为0.47g/l。专利文献3(cn116535494a，公开日2023.08.04)是专利技术人之前研发成果的在前申请，其公开了一种重组类人源ⅲ型胶原蛋白及其应用。根据疏水性，对人天然ⅲ型胶原蛋白进行改造，人为筛选设计获得类人源ⅲ型胶原蛋白col3a1-qs-1，其具有优异的水溶性和亲水性，同时具有良好的保湿性、吸湿性和生物相容性，以及较好的细胞增殖、修护功效和抗皱紧致功效。此外，还实现了胶原蛋白col3a1-qs-1在毕赤酵母中的高效分泌表达，蛋白产量达到5g/l，易于进行放大和下游处理。还提供了胶原蛋白col3a1-qs-1的超滤浓缩纯化、冻干方法，冻干粉纯度可达到95％以上。
5、然而，上述现有技术公开的重组人源ⅲ型胶原蛋白虽然产量有所提高，但是仍然难以达到工业化大规模生产的水平。并且，虽然现有技术一直在改造人源ⅲ型胶原蛋白，以提高水溶性、亲水性、保湿性等功能，但是仍然需要提高重组人源ⅲ型胶原蛋白对于细胞的修护功效、抗皱紧致功效等。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术解决的技术问题是提供一种产量显著提升、适合工业化生产，对细胞有显著提升修护功效和抗皱紧致功效，且水溶性和亲水性、保湿性和吸湿性效果优异的类人源ⅲ型胶原蛋白col3a1-6及其制备方法和应用等。
2、本专利技术的一方面提供一种重组类人源ⅲ型胶原蛋白，命名为col3a1-6，其特征在于，所述重组类人源ⅲ型胶原蛋白的氨基酸序列选自(1)或(2)：
3、(1)氨基酸序列如seq id no：1所示。
4、(2)seq id no：1的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸，且具有ⅲ型胶原蛋白活性的由seq id no：1衍生的氨基酸序列。
5、本专利技术的另一方面提供一种分离的核酸，其特征在于，编码所述重组类人源ⅲ型胶原蛋白。
6、进一步地，编码所述重组类人源ⅲ型胶原蛋白的核酸序列如seq id no：2所示。
7、本专利技术的另一方面提供一种重组载体，其特征在于，包含所述的核酸。
8、进一步地，所述载体为酵母系统表达载体，原核细胞表达载体，哺乳动物细胞表达系统，或昆虫细胞表达载体。
9、进一步地，所述酵母系统表达载体为ppiczαa，ppic9，ppic9k，phil-s1，或pyam75p载体。
10、本专利技术的另一方面提供一种重组宿主细胞，其特征在于，包含所述的核酸或所述的重组载体。
11、进一步地，所述重组宿主细胞为酵母，细菌，哺乳动物细胞，或昆虫细胞。
12、进一步地，所述酵母为毕赤酵母x33，gs115，smd1168，km71，或km71h菌株。
13、本专利技术的另一方面提供一种组合物，其特征在于，包含所述重组类人源ⅲ型胶原蛋白。
14、进一步地，所述组合物为冻干粉。
15、本专利技术的另一方面提供一种发酵表达制备所述重组类人源ⅲ型胶原蛋白的方法，其特征在于，包含种子培养、发酵培养和发酵上清的制备步骤。
16、进一步地，所述方法包含如下步骤：
17、(1)种子培养；
18、(2)发酵培养：将种子液接种到发酵培养基中，发酵罐培养，控制适合的do、搅拌转速、通气量、温度，在适合的生长阶段开始流加、诱导表达；
19、(3)发酵上清的制备：培养至适合的时间结束培养，取发酵液去除菌体，过滤，获得发酵上清液。
20、本专利技术的另一方面提供一种纯化所述重组类人源ⅲ型胶原蛋白的方法，其特征在于，包含将所述重组类人源ⅲ型胶原蛋白的发酵上清液进行超滤浓缩的步骤，获得纯化的所述重组类人源ⅲ型胶原蛋白。
21、本专利技术的另一方面提供一种制备所述重组类人源ⅲ型胶原蛋白的冻干粉的方法，其特征在于，包含将纯化的所述重组类人源ⅲ型胶原蛋白进行预冻干，以及冻干步骤。
22、本专利技术的另一方面提供所述重组类人源ⅲ型胶原蛋白、所述核酸，所述重组载体，或所述重组宿主细胞在以下任一项中的用途：
23、(1)制备功能性化妆品；
24、(2)制备医美类化妆品；或者，
25、(3)制备医用敷料。
26、本专利技术提供的重组类人源ⅲ型胶原蛋本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种重组类人源Ⅲ型胶原蛋白，命名为COL3A1-6，其特征在于，所述重组类人源Ⅲ型胶原蛋白的氨基酸序列选自(1)或(2)：
2.一种分离的核酸，其特征在于，编码权利要求1所述重组类人源Ⅲ型胶原蛋白。
3.根据权利要求2所述的核酸，其特征在于，所述核酸序列如SEQ ID NO：2所示。
4.一种重组载体，其特征在于，包含权利要求2或3所述核酸。
5.一种重组宿主细胞，其特征在于，包含权利要求2或3所述核酸，或权利要求4所述重组载体。
6.一种组合物，其特征在于，包含权利要求1所述重组类人源Ⅲ型胶原蛋白，权利要求2或3所述核酸，权利要求4所述重组载体，或权利要求5所述重组宿主细胞。
7.根据权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述组合物为冻干粉。
8.一种发酵表达制备权利要求1所述重组类人源Ⅲ型胶原蛋白的方法，其特征在于，包含种子培养、发酵培养和发酵上清的制备步骤。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法包含如下步骤：
10.一种纯化权利要求1所述重组类人源Ⅲ型
11.一种制备权利要求1所述重组类人源Ⅲ型胶原蛋白的冻干粉的方法，其特征在于，包含将纯化的所述重组类人源Ⅲ型胶原蛋白进行预冻干，以及冻干步骤。
12.权利要求1所述重组类人源Ⅲ型胶原蛋白、权利要求2或3所述核酸，权利要求4所述重组载体，或权利要求5所述重组宿主细胞在以下任一项中的用途：
...【技术特征摘要】
1.一种重组类人源ⅲ型胶原蛋白，命名为col3a1-6，其特征在于，所述重组类人源ⅲ型胶原蛋白的氨基酸序列选自(1)或(2)：
2.一种分离的核酸，其特征在于，编码权利要求1所述重组类人源ⅲ型胶原蛋白。
3.根据权利要求2所述的核酸，其特征在于，所述核酸序列如seq id no：2所示。
4.一种重组载体，其特征在于，包含权利要求2或3所述核酸。
5.一种重组宿主细胞，其特征在于，包含权利要求2或3所述核酸，或权利要求4所述重组载体。
6.一种组合物，其特征在于，包含权利要求1所述重组类人源ⅲ型胶原蛋白，权利要求2或3所述核酸，权利要求4所述重组载体，或权利要求5所述重组宿主细胞。
7.根据权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述组合物为...
【专利技术属性】
技术研发人员：左涛，刘立，陈炯，张越，刘二龙，王满朝，
申请(专利权)人：江苏耀海生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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