一种突变的核糖核酸酶R及其应用制造技术

技术编号:40143233 阅读:34 留言:0更新日期:2024-01-23 23:56
本发明专利技术提供一种突变的核糖核酸酶R(RNase R)及其应用。本发明专利技术通过对大肠杆菌核糖核酸酶RNase R位点突变进行创造性地选择和筛选,提供了10种突变的核糖核酸酶R,获得相对于亲本酶活显著提高的突变体T495E、A246E、K457F、A246F、D281F、D122L。其中突变体T495E酶活提高最显著,相对酶活提高了37.48%,其他突变体酶活分别提高了24.74%、21.74%、10.04%、10.34%、6.75%。本发明专利技术还提供高表达核糖核酸酶RNase R的重组大肠杆菌,用于实现RNase R突变体的高效生产,具有良好的工业应用前景。本发明专利技术提供的酶活提高的核糖核酸酶R突变体适合工业上大规模制备mRNA,特别是在降解线性RNA或生产circRNA相关领域中的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程以及医药领域,特别涉及核糖核酸酶r领域,尤其是突变的核糖核酸酶r及其应用。本案是申请号为202211610204.8,专利技术名称为“一种突变的核糖核酸酶r及其应用”的分案申请。


技术介绍

1、核糖核酸酶r(rnase r)是一种依赖镁的3'→5'外核糖核酸酶,其基本上消化所有线性rna,但不消化套索状或环状rna结构,或比3'突出端短的双链rna 7个核苷酸。大多数细胞rna会被rnase r完全消化,但trna,5s rna和内含套索蛋白除外。套索的3'-尾巴将被rnase r修饰为分支点核苷酸,其中存在2',5'-磷酸二酯键。

2、环状rna(circular rna,circrna)是区别于线性rna的一类新型环状非编码rna,半衰期长,具有物种保守性和组织特异性。其独特的环状结构使其不容易被rna酶降解,因此在细胞内稳定性很强,在新型生物标记、生物学机制研究等方向具有巨大的潜力和研究价值。

3、“circrna”这一概念最早出现在1971年,在rna病毒中被发现,但长期以来,由于其表达丰度很低,所以一本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种突变的核糖核酸酶R,其特征在于,在亲本核糖核酸酶R的基础上包含突变,所述突变为A246E或A246F,所述亲本核糖核酸酶R的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.根据权利要求1所述的突变的核糖核酸酶R,其特征在于,所述突变的核糖核酸酶R为突变体A246E或A246F,所述突变体A246E的氨基酸序列如SEQ ID NO:25所示,所述突变体A246F的氨基酸序列如SEQ ID NO:26所示。

3.根据权利要求1或2所述的突变的核糖核酸酶R,其特征在于,所述亲本核糖核酸酶R的DNA序列如SEQ ID NO.2所示。

4.一种重组核酸,其...

【技术特征摘要】

1.一种突变的核糖核酸酶r,其特征在于,在亲本核糖核酸酶r的基础上包含突变,所述突变为a246e或a246f,所述亲本核糖核酸酶r的氨基酸序列如seq id no:1所示。

2.根据权利要求1所述的突变的核糖核酸酶r,其特征在于,所述突变的核糖核酸酶r为突变体a246e或a246f,所述突变体a246e的氨基酸序列如seq id no:25所示,所述突变体a246f的氨基酸序列如seq id no:26所示。

3.根据权利要求1或2所述的突变的核糖核酸酶r,其特征在于,所述亲本核糖核酸酶r的dna序列如seq id no.2所示。

4.一种重组核酸,其特征在于,包含编码权利要求1-3任一项所述突变的核糖核酸酶r的核酸。

5.一种表达盒,其特征在于,包含权利要求4所述的重组核酸。

6.一种载体,其特征在于,包含权利要求4所述的重组核酸、或权利要求5所述的表达盒。

7.根据权利要求6所述的载体,其特征在于,所述载体为表达载体。

8.一种细胞,其特征在于,包含权利要求4所述的重组核酸、或权利要求5所述的表达盒、或权利要求6或7所述的载体。

9.一种重组菌,其特征在于,包含权利要求4所述的重组核酸、或权利要求5所述的表达盒、或权利要求6或7所述的载体。

10.根据权利要求9所述的重组菌,其特征在于,所述菌为大肠杆菌。

11.根据权利要求10所述的重组菌,其特征在于,所述大肠杆菌为e.coli bl21(de3)、e.coli origami b(de3)或e.coli rosetta blue(de3)中的一种。

12.根据权利要求11所述的重组菌,其特征在于,所述大肠杆菌为e.coli bl21(de3)。

13.一种组合物,其特征在于,包含权利要求1-3任一项所述突变的核糖核酸酶r、或权利要求4所述的重组核酸、或权利要求5所述的表达盒、或权利要求6或7所述的载体、或权利要求8所述的细胞、或权利要求9-12任一项所述的重组菌。

14.一种试剂盒,其特征在于,包...

【专利技术属性】
技术研发人员:左涛刘立汪芸王鹏源王满朝
申请(专利权)人:江苏耀海生物制药有限公司
类型:发明
国别省市:

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