【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术属于延长蛋白的血浆半衰期领域，特别涉及开发可用于此目的的白蛋白的新结合物。
技术介绍
1、将实验室实验转化为体内环境以评估分子的安全性和疗效需要考虑其他参数。对于暴露于全身循环的产品，最重要的变化是产品在血管血流中停留的影响。管理在血液中的停留时间是必要的，可以通过使用白蛋白这种最丰富的循环蛋白作为临时载体来提供这种管理。这可以通过将感兴趣的化合物通过与所述化合物融合或缀合的特定配体瞬时连接至血清白蛋白来实现。
技术实现思路
1、本专利技术涉及包含sac7d蛋白的变体或sac7d家族蛋白的变体的多肽，特别是与白蛋白结合的aho7c，以及其特别用于延长在体内与其结合的分子(包括肽或多肽)的半衰期。
2、这种变体与人和鼠血清白蛋白均结合，这对于加快产品的临床开发以及从动物到人的转化具有重要意义。事实上，大多数血清白蛋白结合物在小鼠和人之间不会发生交叉反应。此外，亲和力很重要，从而保证变体与血清白蛋白的强结合(和低周转率)(因此增加与变体相连的生物分子的血清半衰期)。这些变体还与血清白蛋白的表位结合，该表位不会妨碍血清白蛋白与fcr的结合，因而不会妨碍血清白蛋白/与生物分子相关联的变体复合物的再循环，这对增加与生物分子相关联的变体的血清半衰期很有意义。该变体是一种小蛋白，不会消除与其相关联的生物分子自身的生物活性。
3、特别地，在某些实施方案中，所述变体基于sac7d蛋白，并且包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:4
4、特别地，变体包含seq id no:38或seq id no:38的氨基酸1-54。
5、特别地，变体包含选自以下的序列：seq id no:48、seq id no:51、seq id no:55、seq id no:58、seq id no:62、seq id no:65以及这些序列的氨基酸1-57。
6、特别地，变体包含选自以下的序列：seq id no:69、seq id no:72、seq id no:76、seq id no:79、seq id no:83、seq id no:86以及这些序列的氨基酸1-55。
7、本专利技术还涉及编码变体的核酸、包含变体和活性物质的多肽、生产方法、以及变体单独或与活性物质组合的用途。
8、特别地，本专利技术涉及
9、—本文公开的多肽，其包含与人和小鼠血清白蛋白结合的sac7d家族成员的变体。
10、—本文公开的多肽，其中与人和小鼠血清白蛋白结合的sac7d家族成员的变体缀合至有机分子。
11、—本文公开的多肽，其中与人和小鼠血清白蛋白结合的sac7d家族成员的变体缀合至另一多肽。
12、—本文公开的多肽，其中另一多肽是sac7d家族蛋白的另一变体。
13、—编码本文公开的多肽的核酸分子。
14、—包含本文公开的核酸分子的表达载体。
15、—包含本文公开的核酸分子、或本文公开的表达载体的宿主细胞。
16、—药物组合物，其包含本文公开的多肽、本文公开的核酸、本文公开的表达载体或本文公开的宿主细胞以及药学上可接受的载体。
17、—用于产生本文公开的多肽的方法，包括
18、(a)培养细胞培养物，其中细胞已经被本文公开的表达载体转化，
19、和
20、(b)回收多肽。
21、—本文公开的多肽作为药物。
22、—本文公开的多肽用于治疗或预防疾病，其中所述变体与治疗或预防疾病的活性物质相关联。
23、专利技术详述
24、需要注意的是，上面指出的序列可以在其n末端包含甲硫氨酸，但如果不包含列在每个序列n末端的这样的甲硫氨酸，也可以实施本专利技术。类似地，位于蛋白末端的氨基酸可以被省略。特别地，位于sac7d的残基l58之后的氨基酸(位于seq id no:16的l60之后的残基)可以省略。因此，变体可以包含seq id no:45至seq id no:65中任一个的氨基酸1-57、1-58、1-59、1-60、1-61、1-62或1-63。
25、当基于aho7c支架时，变体可包含seq id no:66至seq id no:86中任一个的氨基酸1-55、1-56、1-57或1-58。
26、这种变体能够融合至生物分子和/或缀合至小化学实体，延长分子的血浆半衰期，从而提高疗效或生物利用度，或允许使用较少的量。需要这种半衰期延长的典型分子是小化学分子(例如，抗癌的细胞毒性剂，如奥瑞他汀或多柔比星)、肽(胰岛素类似物，如glp-1)、小蛋白支架如来自嗜酸热硫化叶菌(sulfolobus acidocaldarius)的sac7d(以及类似物，如aho7c或sso7d)衍生物、抗体模拟物，如亲和体(affibodies)、亲和素(affilins)、affimers、alphabodies、anticalins、avimers、darpins、fynomer、kunits结构域肽、单体、蛋白a的z结构域、γb结晶、泛素、半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystatin)、脂质运载蛋白、膜受体的结构域、锚蛋白重复基序、fyn的sh3结构域、蛋白酶抑制剂的kunits结构域、纤连蛋白的第10个iii型结构域、3或4螺旋束蛋白、犰狳重复结构域、富含亮氨酸的重复结构域、pdz结构域、sumo或sumo样结构域、免疫球蛋白样结构域、磷酸酪氨酸结合结构域、普列克底物蛋白(pleckstrin)同源结构域、src同源2结构域或合成肽配体、抗体片段(包括fab、vhh、sc本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种蛋白，其包含与人和小鼠血清白蛋白结合的Sac7d家族成员的变体，其中所述变体在所述Sac7d家族成员与其天然配体的结合界面中包含4至20个突变的残基，其中所述变体包含K22W、W24L、T33K、R42Y突变，其中编号对应于Sac7d序列SEQ ID NO:1中的位置。
2.根据权利要求1所述的多肽，其进一步包含至少一个选自D16E、N37Q和M57L的突变，其中编号对应于Sac7d序列SEQ ID NO:1中的位置。
3.根据权利要求1或2所述的多肽，其中所述Sac7d家族成员与其天然配体结合的界面中的突变的残基选自Sac7d的V2、K3、K5、K7、Y8、K9、G10、E14、T17、K21、K22、W24、V26、G27、K28、M29、S31、T33、D36、N37、G38、K39、T40、A44、S46、E47、K48、D49、A50和P51。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的多肽，其进一步包含至少一个选自Y8F、Y8P、A44F、A44V的突变，其中编号对应于Sac7d序列SEQ ID NO:1中的位置。
5
6.根据权利要求1至5中任一项所述的多肽，其包含SEQ ID NO:38或SEQ ID NO:38的氨基酸1-54。
7.根据权利要求6所述的多肽，其包含选自SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:65的序列，以及这些序列的氨基酸1-57。
8.根据权利要求6所述的多肽，其包含选自SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:86的序列，以及这些序列的氨基酸1-55。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的多肽，其包含与人和小鼠血清白蛋白结合的Sac7d家族成员的变体。
10.根据权利要求1至8中任一项所述的多肽，其中所述与人和小鼠血清白蛋白结合的Sac7d家族成员的变体缀合至有机分子。
11.根据权利要求1至8中任一项所述的多肽，其中所述与人和小鼠血清白蛋白结合的Sac7d家族成员的变体缀合至另一多肽，特别是缀合至Sac7d家族蛋白的另一变体。
12.一种核酸分子，其编码权利要求1至9和11中任一项所述的多肽。
13.一种药物组合物，其包含权利要求1-11中任一项所述的多肽、或权利要求12所述的核酸以及药学上可接受的载体。
14.一种产生权利要求1至9和11至12中任一项所述的多肽的方法，包括以下步骤：
15.根据权利要求10至11中任一项所述的多肽用作药物。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种蛋白，其包含与人和小鼠血清白蛋白结合的sac7d家族成员的变体，其中所述变体在所述sac7d家族成员与其天然配体的结合界面中包含4至20个突变的残基，其中所述变体包含k22w、w24l、t33k、r42y突变，其中编号对应于sac7d序列seq id no:1中的位置。
2.根据权利要求1所述的多肽，其进一步包含至少一个选自d16e、n37q和m57l的突变，其中编号对应于sac7d序列seq id no:1中的位置。
3.根据权利要求1或2所述的多肽，其中所述sac7d家族成员与其天然配体结合的界面中的突变的残基选自sac7d的v2、k3、k5、k7、y8、k9、g10、e14、t17、k21、k22、w24、v26、g27、k28、m29、s31、t33、d36、n37、g38、k39、t40、a44、s46、e47、k48、d49、a50和p51。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的多肽，其进一步包含至少一个选自y8f、y8p、a44f、a44v的突变，其中编号对应于sac7d序列seq id no:1中的位置。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的多肽，其选自来自嗜酸热硫化叶菌(sulfolobusacidocaldarius)的sac7d、来自嗜酸热硫化叶菌(sulfolobus acidocaldarius)的sac7e、来自硫磺矿硫化叶菌(sulfolobus solfataricus)的sso7d、来自希氏硫化叶菌(sulfolobus shibatae)的ssh7b、来自希氏硫化叶菌(sulfolobus shibatae)的ssh7a、来自头寇岱硫化叶菌(sulfolobus tokodaii)的dbp7、来自冰岛硫化叶菌(sulfolobusislandicus)的sis7a、来自勤奋金属球菌(metallosphaera sedula)的mse7、来自嗜铜金属球菌(metallosphaera cuprina)的...
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