一种提取残留阿维菌素的方法技术

本发明专利技术涉及一种从结晶母液中提取残留阿维菌素的方法，包括酯类杂质去除和利用Ｃ１８柱或硅胶柱进一步分离各组份。本分离提取工艺简单，选用的溶剂价廉、安全、环保，符合产业化需求，有效成分Ｂ１收率高，达９０％左右。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种从抗生素废液中提取残留的有生物活性的抗生素组份的 方法，尤其涉及一种从阿维菌素的结晶母液中分离提取有效组份B1和相关的生物活性组 份的方法。
技术介绍
阿维菌素，英文名称Avermectins，是由日本北里大学大村智等和美国Merck公司 首先开发的一类具有杀虫、杀螨、杀线虫活性的十六元大环内酯化合物。阿维菌素自80年 代初问世以来已广泛应用于动物寄生虫病防治和农作物害虫的防治。阿维菌素共包括8个组分Ala、Alb、A2a、A2b、Bla、Bib、B2a、B2b,主要有4种即 Ala、A2a、Bla和B2a，其中avermectinBla的生物活性最强。阿维菌素的生产工艺过程如下用经优选的高产斜面菌种制备液体菌种，然后发 酵培养260小时左右，发酵结束，将发酵液经板框压滤，弃滤液，得菌丝体滤饼经干燥后用 甲醇提取，之后脱溶剂并转相脱水溶性和部分醇溶性杂质，然后加入适量的甲醇或乙醇进 行结晶，即可获得阿维菌素结晶(B1组份)和结晶母液。在结晶母液中残留有阿维菌素(B1)和阿维菌素的同系物A1、A2、B2组份，母液中 还含有8 18个碳的脂肪酸及其与甘油形成的酯类物质，以上组份在脱净溶剂后的母液中 所占的百分比组成为B1组份占5%左右；B2 + A2 + A1占40%左右；酯类杂质占50%左右。 B1组份是现阶段广泛应用于动、植物以防治害虫和寄生虫的组份，A1、A2、B2组份同样具有 杀虫活性，是有待于开发的组份。其中B2a组份是一种杀植物地下线虫活性较高的组份之 一。然而，从母液中进一步采用结晶的方法直接分离其中残留的活性组份，几乎是不可能， 这是因为大量的酯类杂质的存在和A组份不易结晶所致。我国自1993年开始生产阿维菌素至今年产量已达2000吨左右，但是在结晶母液 中残留有15%左右的阿维菌素(占总量的百分比)由于提取不出来而被弃之或非法出售，尚 有阿维菌素B2a、A2a、Ala等活性成份均残留在母液中而未被合理应用，造成环境污染和资 源浪费。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对目前阿维菌素结晶母液活性成分难以提取的问题，提供一种 提取残留阿维菌素的方法，它通过柱层析法在适当的温度压力控制下，使有效组分结晶收 率达90%以上，从而满足了产业部门的需要，解决了人们长期渴望解决而未能获得成功的 技术难题。本专利技术的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的 ，包括以下步骤a、将结晶母液蒸馏脱除溶剂，获得脱溶剂后的第一油状液；b、采用硅胶柱层析方法进一步分离第一油状液柱层析用的固定相为硅胶，流动相为3体积比为2/1的乙酸乙酯/石油醚，在柱温50°C 60°C、柱压大于0. 5MPa的条件下进行洗 脱，最先流出的组份为酯溶性杂质；在酯溶性杂质流出后改换单一溶剂乙酸乙酯为流动相， 将阿维菌Bl、Al、B2、A2四组份从柱子中洗脱出来，然后将洗脱液蒸馏脱除乙酸乙酯，获得 含B1、A1、B2、A2四组份的第二油状液；c、采用碳十八烷基硅烷柱层析方法拆分所述第二油状液中的Bl、Al、B2、A2四组份 柱层析用的固定相为C18，流动相为体积比为(81 90)/(10 19)的甲醇/水，在柱温 50°C 60°C、柱压大于0. 5MPa的条件下洗脱，最先流出的组份为酯溶性杂质，其后依次为 B2a、A2a、Blb、Bla、Ala，分别回收含B2a、Blb和Bla的洗脱液，最后减压蒸馏脱除溶剂获得 Bl￡t、Blb、B2￡u优选地，所述甲醇/水流动相的体积比为85/17。本专利技术还提供了，包括以下步骤a、将结晶母液蒸馏脱除溶剂，获得脱溶剂后的第一油状液；b、采用硅胶柱层析方法进一步分离第一油状液柱层析用的固定相为硅胶，流动相为 体积比为2/1的乙酸乙酯/石油醚，在柱温50°C 60°C、柱压大于0. 5MPa的条件下进行洗 脱，最先流出的组份为酯溶性杂质；在酯溶性杂质流出后改换单一溶剂乙酸乙酯为流动相， 将阿维菌Bl、Al、B2、A2四组份从柱子中洗脱出来，然后将洗脱液蒸馏脱除乙酸乙酯，获得 含B1、A1、B2、A2四组份的第二油状液；c、采用硅胶柱层析方法拆分所述第二油状液中的B1、A1、B2、A2四组份柱层析用的固 定相为硅胶，流动相为体积比为9/9/2/1的乙酸乙酯/三氯甲烷/ 二氯甲烷/甲醇，柱温为 50°C 60°C，柱压维持在0. 5MPa 3MPa，最先流出的组份为含A组份的洗脱液，其后为含 B组份的洗脱液，然后将含B组份的洗脱液用蒸馏法脱除溶剂后，用乙醇或甲醇在60°C 70°C回流溶解，最后在搅拌条件下降温至5°C 30°C，析出Bla。现代高效液相色谱中，分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。层析法 利用不同物质在不同相态的选择性分配，以流动相对固定相中的混合物进行洗脱，混合物 中不同的物质会以不同的速度沿固定相移动，最终达到分离的效果。本专利技术选择价廉、安 全、环保的流动相，配合固定相，在适当的温度和压力下，依据柱层析原理有效地从阿维菌 素的结晶母液中分离提取出B1、A1、B2、A2组分。本专利技术提供的提取残留阿维菌素的方法，在上述步骤b后，有两种可供选择的步 骤即C1或C2可以分离出各组分。步骤C1:固定相十八烷基硅烷(C18)；流动相甲醇/水=(81 90)/(10 19)；在50 60°C，大于5公斤压力条件下进行洗脱，采用紫外检测仪进行在线监测。其流 出组份先后顺序为B2a、A2a、Blb、Bla、Ala，分步将上述组份回收；回收液减压蒸馏除去部 分甲醇后，活性组份即可析出。就Bla而言，浓缩到Bla浓度为5% 6%时，于15°C左右即 可析出。步骤C2:固定相仍为硅胶，流动相为体积比为9/9/2/1的乙酸乙酯/三氯甲烷/ 二氯甲烷/甲 醇，在50°C 60°C、大于5公斤压力下进行柱层析，可将A (41+々2)与8 (Bl + B2)拆分4开，即先流出柱的组份为Ala与A2a混合物，之后流出的组份为Bla与B2a的混合物。后者 经脱溶剂后，用乙醇或甲醇在在60°C 70°C回流溶解，然后降到5°C 30°C进行结晶，Bla 可大部分结晶出来，结晶收率达理论收率的90%左右。由于Ala、A2a、Bla和B2a的结构非常近似，分离上述四种物质较为困难，常规柱层 析提取物质成分的收率一般在理论收率的80%左右，而本专利技术提供的提取残留阿维菌素的 方法收率可达90%以上，具有显著的进步，且操作简单，成本低。综上所述，本专利技术具有以下有益效果1、解决了现有技术阿维菌素结晶母液活性成分难以提取的问题，为今后从阿维菌素废 液中有效分离提取活性组分开辟了方向；2、分离提取工艺简单；3、选用的溶剂价廉、安全、环保，符合产业化需求；4、结晶收率高，浓缩后析出的有效组分收率达理论产量的90%左右。具体实施例方式实施例一(1)取阿维菌素结晶母液14公斤，于70°C、真空度为0.08MPa条件下除净溶剂，得第一 油状液10公斤。经高效液相色谱法HPLC分析，该油状液含Bla5. 5%、B2al6. 7%、A2al4. 2%、 Alall. 1% ；(2)向第一油状液中加入10升乙酸乙酯和5升石油醚作流动相，60°C回流溶解备用；(3)将硅胶柱用流动相洗脱平衡后，使液面降至床体面备用；(4)上样，将用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提取残留阿维菌素的方法，包括以下步骤：　　ａ、将结晶母液蒸馏脱除溶剂，获得脱溶剂后的第一油状液；　　ｂ、采用硅胶柱层析方法进一步分离第一油状液：柱层析用的固定相为硅胶，流动相为体积比为２／１的乙酸乙酯／石油醚，在柱温５０℃～６０℃、柱压大于０．５ＭＰａ的条件下进行洗脱，最先流出的组份为酯溶性杂质；在酯溶性杂质流出后改换单一溶剂乙酸乙酯为流动相，将阿维菌Ｂ１、Ａ１、Ｂ２、Ａ２四组份从柱子中洗脱出来，然后将洗脱液蒸馏脱除乙酸乙酯，获得含Ｂ１、Ａ１、Ｂ２、Ａ２四组份的第二油状液；　　ｃ、采用碳十八烷基硅烷柱层析方法拆分所述第二油状液中的Ｂ１、Ａ１、Ｂ２、Ａ２四组份：柱层析用的固定相为Ｃ１８，流动相为体积比为（８１～９０）／（１０～１９）的甲醇／水，在柱温５０℃～６０℃、柱压大于０．５ＭＰａ的条件下洗脱，最先流出的组份为酯溶性杂质，其后依次为Ｂ２ａ、Ａ２ａ、Ｂ１ｂ、Ｂ１ａ、Ａ１ａ，分别回收含Ｂ２ａ、Ｂ１ｂ和Ｂ１ａ的洗脱液，最后减压蒸馏脱除溶剂后获得Ｂ１ａ、Ｂ１ｂ、Ｂ２ａ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：沈德堂，储消和，潘贞德，吴雪萍，
申请(专利权)人：浙江升华拜克生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：33[中国|浙江]