【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及动物模型构建，具体涉及一种suv39h1基因条件性敲除小鼠的构建方法。
技术介绍
1、当谈到转基因鼠的构建背景时，crispr-cas9(clustered regularlyinterspaced short palindromic repeats cas9)技术无疑是一个令人兴奋和革命性的工具。这项技术源自细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御机制，用于对抗入侵的病毒和外源dna。它是基因编辑领域的一颗璀璨明珠，被誉为基因工程的"剪刀"。crispr-cas9已经成为基因编辑技术中的第三代，取代了之前zfn和talens技术。它之所以备受欢迎，原因在于它的高效性、简便性、低成本以及容易上手。这项技术使科学家能够准确地编辑生物体的基因，开辟了前所未有的研究和治疗途径。
2、在crispr-cas9基因编辑技术中，关键的元素之一是sgrna(引导rna)。sgrna是人工设计的rna分子，它的作用是识别并定位到目标基因组中的特定序列。一旦sgrna与目标序列匹配，它将引导cas9蛋白酶精确地切割dna双链，造成双链断裂。这一断裂可以通过细胞的自然修复机制进行修复，包括非同源末端连接(nhej)和同源重组定向修复(hdr)。这种修复过程允许科学家们修改基因组，以实现各种研究和治疗目的。值得注意的是，sgrna的目标识别能力取决于其具体的序列。通常情况下，当基因之间的间隔较大时，sgrna对靶序列的错误识别不会导致严重后果。然而，当基因位于目标位置上下游较近的情况下，可能会干扰其他基因的结构，
3、总之，crispr-cas9技术为转基因鼠的构建提供了前所未有的工具和机会，为科学家们在基因研究和治疗方面开辟了广阔的前景。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种suv39h1基因条件性敲除小鼠的构建方法。
2、为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种靶向小鼠suv39h1基因的sgrna，所述sgrna包括5’guide序列和3’guide序列；所述5’guide序列包括seq id no.1～seq idno.7任一条所示的序列；所述3’guide序列包括seq id no.8～seq id no.14任一条所示的序列。
3、suv39h1基因在细胞和生物学研究中具有至关重要的作用，是一种编码组蛋白转移酶的基因，通过催化组蛋白修饰，调节着色体的结构和功能。suv39h1基因的功能影响着细胞的正常分化、发育和细胞周期等关键生物学过程。此外，suv39h1异常表达与多种疾病的发生和发展密切相关。本专利技术针对suv39h1基因的exon2-3区域设计了sgrnas，这些区域在suv39h1功能中起关键作用。本专利技术将sgrnas分别放置在intron1和intron3的非保守区域，以确保精确的靶向。本专利技术的靶向小鼠suv39h1基因的sgrna能够在特定条件下选择性地局部或者全身敲除suv39h1的exon2-3区域，从而研究其在基因表达和染色体结构调控中的确切作用。
4、作为本专利技术所述靶向小鼠suv39h1基因的sgrna的优选实施方式，所述5’guide序列如seq id no.4所示；所述3’guide序列如seq id no.10所示。
5、作为本专利技术所述靶向小鼠suv39h1基因的sgrna的优选实施方式，所述sgrna的识别位点为suv39h1基因的第2～3号外显子的两侧。
6、本专利技术还提供一种suv39h1基因条件性敲除小鼠的构建方法，包括以下步骤：
7、(1)设计筛选靶向小鼠suv39h1基因的sgrna；
8、(2)将sgrna、cas9蛋白和打靶载体通过显微注射到小鼠受精卵中，并将该受精卵移植至假孕小鼠，对假孕小鼠所生的仔鼠进行基因型鉴定，得f0代小鼠；
9、(3)将f0代小鼠与野生型小鼠交配，得f1代小鼠；
10、(4)经基因型鉴定筛选f1代杂合子小鼠与cre工具鼠交配，得所述suv39h1基因条件性敲除小鼠。
11、作为本专利技术所述suv39h1基因条件性敲除小鼠的构建方法的优选实施方式，所述步骤(1)中的sgrna的核苷酸序列如seq id no.4和seq id no.10所示。
12、作为本专利技术所述suv39h1基因条件性敲除小鼠的构建方法的优选实施方式，所述f0代和f1代小鼠的基因型鉴定使用的5’端鉴定引物如seq id no.15和seq id no.16所示，3’端鉴定引物如seq id no.17和seq id no.18所示。
13、作为本专利技术所述suv39h1基因条件性敲除小鼠的构建方法的优选实施方式，所述f0代和f1代小鼠的基因型鉴定时，pcr扩增的程序为94℃预变性5min；98℃变性30s，67℃退火30s，68℃延伸1kb/min，每个循环退火温度降低0.7℃，共15个循环；98℃变性30s，57℃退火30s，68℃延伸1kb/min，25个循环；68℃延伸10min。
14、本专利技术还提供所述的suv39h1基因条件性敲除小鼠的构建方法构建得到的suv39h1基因条件性敲除小鼠。
15、本专利技术还提供所述suv39h1基因条件性敲除小鼠在研究suv39h1基因相关功能和作用机制中的应用。通过比较suv39h1基因条件性敲除小鼠和野生型小鼠的生存率和健康状况，可研究suv39h1在整体健康中的作用；通过研究条件性敲除小鼠的生殖能力，可了解suv39h1对生育和生殖的影响。
16、本专利技术还提供所述suv39h1基因条件性敲除小鼠在筛选或制备用于治疗与suv39h1基因相关疾病的药物中的应用。
17、本专利技术的有益效果：本专利技术提供一种靶向小鼠suv39h1基因的sgrna，所述sgrna靶向识别suv39h1基因第2～3号外显子的两侧。基于crispr/cas9技术，通过所述sgrna并经过筛选和杂交，构建得到suv39h1基因条件性敲除小鼠。本专利技术的suv39h1基因条件性敲除小鼠的构建方法高效、快捷、简便，得到的suv39h1基因条件性敲除小鼠稳定性好、脱靶率低，为研究suv39h1基因的功能和在不同生理和病理情境下的作用提供经济、可靠的动物模型。
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1.一种靶向小鼠SUV39H1基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA包括5’Guide序列和3’Guide序列；所述5’Guide序列包括SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.7任一条所示的序列；所述3’Guide序列包括SEQ ID NO.8～SEQ ID NO.14任一条所示的序列。
2.根据权利要求1所述的靶向小鼠SUV39H1基因的sgRNA，其特征在于，所述5’Guide序列如SEQ ID NO.4所示；所述3’Guide序列如SEQ ID NO.10所示。
3.根据权利要求1所述的靶向小鼠SUV39H1基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的识别位点为SUV39H1基因的第2～3号外显子的两侧。
4.一种SUV39H1基因条件性敲除小鼠的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的SUV39H1基因条件性敲除小鼠的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中的sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.10所示。
6.根据权利要求4所述的SUV39H1基因
7.根据权利要求4所述的SUV39H1基因条件性敲除小鼠的构建方法，其特征在于，所述F0代和F1代小鼠的基因型鉴定时，PCR扩增的程序为94℃预变性5min；98℃变性30s，67℃退火30s，68℃延伸1kb/min，每个循环退火温度降低0.7℃，共15个循环；98℃变性30s，57℃退火30s，68℃延伸1kb/min，25个循环；68℃延伸10min。
8.权利要求4～7任一项所述的SUV39H1基因条件性敲除小鼠的构建方法构建得到的SUV39H1基因条件性敲除小鼠。
9.权利要求8所述SUV39H1基因条件性敲除小鼠在研究SUV39H1基因相关功能和作用机制中的应用。
10.权利要求8所述SUV39H1基因条件性敲除小鼠在筛选或制备用于治疗与SUV39H1基因相关疾病的药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种靶向小鼠suv39h1基因的sgrna，其特征在于，所述sgrna包括5’guide序列和3’guide序列；所述5’guide序列包括seq id no.1～seq id no.7任一条所示的序列；所述3’guide序列包括seq id no.8～seq id no.14任一条所示的序列。
2.根据权利要求1所述的靶向小鼠suv39h1基因的sgrna，其特征在于，所述5’guide序列如seq id no.4所示；所述3’guide序列如seq id no.10所示。
3.根据权利要求1所述的靶向小鼠suv39h1基因的sgrna，其特征在于，所述sgrna的识别位点为suv39h1基因的第2～3号外显子的两侧。
4.一种suv39h1基因条件性敲除小鼠的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的suv39h1基因条件性敲除小鼠的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中的sgrna的核苷酸序列如seq id no.4和seq id no.10所示。
6.根据权利要求4所述的suv3...
【专利技术属性】
技术研发人员：王伟财，周晨，李若雨，任剑寒，
申请(专利权)人：中山大学附属口腔医院，
类型：发明
国别省市：
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