一种检测铜绿假单胞菌的引物探针组合、试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种检测铜绿假单胞菌的引物探针组合、试剂盒及其应用。本发明专利技术所提供的引物探针组合是根据铜绿假单胞菌的flgE基因设计的，与近缘菌和易引起相似的临床症状微生物(肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌等)、呼吸道感染治疗药物、潜在干扰物质血红蛋白、白细胞等均无交叉反应。本发明专利技术所提供的一种快速检测铜绿假单胞菌感染的试剂盒包括以下组分：核酸释放液、PA反应酶、PA反应液、阳性对照和阴性对照。制备的试剂盒精密度高，检测限达5×10<supgt;2</supgt;copies/ml，检测灵敏度高、特异性强。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物检测，具体涉及一种检测铜绿假单胞菌的引物探针组合、试剂盒及其应用。

技术介绍

1、本节中的陈述仅提供与本申请公开相关的背景信息，并且可能不构成现有技术。

2、铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa，pa)为非发酵革兰阴性杆菌，是引起院内感染的常见条件致病菌，常在免疫力低下及重症患者中引起各种急性和慢性感染，致死率高。2021年度中国细菌耐药监测网(chinet)统计结果显示，在114033株呼吸道标本分离菌中，铜绿假单胞菌占第三位(13.5％)，仅次于肺炎克雷伯杆菌和鲍曼不动杆菌。铜绿假单胞菌医院感染主要集中在icu、神经外科、呼吸内科等科室，在医院感染中占有非常重要的位置，且在外科创伤感染中以该菌的检出率为最高，它不仅可引起术后伤口感染、褥疮、脓肿、烧伤后感染、化脓性中耳炎等多种疾病，还可以引起新生儿的严重流行性腹泻，该菌为条件致病菌，极易在呼吸道定植并引起感染，特别是免疫力低下的人群易感，由此可见，铜绿假单胞菌仍然是目前院内感染防治的重点和难点。

3、目前铜绿假单胞菌的检测需继续宁细菌培养本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种检测铜绿假单胞菌的引物探针组合，其特征在于，引物F/R序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，探针P序列如SEQ ID NO.3所示。

2.一种检测铜绿假单胞菌的试剂盒，其特征在于，包括PA反应液，所述PA反应液包括如权利要求1所述的引物探针混合物；

3.根据权利要求2所述的一种检测铜绿假单胞菌的试剂盒，其特征在于，所述的核酸裂解液组分配置包括：2％SDS、100mM的Tris-HCl、20mM的EDTA、1.4M NaCl、20mM NP40、3％聚乙烯吡咯烷酮PVP。

4.根据权利要求2所述的一种检测铜绿假单胞菌的试剂盒，...

【技术特征摘要】

1.一种检测铜绿假单胞菌的引物探针组合，其特征在于，引物f/r序列如seq id no.1和seq id no.2所示，探针p序列如seq id no.3所示。

2.一种检测铜绿假单胞菌的试剂盒，其特征在于，包括pa反应液，所述pa反应液包括如权利要求1所述的引物探针混合物；

3.根据权利要求2所述的一种检测铜绿假单胞菌的试剂盒，其特征在于，所述的核酸裂解液组分配置包括：2％sds、100mm的tris-hcl、20mm的edta、1.4m nacl、20mm np40、3％聚乙烯吡咯烷酮pvp。

4.根据权利要求2所述的一种检测铜绿假单胞菌的试剂盒，其特征在于，阳性对照的为浓度为1×105cfu/ml的铜绿假单胞菌菌悬液经加热灭活处理后分装；加热灭活条件为60℃，60min；阴性对照为无菌pbs缓冲液。

5.根据权利要求5所述的一种检测铜绿假单胞菌的试剂盒，其特征在于，pa反应酶组分配置为：抗体修饰taq酶的浓度为5u/μl、udg酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：车团结，郑晓玲，张晓慧，车妍，牛禄禄，杨华，辛倩，罗春华，何荣霞，杨立，于海涛，唐士杰，
申请(专利权)人：兰州百源基因技术有限公司，
类型：发明
国别省市：