【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，涉及生产异鼠李素的重组酵母工程菌及其制备方法和应用。
技术介绍
1、异鼠李素(isorhamnetin)，cas登录号为480-19-3，化学式为c16h12o7。异鼠李素的结构式见式(ⅰ)。
2、
3、异鼠李素是从银杏、沙棘等药用植物中分离提纯的黄酮类化合物，亦广泛存在于其他多种植物的花、果实和叶中。异鼠李素有较好的抗肿瘤，抗心肌缺氧、缺血，缓解心绞痛，抗心律失常，治疗冠心病和高血压，清除氧自由基，降低血清胆固醇，保护心血管，促进血流通畅等多种生物学效应。近期研究表明，异鼠李素是一种治疗covid-19的潜在药物。
4、异鼠李素的来源主要是从植物中提取。然而植物提取法具有产量低、周期长，环境不友好等局限。在过去的几十年里，随着代谢工程和合成生物学的快速发展，基于微生物的生物生产越来越成为传统化学生产技术的替代品。通过对快速生长的微生物(如大肠杆菌和酿酒酵母菌)的细胞代谢进行重组，人造细胞平台已成功构建，可生产从生物燃料到蛋白质等大量化学物质。因此，以微生物为生物容器来合成异鼠李素具有广阔的前景。
5、酵母是单细胞真核生物，作为表达系统具有生长快速、培养条件简单和基因操作技术成熟等特点，其分泌途径能够进行正确的蛋白质加工和翻译后修饰，而且没有内毒素。同时，酵母遗传背景清楚，是第一个被测序的真核生物，且有多个营养缺陷选择标记的菌株可供使用。因此，酵母常被用作大规模生物发酵的真核表达菌株。
技术实现思路
1、本专利技术
2、本专利技术提供了一种重组酿酒酵母，是在出发酿酒酵母中导入7个基因并且敲除aro7基因得到的重组酿酒酵母；所述7个基因如下：ubic基因、arol基因、fnsa基因、atf3h基因、pdfls基因、atf3’h基因和atcomt1基因。
3、本专利技术还提供了一种重组酿酒酵母，是将出发酿酒酵母进行四个改造得到的；
4、所述四个改造分别如下：
5、(1)导入并表达ubic基因和arol基因；
6、(2)敲除aro7基因；
7、(3)导入并表达fnsa基因；
8、(4)导入并表达atf3h基因、pdfls基因、atf3’h基因和atcomt1基因。
9、本专利技术还提供了一种重组酿酒酵母，是将出发酿酒酵母进行四个改造得到的；
10、所述四个改造分别如下：
11、(1)在基因组dna中整合dna分子，该dna分子命名为dna分子ⅰ；所述dna分子ⅰ中具有ubic基因和arol基因；
12、(2)敲除aro7基因；
13、(3)导入重组质粒；所述重组质粒中具有fnsa基因；
14、(4)在基因组dna中整合dna分子，该dna分子命名为dna分子ⅱ；所述dna分子ⅱ中具有atf3h基因、pdfls基因、atf3’h基因和atcomt1基因。
15、本专利技术还提供了一种重组酿酒酵母，其制备方法包括如下步骤：
16、(1)在出发酿酒酵母中导入dna分子，得到基因组dna中整合有dna分子ⅰ的重组菌；将导入的dna分子命名为dna分子甲，其中具有dna分子ⅰ；所述dna分子ⅰ中具有ubic基因和arol基因；
17、(2)在步骤(1)得到的重组菌中导入dna分子，得到敲除aro7基因的重组菌；将导入的dna分子命名为dna分子乙，其中具有aro7基因上游同源臂和aro7基因下游同源臂；
18、(3)在步骤(2)得到的重组菌中导入重组质粒；所述重组质粒中具有fnsa基因；
19、(4)在步骤(3)得到的重组菌中导入dna分子，得到基因组dna中整合有dna分子ⅱ的重组菌；将导入的dna分子命名为dna分子丙，其中具有dna分子ⅱ；所述dna分子ⅱ中具有atf3h基因、pdfls基因、atf3’h基因和atcomt1基因。
20、本专利技术提供了一种制备重组酿酒酵母的方法，包括如下步骤：在出发酿酒酵母中导入7个基因并且敲除aro7基因，得到重组酿酒酵母；所述7个基因如下：ubic基因、arol基因、fnsa基因、atf3h基因、pdfls基因、atf3’h基因和atcomt1基因。
21、本专利技术还提供了一种制备重组酿酒酵母的方法，包括如下步骤：
22、将出发酿酒酵母进行四个改造，得到重组酿酒酵母；
23、所述四个改造分别如下：
24、(1)导入并表达ubic基因和arol基因；
25、(2)敲除aro7基因；
26、(3)导入并表达fnsa基因；
27、(4)导入并表达atf3h基因、pdfls基因、atf3’h基因和atcomt1基因。
28、本专利技术还提供了一种制备重组酿酒酵母的方法，包括如下步骤：
29、将出发酿酒酵母进行四个改造，得到重组酿酒酵母；
30、所述四个改造分别如下：
31、(1)在基因组dna中整合dna分子，该dna分子命名为dna分子ⅰ；所述dna分子ⅰ中具有ubic基因和arol基因；
32、(2)敲除aro7基因；
33、(3)导入重组质粒；所述重组质粒中具有fnsa基因；
34、(4)在基因组dna中整合dna分子，该dna分子命名为dna分子ⅱ；所述dna分子ⅱ中具有atf3h基因、pdfls基因、atf3’h基因和atcomt1基因。
35、本专利技术还提供了一种制备重组酿酒酵母的方法，包括如下步骤：
36、(1)在出发酿酒酵母中导入dna分子，得到基因组dna中整合有dna分子ⅰ的重组菌；将导入的dna分子命名为dna分子甲，其中具有dna分子ⅰ；所述dna分子ⅰ中具有ubic基因和arol基因；
37、(2)在步骤(1)得到的重组菌中导入dna分子，得到敲除aro7基因的重组菌；将导入的dna分子命名为dna分子乙，其中具有aro7基因上游同源臂和aro7基因下游同源臂；
38、(3)在步骤(2)得到的重组菌中导入重组质粒；所述重组质粒中具有fnsa基因；
39、(4)在步骤(3)得到的重组菌中导入dna分子，得到基因组dna中整合有dna分子ⅱ的重组菌；将导入的dna分子命名为dna分子丙，其中具有dna分子ⅱ；所述dna分子ⅱ中具有atf3h基因、pdfls基因、atf3’h基因和atcomt1基因。
40、以上任一所述dna分子ⅰ中具有ubic基因表达盒和arol基因表达盒。
41、以上任一所述dna分子ⅱ中具有atf3h基因表达盒、pdfls基因表达盒、atf3’h基因表达盒和atcomt1基因表达盒。
42、dna分子ⅰ具体整合至基因组dna的trp1基因位点。
43、dn本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种重组酿酒酵母，是在出发酿酒酵母中导入7个基因并且敲除ARO7基因得到的重组酿酒酵母；所述7个基因如下：ubiC基因、aroL基因、fnsA基因、AtF3H基因、PdFLS基因、AtF3’H基因和AtCOMT1基因；
2.一种重组酿酒酵母，是将出发酿酒酵母进行四个改造得到的；
3.一种重组酿酒酵母，是将出发酿酒酵母进行四个改造得到的；
4.一种重组酿酒酵母，其制备方法包括如下步骤：
5.一种制备重组酿酒酵母的方法，包括如下步骤：在出发酿酒酵母中导入7个基因并且敲除ARO7基因，得到重组酿酒酵母；所述7个基因如下：ubiC基因、aroL基因、fnsA基因、AtF3H基因、PdFLS基因、AtF3’H基因和AtCOMT1基因；
6.一种制备重组酿酒酵母的方法，包括如下步骤：
7.一种制备重组酿酒酵母的方法，包括如下步骤：
8.一种制备重组酿酒酵母的方法，包括如下步骤：
9.权利要求1至4中任一所述重组酿酒酵母在制备异鼠李素中的应用。
10.一种制备异鼠李素的方法，包括如下
...【技术特征摘要】
1.一种重组酿酒酵母，是在出发酿酒酵母中导入7个基因并且敲除aro7基因得到的重组酿酒酵母；所述7个基因如下：ubic基因、arol基因、fnsa基因、atf3h基因、pdfls基因、atf3’h基因和atcomt1基因；
2.一种重组酿酒酵母，是将出发酿酒酵母进行四个改造得到的；
3.一种重组酿酒酵母，是将出发酿酒酵母进行四个改造得到的；
4.一种重组酿酒酵母，其制备方法包括如下步骤：
5.一种制备重组酿酒酵母的方法，包括如下步骤：在出发酿酒酵母中导入7个基因并且敲除...
【专利技术属性】
技术研发人员：尹文兵，张宏娇，李自馨，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：
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