以ＩＣＡＭ－１为检测指标的胎膜早破快速检测工具，包括衬片、吸水垫、硝酸纤维素膜、金标垫和样品垫，所述吸水垫、硝酸纤维素膜、金标垫和样品垫由上至下依次相接粘贴在衬片上，且金标垫被样品垫部分覆盖；硝酸纤维素膜上设置有由羊抗人细胞间黏附分子－１多克隆抗体包被形成的检测线和由羊抗鼠免疫球蛋白Ｇ多克隆抗体包被形成的控制线，检测线位于控制线之下且它们之间相隔有间距；金标垫为包被有金标鼠抗人细胞间黏附分子－１单克隆抗体结合物的吸水纤维。以细胞间黏附分子－１为检测指标的胎膜早破快速检测盒，由盒体和装入盒体内的上述检测工具构成。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医用检测工具，特别涉及一种检测妊娠期妇女胎膜早破(Premature Rupture ofFetal Membrane，简称 PROM)的检测工具。
技术介绍
胎膜破裂(Rupture of Fetal Membrane，简称ROM)可能在孕期随时发生，在临产 前发生的胎膜破裂称为胎膜早破(PR0M)。足月后(37孕周)PROM发生率约为10%;足月前 (37孕周前)PROM的发生率为2-3.5%。胎膜早破是引起产科病人产前、产后并发症的主要 因素，是导致胎儿早产和新生儿必须入住重症监护室的主要原因。由于医务人员不得不在 延长孕周与宫内及孕妇感染的风险和胎儿肺发育问题之间求平衡，因而对胎膜早破患者的 管理成本高、难度大，准确及时诊断孕妇是否发生胎膜早破至关重要。现有技术中，采用金标准是诊断胎膜早破的一种准确方法，即在孕妇羊膜腔内注 入染料(如美蓝)，若阴道内有被染料着色的液体流出即可诊断为胎膜早破，但采用金标 准检测临床很难操作，并且造成患者的痛苦，故临床很少使用。临床上通常采用询问病史、 患者自诉阴道有羊水流出、阴道分泌物PH值变为偏碱性(正常阴道分泌物pH值为4. 5 5. 5)、显微镜下查见阴道分泌物涂片中出现羊水结晶等方法，这些方法虽然操作简单，但准 确性、敏感性均较低。细胞间黏附分子-1(Intercellular Adhesion Molecule 1，简称 ICAM-1，说明书 下文中以“ICAM-1”表示细胞间黏附分子-1)属于黏附分子的免疫球蛋白超家族，是分子 量76kD 114kD的单链糖蛋白。ICAM-I广泛表达在机体的血管内皮细胞、胸腺上皮细胞 和其他种类的上皮细胞等非血源性细胞的表面，T淋巴细胞、B淋巴细胞和树突状细胞等血 源性细胞的表面，以及成纤维细胞的表面，与淋巴细胞的浸润有关。虽然在妊娠晚期(孕周 28-40)，受胎膜和羊水中的单核细胞上ICAM-I的表达和中性粒细胞活化的影响，妊娠妇女 的羊水中ICAM-I水平升高，但目前尚未发现以ICAM-I为检测指标的胎膜早破检测工具的 报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种以ICAM-I为检测指标的胎膜 早破快速检测工具与检测盒，以实现无创检测，且能快速获得检测结果。本专利申请的专利技术人通过实验发现=ICAM-I是妊娠晚期出现在羊水中的主要蛋 白质之一，含量为13. 08士6. llng/mL。胎膜早破时将有羊水从羊膜腔中渗漏至阴道，羊水中 的ICAM-I则会出现在阴道分泌物/宫颈粘液(Cervical-Vaginal Fluid,CVF)中。蛋白芯 片筛选实验发现确诊的PROM产妇与确诊的非PROM产妇相比(两组产妇的年龄与妊娠周 龄匹配，无基础疾病，无妊娠合并症)，阴道分泌物/宫颈黏液样本中ICAM-I的浓度具有明 显差异。因此，可将ICAM-I作为胎膜早破的检测指标。本专利技术所述以ICAM-I为检测指标的胎膜早破快速检测工具包括衬片、吸水垫、硝酸纤维素膜、金标垫和样品垫，所述吸水垫、硝酸纤维素膜、金标垫和样品垫由上至下依次相接粘贴在衬片上，且金标垫被样品垫部分覆盖；硝酸纤维素膜上设置有由羊抗人细胞间 黏附分子-1 (羊抗人ICAM-1)多克隆抗体包被形成的检测线和由羊抗鼠免疫球蛋白G(羊 抗鼠IgG，Immunoglobulin G，IgG)多克隆抗体包被形成的控制线，检测线位于控制线之下 且它们之间相隔有间距；金标垫为包被有金标鼠抗人细胞间黏附分子-1单克隆抗体结合 物的吸水纤维。本专利技术所述以ICAM-I为检测指标的胎膜早破快速检测盒，由盒体和装入盒体内 的上述检测工具构成；所述盒体的内腔与检测工具的形状和尺寸相匹配，所述盒体的顶壁 设置有检测工具插入孔，侧壁设置有加样孔和观察孔，所述加样孔的设置位置与检测工具 装入盒体后其样品垫的位置相对应，所述观察孔的设置位置与检测工具装入盒体后其检测 线和控制线的位置相对应。上述检测工具中，所述检测线和控制线的宽度优选0. 8mm Imm ；所述检测线与控 制线之间的间距优选IOmm 12mm。检测工具的形状无严格要求，从节约成本、方便制作的 角度考虑，其形状优选矩形条。所述吸水垫是由吸水纸制作的垫体，样品垫是由吸水纤维制 作的垫体，即为吸水纤维垫。本专利技术所述以ICAM-I为检测指标的胎膜早破快速检测工具，其制作方法如下1、检测线、控制线的包被羊抗人ICAM-I多克隆抗体(购自R&D公司)和羊抗鼠IgG多克隆抗体(购自上 海派坤生物工程有限公司)在硝酸纤维素膜上的包被方法见论文“AFP免疫层析测试条的 研制”(侯惠仁、吴冯波、陈键、刘一兵、贺佑丰，《同位素》，2000，13(3) :124-126)。羊抗人 ICAM-I多克隆抗体工作液的浓度为1 3mg/ml，羊抗鼠IgG多克隆抗体工作液的浓度为 1 3mg/ml。2、金标垫的制备(1)胶体金的制备取氯金酸溶解于三蒸水中，形成氯金酸浓度为0. 01g/100ml的氯金酸水溶液；将 所配制的氯金酸水溶液加热至沸腾，在搅拌下加入浓度为9g 10g/100ml的柠檬酸三钠水 溶液，氯金酸水溶液的加入量为100ml氯金酸水溶液中加入1. 35ml 1. 5ml，再煮沸至呈现 透明的橙红色(约7 10分钟)，冷却至室温后用浓度为0. 1 0. 2mol/L的K2CO3溶液调 节其PH值至7. 0-7. 2，获胶体金；(2)金标鼠抗人ICAM-I单克隆抗体结合物的制备在步骤(1)制备的胶体金中加入鼠抗人ICAM-I单克隆抗体(购自R&D公司)， 搅拌混合均勻后加入牛血清白蛋白(BSA，Roche公司)，再搅拌混合均勻后加入浓度为 10g/100ml的NaCl溶液，鼠抗人ICAM-I单克隆抗体的加入量以胶体金溶液中鼠抗人 ICAM-I单克隆抗体的浓度达到200μ g/100ml为限，牛血清白蛋白的加入量以胶体金溶液 中牛血清白蛋白的浓度达到250mg/100ml为限，NaCl溶液的加入量以胶体金溶液中NaCl的 浓度达到lg/100ml为限；继后分别以2，000转/分、4，000转/分、10，000转/分的条件各 离心至少10分钟，获得的分离产物即为金标鼠抗人ICAM-I单克隆抗体结合物，将所述结合 物溶于PH 7.2的磷酸盐缓冲液中，4°C贮存备用，所述磷酸盐缓冲液中含有叠氮钠，叠氮钠 的浓度为90mg/100ml ；(3)金标垫的制备 用浓度为0. 5g/100ml的牛血清白蛋白(BSA，Roche公司)溶液在22 25°C浸泡 吸水纤维至少1小时，将步骤(2)制备的金标鼠抗人ICAM-I单克隆抗体结合物包被在吸水 纤维上(包被方法见论文“AFP免疫层析测试条的研制”，侯惠仁、吴冯波、陈键、刘一兵、贺 佑丰，《同位素》，2000,13 (3) 124-126)，即获得金标垫。3、以ICAM-I为检测指标的胎膜早破快速检测工具的制备将片状吸水垫2、包被有检测线和控制线的硝酸纤维素膜5、金标垫6和样品垫7 粘在片状衬片1上，然后切成矩形条。使用本专利技术所述检测工具和检测盒，控制线上可见一条清晰的紫红色线，证明试 纸条有效；当检测线上可见一条清晰的紫红色线，此结果判定为阳性(即发生本文档来自技高网...
【技术保护点】
以细胞间黏附分子－１为检测指标的胎膜早破快速检测工具，其特征在于包括衬片（１）、吸水垫（２）、硝酸纤维素膜（５）、金标垫（６）和样品垫（７），所述吸水垫、硝酸纤维素膜、金标垫和样品垫由上至下依次相接粘贴在衬片上，且金标垫被样品垫部分覆盖，硝酸纤维素膜（５）上设置有由羊抗人细胞间黏附分子－１多克隆抗体包被形成的检测线（４）和由羊抗鼠免疫球蛋白Ｇ多克隆抗体包被形成的控制线（３），检测线位于控制线之下且它们之间相隔有间距，金标垫（６）为包被有金标鼠抗人细胞间黏附分子－１单克隆抗体结合物的吸水纤维。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：胡怀忠，关祥乾，向洪发，周容，
申请(专利权)人：成都创宜生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：90[中国|成都]
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