【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于肾损伤治疗领域，更特别地，涉及一种可靶向folr2+巨噬细胞的细胞微颗粒及其制备方法。
技术介绍
1、在多种炎症和纤维化疾病中，巨噬细胞从始至终都发挥着重要的作用，影响着多种慢性疾病的发展和转归。有研究显示，存在疾病的致病性巨噬细胞亚群。其中，表达叶酸受体2(folic acid receptor 2，folr2)的巨噬细胞作为活化性巨噬细胞与抗gbm肾炎、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、肝细胞癌、皮肤纤维化和肺纤维化等多种慢性病的进展密切相关。我们推测，folr2可能是突破多种慢性疾病治疗的靶点。
2、然而，目前尚缺乏安全有效的folr2+巨噬细胞治疗策略。传统针对巨噬细胞的治疗策略如氯磷酸盐的脂质体清除巨噬细胞将巨噬细胞全部清除，缺乏特异性，无法达到精准治疗的效果且副作用明显。一项研究显示靶向folr2+巨噬细胞的细胞毒药物可以有效抑制大鼠抗gbm肾炎，遗憾的是该药受限于分子特性和安全性，不适合临床应用。
3、细胞微颗粒又称为外泌体，是由天然细胞分泌的纳米囊泡，携带核酸、蛋白质和脂质的小型脂质双层颗粒，具有良好的生物相容性和细胞吸收能力，在体液中具有高度稳定性，可逃避免疫系统的识别。巨噬细胞来源的微颗粒囊泡可以负载诊断分子或化疗药物，在体内和体外传递给巨噬细胞或癌细胞，达到诊断或治疗目的。
4、因此，可以利用细胞微颗粒来制备靶向folr2+巨噬细胞的生物制药。
5、本专利技术中选择巨噬细胞来源的微颗粒囊泡，可利用对巨噬细胞天然的亲和力，通过锚定相关分子增加其特异性
6、细胞微颗粒又称外泌体是由大多数天然细胞分泌的纳米囊泡，携带核酸、蛋白质和脂质的小型脂质双层颗粒，具有良好的生物相容性和细胞吸收能力，在体液中具有高度稳定性，可逃避免疫系统的识别。巨噬细胞来源的微颗粒囊泡可以负载诊断分子或化疗药物，在体内和体外传递给巨噬细胞或癌细胞，达到诊断或治疗目的。本专利技术中选择巨噬细胞来源的微颗粒囊泡，可利用对巨噬细胞天然的亲和力，通过锚定相关分子增加其特异性，达到靶向归巢于巨噬细胞，实现对特异性巨噬细胞干预的效果。
7、folr2蛋白定位于细胞膜表面。folr2与叶酸和还原叶酸衍生物结合，并介导5-甲基四氢叶酸和叶酸类似物递送到细胞内部。在中性ph下对叶酸和叶酸类似物具有高亲和力。
技术实现思路
1、为解决以上问题，本专利技术提供了一种制备可靶向致病性folr2+巨噬细胞的细胞微颗粒的方法，包括从巨噬细胞提取微颗粒的步骤。
2、在一个具体实施方案中，所述方法包括以下步骤：
3、s1：培养巨噬细胞，得到巨噬细胞培养物；
4、s2：从所述巨噬细胞培养物提取细胞微颗粒。
5、在一个具体实施方案中，s1中，使用加入的dspe-peg-fa的rpmi1640培养基培养所述巨噬细胞，并且培养时间不短于3天。
6、在一个具体实施方案中，所述巨噬细胞为raw264.7。
7、在一个具体实施方案中，s2中包括以下步骤：
8、s21：对所述巨噬细胞培养物进行紫外照射；
9、s22：从紫外照射后的巨噬细胞培养物提取所述细胞微颗粒。
10、在一个具体实施方案中，s21中包括以下步骤：
11、s211：将所述巨噬细胞培养物用不含血清的培养基重悬，得到细胞混悬物；
12、s212：对所述细胞混悬物进行紫外照射1h；
13、s213：将所述细胞混悬物在37℃下静置10h以上。
14、在一个具体实施方案中，s22包括以下步骤：
15、s221：对所述细胞混悬物进行低速离心，得到含有细胞微颗粒的上清液；
16、s222：将所述含有细胞微颗粒的上清液进行高速离心，得到细胞微颗粒沉淀沉淀；
17、s223：重悬所述细胞微颗粒沉淀得到所述细胞微颗粒。
18、在一个具体实施方案中，还包括将所述细胞微颗粒与药物共孵育的步骤。
19、在一个具体实施方案中，所述药物为氯磷酸盐。
20、本专利技术还提供了通过上述方法制备的可靶向肾脏致病性folr2+巨噬细胞的细胞微颗粒。
21、本专利技术通过从巨噬细胞提取细胞微颗粒，并使其表面偶联的叶酸分子，使得到的细胞微颗粒可靶向结合巨噬细胞表面的folr2，精准递送环磷酰胺、氯膦酸盐等药物到肾脏损伤部位，从而高效杀伤肾脏致病性folr2+巨噬细胞，减少全身性非特异性分布。本专利技术的细胞微颗粒具有以下优势：1)归巢靶向性：巨噬细胞来源微颗粒具有天然巨噬细胞归巢能力，可精准识别并高效靶向特异性巨噬细胞，同时减少其他非靶向细胞摄取。2)易于工程化改造：通过点击化学、生物正交等多种手段，细胞微颗粒表面易于修饰多种靶向配体和功能分子，进一步提高其靶向性和功能性。3)低细胞毒性和低免疫原性。
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1.一种制备可靶向Folr2+巨噬细胞的细胞微颗粒的方法，其特征在于，包括从巨噬细胞提取微颗粒的步骤。
2.根据权利要求1的方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，S1中，使用加入的DSPE-PEG-FA的RPMI1640培养基培养所述巨噬细胞，并且培养时间不短于3天。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述巨噬细胞为Raw264.7。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，S2中包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，S21中包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，S22包括以下步骤：
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括将所述细胞微颗粒与药物共孵育的步骤。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述药物为氯磷酸盐。
10.一种可靶向肾脏致病性Folr2+巨噬细胞的细胞微颗粒，其特征在于通过权利要求1-9中任一项所述的方法制备得到。
【技术特征摘要】
1.一种制备可靶向folr2+巨噬细胞的细胞微颗粒的方法，其特征在于，包括从巨噬细胞提取微颗粒的步骤。
2.根据权利要求1的方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，s1中，使用加入的dspe-peg-fa的rpmi1640培养基培养所述巨噬细胞，并且培养时间不短于3天。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述巨噬细胞为raw264.7。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，s...
【专利技术属性】
技术研发人员：曾锐，徐钢，姚颖，廖文慧，李国立，杨倩，许畅，林燕平，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属同济医院，
类型：发明
国别省市：
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