【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于多肽制备，尤其涉及一种具有抗衰老活性的黑豆多肽的制备方法及其应用。
技术介绍
1、黑豆(phaseolus vulgaris l.)作为一种传统的药食兼用作物，其蛋白质含量高达45％～55％，相比于大豆的平均蛋白含量高出24.5％，是鸡蛋蛋白含量的3.38倍。黑豆蛋白包括球蛋白(7s和11s)、清蛋白(2s)、醇溶蛋白和谷蛋白，分子量为20kda～97kda。研究发现，黑豆蛋白中氨基酸的总量为81.6％，显著高于绿豆蛋白中氨基酸的总量，但黑豆蛋白的热稳定性较差。黑豆蛋白制备所得黑豆活性肽(blackbean bioactive peptide)具有多种生理活性，如抗癌、降血脂和免疫调节等。
2、衰老是生理功能持续退化的过程，有关衰老的学说有免疫学说、遗传基因学说、端粒学说和自由基学说等。自由基学说认为随着年龄的增长和外界环境的有害刺激，会使机体代谢过程中产生大量自由基，并加速组织功能损伤或衰老，大量抗衰老物质的研究是从抗氧化为入口进行探索，而衰老及与其相关的疾病已对人类健康和生命造成巨大威胁，成为当今医学界和社会界的重要问题。因此，机体抗氧化作用能保持自由基产生与消除的平衡，对预防衰老有重要意义。
3、最近研究发现许多天然产物具有抗衰老作用，且与其他药物相比，具有来源广泛、毒副作用小等优点。黑豆蛋白肽，已被证实具有抗癌、降血脂、免疫调节的作用，但并未提及具有抗衰老活性作用。
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本专利技术提出了一种具有抗衰老活
2、为实现上述目的，本专利技术提供了一种具有抗衰老活性的黑豆多肽的制备方法，包括以下步骤：
3、黑豆粉与石油醚混合，浸泡，风干，得黑豆粕；
4、所述黑豆粕与水混合，得黑豆粕溶液，所述黑豆粕溶液水浴处理，离心，取上清液；
5、所述上清液离心，取沉淀，真空冷冻干燥，得黑豆蛋白冻干粉；
6、所述黑豆蛋白冻干粉与去离子水混合，得黑豆蛋白溶液，所述黑豆蛋白溶液水浴处理，调节ph为6.3～6.7，得底物；
7、所述底物与菠萝蛋白酶混合，酶解，得酶解液，所述酶解液水浴处理，真空冷冻干燥，得黑豆多肽。
8、优选的，所述黑豆粉为去皮黑豆粉碎，过50目筛，得黑豆粉。
9、优选的，所述黑豆粉与石油醚的混合比例为1g：2ml，所述浸泡的次数为2次，每次浸泡的时长为12h。
10、优选的，所述黑豆粕与水混合，得黑豆粕溶液，所述黑豆粕溶液水浴处理，离心，取上清液的步骤中，所述黑豆粕与水混合的比例为1g：20ml，所述水浴处理的温度为95℃，所述水浴处理的时间为15min，所述离心的转速为3000r/min，所述离心的时间为15min。
11、优选的，所述上清液离心，取沉淀，真空冷冻干燥，得黑豆蛋白冻干粉的步骤中，还包括所述上清液采用浓度为1mol/l的hcl水溶液调节ph为4.5后，进行离心；所述离心的转速为4500r/min，所述离心的时间为15min，所述真空冷冻干燥的真空度为26pa，所述真空冷冻干燥的温度为-56℃，所述真空冷冻干燥的时间为7h。
12、优选的，所述黑豆蛋白冻干粉与去离子水混合，得黑豆蛋白溶液，所述黑豆蛋白溶液水浴处理，调节ph为6.3～6.7，得底物的步骤中，所述黑豆蛋白冻干粉与去离子水的混合比例为1g：10ml，所述水浴处理的温度为95℃，所述水浴处理的时间为15min，所述调节ph采用浓度为1mol/l的hcl水溶液。
13、优选的，所述底物与菠萝蛋白酶混合，酶解，得酶解液，所述酶解液水浴处理，真空冷冻干燥，得黑豆多肽的步骤中，所述底物与菠萝蛋白酶的混合质量比为95:5，所述菠萝蛋白酶的酶活为600u/mg，所述酶解的温度为55℃，所述酶解的时间为4h，所述水浴处理的温度为100℃，所述水浴处理的时间为10min，所述水浴处理后，采用浓度为1mol/l的hcl水溶液调节ph为4.3，然后真空冷冻干燥，所述真空冷冻干燥的真空度为26pa，所述真空冷冻干燥的温度为-56℃，所述真空冷冻干燥的时间为7h。
14、优选的，还包括所述黑豆多肽超滤处理，所述超滤采用3kda和10kda超滤膜，得分子量＞10kda的bbp-ⅰ黑豆多肽组，分子量为3～10kda的bbp-ⅱ黑豆多肽组，分子量＜3kda的bbp-ⅲ黑豆多肽组。
15、本专利技术还提供了所述的制备方法制备所得黑豆多肽。
16、本专利技术还提供了所述的黑豆多肽在制备抗衰老产品中的应用。
17、与现有技术相比，本专利技术具有如下优点和技术效果：
18、本专利技术提供了一种具有抗衰老活性的黑豆多肽的制备方法，首先通过碱提酸沉法从去皮脱脂黑豆中提取黑豆蛋白，再通过菠萝蛋白酶酶解后得到黑豆多肽，使用超滤膜分离浓缩黑豆多肽，最终得到分子量＞10kda的bbp-ⅰ黑豆多肽组。
19、本专利技术通过体外抗氧化实验(abts+清除率实验、dpph·清除率实验、·oh清除率实验、铁还原力实验来确定其体外抗氧化活性，结果表明其抗氧化活性好；在秀丽隐杆线虫上进行体内抗氧化活性实验，分别进行了热应激实验、寿命实验、常规条件下运动能力及紫外条件下运动能力的测定，结果表明不论是热应激实验、寿命实验，还是运动能力实验都证明其提高了实验中秀丽隐杆线虫的存活率与运动次数，具有抗衰老活性，其中，分子量＞10kda的bbp-ⅰ黑豆多肽组效果最佳。
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1.一种具有抗衰老活性的黑豆多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述黑豆粉为去皮黑豆粉碎，过50目筛，得黑豆粉。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述黑豆粉与石油醚的混合比例为1g：2mL，所述浸泡的次数为2次，每次浸泡的时长为12h。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述黑豆粕与水混合，得黑豆粕溶液，所述黑豆粕溶液水浴处理，离心，取上清液的步骤中，所述黑豆粕与水混合的比例为1g：20mL，所述水浴处理的温度为95℃，所述水浴处理的时间为15min，所述离心的转速为3000r/min，所述离心的时间为15min。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述上清液离心，取沉淀，真空冷冻干燥，得黑豆蛋白冻干粉的步骤中，还包括所述上清液采用浓度为1mol/L的HCl水溶液调节pH为4.5后，进行离心；所述离心的转速为4500r/min，所述离心的时间为15min，所述真空冷冻干燥的真空度为26Pa，所述真空冷冻干燥的温度为-56℃，所述真空冷冻干燥的
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述黑豆蛋白冻干粉与去离子水混合，得黑豆蛋白溶液，所述黑豆蛋白溶液水浴处理，调节pH为6.3～6.7，得底物的步骤中，所述黑豆蛋白冻干粉与去离子水的混合比例为1g：10mL，所述水浴处理的温度为95℃，所述水浴处理的时间为15min，所述调节pH采用浓度为1mol/L的HCl水溶液。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述底物与菠萝蛋白酶混合，酶解，得酶解液，所述酶解液水浴处理，真空冷冻干燥，得黑豆多肽的步骤中，所述底物与菠萝蛋白酶的混合质量比为95:5，所述菠萝蛋白酶的酶活为600U/mg，所述酶解的温度为55℃，所述酶解的时间为4h，所述水浴处理的温度为100℃，所述水浴处理的时间为10min，所述水浴处理后，采用浓度为1mol/L的HCl水溶液调节pH为4.3，然后真空冷冻干燥，所述真空冷冻干燥的真空度为26Pa，所述真空冷冻干燥的温度为-56℃，所述真空冷冻干燥的时间为7h。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，还包括所述黑豆多肽超滤处理，所述超滤采用3kDa和10kDa超滤膜，得分子量＞10kDa的BBP-Ⅰ黑豆多肽组，分子量为3～10kDa的BBP-Ⅱ黑豆多肽组，分子量＜3kDa的BBP-Ⅲ黑豆多肽组。
9.如权利要求1～8任一项所述的制备方法制备所得黑豆多肽。
10.如权利要求9所述的黑豆多肽在制备抗衰老产品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种具有抗衰老活性的黑豆多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述黑豆粉为去皮黑豆粉碎，过50目筛，得黑豆粉。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述黑豆粉与石油醚的混合比例为1g：2ml，所述浸泡的次数为2次，每次浸泡的时长为12h。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述黑豆粕与水混合，得黑豆粕溶液，所述黑豆粕溶液水浴处理，离心，取上清液的步骤中，所述黑豆粕与水混合的比例为1g：20ml，所述水浴处理的温度为95℃，所述水浴处理的时间为15min，所述离心的转速为3000r/min，所述离心的时间为15min。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述上清液离心，取沉淀，真空冷冻干燥，得黑豆蛋白冻干粉的步骤中，还包括所述上清液采用浓度为1mol/l的hcl水溶液调节ph为4.5后，进行离心；所述离心的转速为4500r/min，所述离心的时间为15min，所述真空冷冻干燥的真空度为26pa，所述真空冷冻干燥的温度为-56℃，所述真空冷冻干燥的时间为7h。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述黑豆蛋白冻干粉与去离子水混合，得黑豆蛋白溶液，所述黑豆蛋白溶液水浴处理，调...
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