【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及寄生虫检测，尤其涉及一种鉴定简单异尖线虫/派氏异尖线虫的rpa-lfd引物探针组及其试剂盒和应用。
技术介绍
1、异尖线虫是一类重要的食源性人兽共患寄生虫，其广泛分布于世界各大海域，可感染多种海洋鱼类且自然感染率普遍较高。中国沿海的带鱼、小黄鱼、大黄鱼、鲭鱼、鲟鱼和金线鱼等均为异尖线虫感染的主要对象，部分鱼类的感染超过90％。此外，异尖线虫还可感染人工养殖的真鲷、黑鲷和美国红鱼等。异尖线虫不仅影响鱼类产品的贸易和经济价值，还大大增加了食用者的感染风险，甚至能对渔业工人及水产养殖者等接触者造成过敏，异尖线虫已被列为我国禁止入境的二类寄生虫。
2、异尖线虫在鱼体内的存在容易被误食后导致异尖线虫病，异尖线虫病最早于1960年在荷兰发现，主要是人和其他哺乳动物生食或半生食含有活的异尖线虫iii期幼虫的鱼类而引起的一种寄生虫病，可导致急腹症和过敏等症状。根据感染部位不同可导致人体出现不同感染病状，异尖线虫侵入人体后可以导致肠壁组织直接损伤，常引起嗜酸性肉芽肿等症状，还会发生异位现象造成更大伤害，出现胃部的嗜酸性肉芽肿或肠道嗜酸性肉芽肿，使机体出现肠梗阻，从而导致腹泻、呕吐等症状，近年来持续有感染该病的报道且容易误诊。
3、当前研究发现，异尖线虫病由该类线虫中的简单异尖线虫a.simplex(s.l)、宫脂线虫和对盲囊线虫引发，三者在形态学上高度相似，而简单异尖线虫类群a.simplex(s.l)在种间还可分为简单异尖线虫a.simplex(s.s)、派氏异尖线虫a.pegreffii和a.berlan
4、针对异尖线虫的检测已经有诸多技术方法的研究和应用，传统的异尖线虫分类和检测主要是通过异尖线虫的形态学特征进行的形态学鉴定，对具有感染能力的异尖线虫幼虫可以通过前、后区域的典型特征在属水平上进行形态学鉴定。形态学鉴定方法主要包括灯检法、紫外光-压片法和酶酵解法等。形态学鉴定简便易行，所需工具设备简单，但是也存在诸多不足，难以对虫卵期或者感染初期的鱼类和人群鉴定，且活体动物尤其是人体取样难度更大，且感染人的异尖线虫在移除时常被损坏或碎片化，这使得难以用形态学方法进行检测。如今发展起来的分子检测技术弥补了碎片化样品形态学鉴定中难以鉴定的不足，在成本和时间上更优于免疫学等其他检测技术，不仅可对线虫的残体或幼虫材料进行鉴定，还能进行种属鉴定。目前分子生物学鉴定方法主要是基于dna分析技术，包括聚合酶链式反应(pcr)及其衍生的荧光或探针检测以及测序分析等，但这些技术的检测过程往往需要专门实验室以及pcr仪等精密温控设备和专业的工作人员，缺少现场检查的便捷性和时效性。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种鉴定简单异尖线虫/派氏异尖线虫的rpa-lfd引物探针组及其试剂盒和应用，利用本专利技术所述引物探针组和鉴定方法可在常温下鉴定具有致病性的简单异尖线虫和派氏异尖线虫，不受实验室和精密实验仪器的限制，为现场快速检测鉴定异尖线虫提供技术手段。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种鉴定简单异尖线虫/派氏异尖线虫的rpa-lfd引物探针组，包括上游引物peff3、下游引物pefr1g及探针peft1。
4、所述上游引物peff3的核苷酸序列如seq id no.1所示，
5、所述下游引物pefr1g的核苷酸序列如seq id no.2所示，
6、所述探针prft1的核苷酸序列如seq id no.3所示。
7、本专利技术还提供了所述的引物探针组在制备鉴定简单异尖线虫/派氏异尖线虫的试剂盒中的应用。
8、本专利技术还提供了一种鉴定简单异尖线虫/派氏异尖线虫的rpa试剂盒，所述试剂盒中包括上游引物peff3、下游引物pefr1g及探针peft1。
9、本专利技术还提供了所述的rpa试剂盒在鉴定简单异尖线虫/派氏异尖线虫中的应用。
10、本专利技术提供了一种鉴定简单异尖线虫/派氏异尖线虫的rpa-lfd引物探针组及其试剂盒和应用，包括上游引物peff3、下游引物pefr1g及探针peft1，所述上游引物peff3的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述下游引物pefr1g的核苷酸序列如seq id no.2所示，所述探针prft1的核苷酸序列如seq id no.3所示。本专利技术的引物探针组可以判定待测样品是否含有简单异尖线虫/派氏异尖线虫。与传统pcr检测手段相比，本专利技术无需pcr仪及其产物检测所需的高精度仪器，检测过程所需时间短，整个反应过程对温度及控制精度要求低，灵敏度较高，检测结果直观，为简单异尖线虫/派氏异尖线虫的现场快速检测提供了技术。
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1.一种鉴定简单异尖线虫/派氏异尖线虫的RPA-LFD引物探针组，其特征在于，包括上游引物PEFF3、下游引物PEFR1G及探针PEFT1，
2.权利要求1所述的引物探针组在制备鉴定简单异尖线虫/派氏异尖线虫的试剂盒中的应用。
3.一种鉴定简单异尖线虫/派氏异尖线虫的RPA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括权利要求1所述的上游引物PEFF3、下游引物PEFR1G及探针PEFT1。
4.根据权利要求3所述的RPA试剂盒在鉴定简单异尖线虫/派氏异尖线虫中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种鉴定简单异尖线虫/派氏异尖线虫的rpa-lfd引物探针组，其特征在于，包括上游引物peff3、下游引物pefr1g及探针peft1，
2.权利要求1所述的引物探针组在制备鉴定简单异尖线虫/派氏异尖线虫的试剂盒中的应用。
【专利技术属性】
技术研发人员：王小明，金幸生，管峰，夏慧丽，徐爱春，
申请(专利权)人：中国计量大学，
类型：发明
国别省市：
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