【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学新技术应用领域，具体涉及一种靶向angpt2的多肽及用于诊断脑胶质瘤的放射性分子探针。
技术介绍
1、多形性胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme，gbm)是最致命的原发性脑肿瘤之一。根据世界卫生组织(who)的分类标准，gbm被归类为iv级胶质瘤，其预后极差。尽管目前通过手术切除和放、化疗等治疗手段能在一定程度上延长gbm患者的生存时间，但情况仍不乐观，患者的中位生存期仅为12个月。因此，迫切需要发展新的有效治疗方法。随着对脑胶质瘤的深入研究，大量实验揭示了与之相关的多种肿瘤特异性分子，这些分子可被视为潜在的诊断和治疗靶点。结合目前快速发展的非侵入性成像技术，可以实现对gbm的早期发现和治疗，从而为患者争取更多的治疗机会，并提高生存率。然而，针对高级别胶质瘤的精确治疗仍然具有挑战性，例如面临着肿瘤高度异质性、肿瘤突变以及药物在中枢神经系统(cns)中的渗透性差等问题。因此，充分了解脑胶质瘤发生和发展的分子机制，开发能够穿越血脑屏障并具有抑制作用的gbm靶向药物，仍然是未来研究的重点。
2、血管生成是肿瘤发生发展的必要条件，在肿瘤生长和代谢中起着重要作用，是很有前景的肿瘤治疗靶点。血管生成素1(angiopoietin 1，angpt1)和血管生成素2(angiopoietin 2，angpt2)与tie-2竞争性结合，angpt2与tie-2结合促进tie-2磷酸化，从而促进肿瘤细胞存活、侵袭和迁移。基于tcga数据库分析发现，angpt2在gbm的表达丰度高。此外，脑胶
技术实现思路
1、基于上述背景，本专利技术设计一种与agnpt2蛋白结合模式和亲和力最佳的多肽配体，最终得到靶向agnpt2蛋白的多肽序列。设计、合成了一种对人脑胶质瘤细胞移植瘤具有特异靶向性的放射性分子探针，探究了细胞实验和放射性核素99mtco标记gsf对脑胶质瘤细胞u87-mg细胞移植瘤的靶向作用，结果表明gsf对脑胶质瘤具有靶向作用，具有显像脑胶质瘤的潜在应用价值。
2、本专利技术的目的之一是提供一种靶向agnpt2蛋白的多肽，其氨基酸序列如下所示：gsfihsvprh(甘氨酸-丝氨酸-苯丙氨酸-异亮氨酸-组氨酸-丝氨酸-缬氨酸-脯氨酸-精氨酸-组氨酸，gly-ser-phe-ile-his-ser-val-pro-arg-his)，缩写为gsf。
3、本专利技术设计与agnpt2蛋白结合模式与亲和力最佳的多肽配体，鉴定所述多肽与agnpt2蛋白的亲和力。
4、在本专利技术的实施方案中，本专利技术鉴定所述多肽与agnpt2蛋白的亲和力时，所使用的亲和力的鉴定方法为生物膜干涉技术，即，将20μg/ml的agnpt2蛋白固化在nta芯片，加入200μl浓度为100μm的多肽，通过生物膜干涉分析，得到gsf与agnpt2的亲和力鉴定结果。
5、本专利技术的目的之二是提供一种基于上述多肽gsf的用于脑胶质瘤显像的放射性分子探针。
6、所述脑胶质瘤具体可为多形性胶质母细胞瘤。
7、本专利技术所提供的放射性分子探针，表示为：99mtco-dtpa-gsf，其中，99mtco为放射性核素，dtpa为螯合剂，gsf为靶向angpt2蛋白的多肽gsfihsvprh，
8、其中，靶向agnpt2蛋白的多肽gsfihsvprh与dtpa螯合剂共价偶联，99mtco放射性核素螯合到dtpa螯合剂上；
9、dtpa的结构式如下所示：
10、
11、上述放射性分子探针通过包括如下步骤的方法制备得到：
12、1)螯合剂-多肽的制备
13、多肽gsfihsvprh与dtpa-tetra(t-bu ester)反应，纯化，得到螯合剂-多肽dtpa-gsf；
14、
15、2)放射性核素标记螯合剂-多肽
16、向螯合剂-多肽dtpa-gsf、氯化亚锡、缓冲液的混合溶液中加入放射性核素，反应得到放射性核素标记螯合剂-多肽99mtco-dtpa-gsf，即放射性分子探针。
17、上述方法步骤1)的操作为：所述多肽fmoc-gsfihsvprh质谱鉴定正确后，脱除fmoc保护基，加入摩尔倍数为3倍的dtpa-tetra(t-bu ester)进行反应，茚三酮检测呈阴性后结束反应；通过裂解液(体积比为三氟乙酸：乙二硫醇：苯酚：三异丙基硅烷：水＝90：4：2：2：2)与直链肽树脂反应，得到脱除所有侧链保护基的直链肽；将直链肽溶解在水中，使用半制备色谱纯化，分离出纯度合格的液体，收集旋蒸冻干后即为dtpa-gsf。
18、上述方法步骤2)中，所述缓冲溶液为0.1m pbs缓冲液或生理盐水，ph为7.4，
19、dtpa-gsf与氯化亚锡、99mtco的配比依次可为：0.1-0.2mg：60μg：2.5mci，具体可为0.2mg：60μg：2.5mci；
20、所述反应的温度可为室温，时间可为15-30min，具体可为30min；
21、步骤2)的操作具体可为：将dtpa-gsf溶解在超纯水，终浓度为1mg/ml，将200μldtpa-gsf溶液与60μl 1mg/ml的氯化亚锡溶液混合在500μl的pbs，添加2.5mci 99mtco，室温反应30min制备得到99mtc-dtpa-gsf放射性分子探针。
22、上述放射性分子探针在制备脑胶质瘤诊断试剂中的应用也属于本专利技术的保护范围。
23、所述应用中，所述脑胶质瘤具体为多形性胶质母细胞瘤。
24、所述诊断试剂用于人脑胶质瘤细胞和生物体内脑胶质细胞移植瘤的显像。
25、根据本专利技术的实施方案，所选人脑胶质瘤细胞为u87-mg细胞，所选生物体内脑胶质细胞移植瘤为babl/c裸鼠皮下移植瘤。
26、本专利技术所述的放射性分子探针(具体为99mtco-dtpa-gsf)与现有技术相比，具有以下有益效果：
27、1)本专利技术利用分子对接技术设计和筛选出与angpt2特异性结合的靶向多肽，填补了angpt2高亲和力多肽配体的空白；
28、2)本专利技术制备的放射性核素标记分子探针作为脑胶质瘤的显像药物，具有显像时间长、容易制备等特点。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种靶向AGNPT2蛋白的多肽，其氨基酸序列如下所示：GSFIHSVPRH，甘氨酸-丝氨酸-苯丙氨酸-异亮氨酸-组氨酸-丝氨酸-缬氨酸-脯氨酸-精氨酸-组氨酸，Gly-Ser-Phe-Ile-His-Ser-Val-Pro-Arg-His，缩写为GSF。
2.权利要求1所述的靶向AGNPT2蛋白的多肽在制备诊断和治疗脑胶质瘤的药物中的应用。
3.一种用于脑胶质瘤显像的放射性分子探针，表示为：99mTcO-DTPA-GSF，其中，99mTcO为放射性核素，DTPA为螯合剂，GSF为靶向ANGPT2蛋白的多肽GSFIHSVPRH，靶向AGNPT2蛋白的多肽GSFIHSVPRH与DTPA螯合剂共价偶联，99mTcO放射性核素螯合到DTPA螯合剂上。
4.制备权利要求3所述的用于脑胶质瘤显像的放射性分子探针的方法，包括如下步骤：1)螯合剂-多肽的制备
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤1)的操作为：多肽Fmoc-GSFIHSVPRH质谱鉴定正确后，脱除Fmoc保护基，加入摩尔倍数为3倍的DTPA-tetra(t-Bu est
6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于：步骤2)中，所述缓冲溶液为0.1M PBS缓冲液或生理盐水，pH为7.4，
7.权利要求3所述的放射性分子探针在制备脑胶质瘤诊断试剂中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述应用中，所述脑胶质瘤为多形性胶质母细胞瘤。
...【技术特征摘要】
1.一种靶向agnpt2蛋白的多肽，其氨基酸序列如下所示：gsfihsvprh，甘氨酸-丝氨酸-苯丙氨酸-异亮氨酸-组氨酸-丝氨酸-缬氨酸-脯氨酸-精氨酸-组氨酸，gly-ser-phe-ile-his-ser-val-pro-arg-his，缩写为gsf。
2.权利要求1所述的靶向agnpt2蛋白的多肽在制备诊断和治疗脑胶质瘤的药物中的应用。
3.一种用于脑胶质瘤显像的放射性分子探针，表示为：99mtco-dtpa-gsf，其中，99mtco为放射性核素，dtpa为螯合剂，gsf为靶向angpt2蛋白的多肽gsfihsvprh，靶向agnpt2蛋白的多肽gsfihsvprh与dtpa螯合剂共价偶联，99mtco放射性核素螯合到dtpa螯合剂上。
4.制备权利要求3所述的用于脑胶质瘤显像的放射性分子探针的方法，...
【专利技术属性】
技术研发人员：李鸿岩，林婉晴，甘蓉，徐度玲，
申请(专利权)人：中国科学院近代物理研究所，
类型：发明
国别省市：
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