一种pagA重组蛋白及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种pagA重组蛋白及其制备方法，属于生物技术领域。本发明专利技术提供一种用于制备pagA重组蛋白的核酸序列，其包括pagA全长序列和His标签序列。本发明专利技术还提供了一种pagA重组蛋白的制备方法，包括如下步骤：（1）用引物P1和P2对pagA进行PCR扩增；（2）将PCR产物与PET28a载体经NcoI和XhoI酶切后通过重组酶连接、转化、测序鉴定重组子；（3）将重组子转入大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株中进行诱导培养；（4）纯化、复性得到pagA重组蛋白。本发明专利技术pagA重组蛋白的制备流程简单、产量较高、易于重复，适合大规模生产，且产物纯净。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，尤其是涉及一种paga重组蛋白及其制备方法。

技术介绍

1、炭疽毒素是炭疽杆菌的关键性致病因子，由保护性抗原(protective antigen，pa)、水肿因子(edema factor，ef)、致死因子(lethal factor，lf)三种毒素因子组成，pa与宿主细胞表面的炭疽毒素受体结合经一系列的相互作用后，lf/ef被pa输送进宿主细胞细胞质中，从而发挥各自的毒素效应。

2、lfn（致死因子氨基末端结构域）由lf氨基端的前254aa组成，不含有lf的毒性区域，与pa具有很高的亲和结合力。基于炭疽毒素的分子结构和作用机制发展的pa/lfn转运系统，具有转运外源蛋白到胞质中的作用。当pa与lfn同时存在时，pa会和细胞表面受体结合，并与lfn形成多聚体，从而将lfn转运入细胞。pa蛋白与宿主细胞表面的受体结合，形成pa-受体复合物，pa-受体复合物会通过内吞作用进入宿主细胞内部，形成一个内吞体，内吞体会与细胞内液泡融合，形成一个通道，通过该通道释放pa蛋白，释放出的pa蛋白能够与细胞膜上的受体结合，引发一个剪切活化过本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种编码pagA蛋白的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.携带权利要求1所述基因的重组质粒。

3.携带权利要求1所述基因或权利要求2所述重组质粒的重组细胞。

4.根据权利要求3所述的重组细胞，其特征在于，所述重组细胞是以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌或毕赤酵母为宿主。

5.一种重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌表达了权利要求1所述基因。

6.根据权利要求5所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌以pET-28a(+)为载体，在大肠杆菌BL21(DE3)中表达权利要求...

【技术特征摘要】

1.一种编码paga蛋白的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如seq id no.2所示。

2.携带权利要求1所述基因的重组质粒。

3.携带权利要求1所述基因或权利要求2所述重组质粒的重组细胞。

4.根据权利要求3所述的重组细胞，其特征在于，所述重组细胞是以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌或毕赤酵母为宿主。

5.一种重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌表达了权利要求1所述基因。

6.根据权利要求5所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌以pet-28a(+)为载体，在大肠杆菌bl21(de3)中表达权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋卉，杨军，刘新梅，胡文彦，余金烨，
申请(专利权)人：南京市食品药品监督检验院，
类型：发明
国别省市：