【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一种提高里氏木霉表达外源蛋白表达水平的方法。
技术介绍
1、里氏木霉作为主要的丝状真菌之一，具有强大的分泌纤维素酶的能力。工业上，经改造后的里氏木霉，其产纤维素酶的产量可达到100 g/l以上，在分泌的蛋白中，cbh1占到了总蛋白含量的60%，随着丝状真菌基因组学领域的快速发展，利用里氏木霉表达异源蛋白也越来越受到重视，目前，已成功表达和生产了多种酶制剂。
2、丝状真菌表达系统作为细胞工厂，具有高表达量、高分泌率，发酵成本低等优势，同时蛋白质分子折叠和修饰系统接近高等真核细胞等特点，为其投入工业化生产奠定了良好基础，另外米曲霉、黑曲霉和里氏木霉都是fda认证的食品安全菌株，并已长期应用于食品及食品加工业。
3、虽然里氏木霉已作为细胞工厂广泛用于重组蛋白的生产，但与内源蛋白相比，外源蛋白的生产水平往往很低。影响外源蛋白生产的因素包括宿主的防御系统，外源基因在宿主中转录、翻译及翻译后修饰及分泌途径等多个方面。
4、信号肽是广泛存在于真核和原核生物中的一条长度为3到30个氨基酸的短肽，一般位于蛋白质的n端，其中包括疏水区、信号肽的c端和n端等3部分，具有负责引导蛋白跨膜运输的功能。目前在里氏木霉中广泛使用的信号肽有外切葡聚糖酶ⅰ基因cbh1信号肽、外切葡聚糖酶ⅱ基因cbh2信号肽、内切葡聚糖酶ⅱ基因eg2信号肽。使用这些基因的信号肽是因为这些基因在里氏木霉分泌的蛋白中表达水平比较高，但是，目前没有对信号肽序列进行过系统化、规模化的筛选研究。因此，里氏木霉中广泛使用的信号肽
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种提高里氏木霉表达外源蛋白表达水平的方法。
2、根据本专利技术的提高里氏木霉表达外源蛋白表达水平的方法，所述方法包括使用里氏木霉的hfb2信号肽、cel74a信号肽以及构巢曲霉来源的果胶裂解酶a前体信号肽作为在里氏木霉中表达外源蛋白的信号肽的步骤，其中，所述hfb2信号肽的氨基酸序列如seq idno：2所示，所述cel74a信号肽的氨基酸序列如seq id no：3所示，果胶裂解酶a前体信号肽的氨基酸序列如seq id no：4所示。
3、根据本申请的提高里氏木霉表达外源蛋白表达水平的方法，其中，所述外源蛋白为黑曲霉来源的甘露聚糖酶 anman5a。
4、本专利技术通过在里氏木霉中将 anman5a的信号肽分别替换为里氏木霉的 hfb2（tr119989）信号肽、 cel74a（tr49081）信号肽以及构巢曲霉来源的果胶裂解酶a前体（an2331）信号肽，获得了 anman5a活性显著提高的转化子。转化子在mm-2%avicel-1%麸皮中培养7天后，与sus7-p1菌株相比较，sus7-s1、sus7-s2、sus7-s3菌株的 anman5a活性分别是出发菌株sus7-p1的2.76倍、3.06倍和2.81倍。
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1.一种提高里氏木霉表达外源蛋白表达水平的方法，其特征在于，所述方法包括使用里氏木霉的hfb2信号肽、cel74A信号肽以及构巢曲霉来源的果胶裂解酶A前体信号肽作为在里氏木霉中表达外源蛋白的信号肽的步骤，其中，所述hfb2信号肽的氨基酸序列如SEQID NO：2所示，所述cel74A信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，果胶裂解酶A前体信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。
2.根据权利要求1所述的提高里氏木霉表达外源蛋白表达水平的方法，其特征在于，所述外源蛋白为黑曲霉来源的甘露聚糖酶。
3.根据权利要求2所述的提高里氏木霉表达外源蛋白表达水平的方法，其特征在于，所述外源蛋白为黑曲霉来源的甘露聚糖酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
【技术特征摘要】
1.一种提高里氏木霉表达外源蛋白表达水平的方法，其特征在于，所述方法包括使用里氏木霉的hfb2信号肽、cel74a信号肽以及构巢曲霉来源的果胶裂解酶a前体信号肽作为在里氏木霉中表达外源蛋白的信号肽的步骤，其中，所述hfb2信号肽的氨基酸序列如seqid no：2所示，所述cel74a信号肽的氨基酸序列如seq id no：3所示，果胶裂解酶a前...
【专利技术属性】
技术研发人员：苏小运，纪王莉，张伟，姚斌，罗会颖，孙先花，黄火清，杨浩萌，秦星，徐欣欣，
申请(专利权)人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：
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