【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫检测，具体涉及一种用蛋白模拟抗原-纳米抗体检测黄曲霉毒素b1的方法。
技术介绍
1、酶联免疫分析技术(elisa)是一种常用于分子检测的方法，其原理是利用抗原和抗体的特异性结合识别待测分子，通过进一步的酶促反应产生的信号来定量检测溶液中特定物质。这种方法具有很强的特异性，和较高的敏感度高。酶联免疫分析技术可以用于检测大分子和小分子，包括蛋白质、抗体、激素和药物等。根据种类和变化可分为夹心法、间接法、竞争法等。
2、酶联免疫分析技术是目前黄曲霉毒素b1(afb1)大规模筛查的常用手段。传统的酶联免疫分析技术检测afb1的原理是，首先，在酶标板上包被一层特afb1和牛血清白蛋白bsa等蛋白偶联得到的抗原(afb1-bsa)，将待测样品或标准品加入到孔板中，允许样品或标准品中的afb1与固定在孔板上的抗原与特异性识别afb1的单克隆抗体竞争结合，通过洗涤，将未结合的抗体去除，加入酶标二抗识别单克隆抗体，洗涤并通过酶促反应进行检测，最后根据标准曲线和待测样品的检测数值计算样品中的afb1含量。这一传统的方法步骤繁琐，需要使用多种商业化抗体，成本高且假阳性率较高。
3、为了解决传统酶联免疫分析技术的缺陷，人们研发了一步法生物发光酶联免疫分析技术，这一技术使用在原核体系中融合表达的特异性纳米抗体-纳米荧光素酶复合物替代传统的单克隆抗体和酶标二抗，步骤简单，成本低且灵敏度更高。然而，这些方法中都需要用到afb1与其他蛋白如bsa的偶联物(afb1-bsa)作为抗原进行包被。以afb1-bsa为例，获得
技术实现思路
1、针对这一缺陷，我们专利技术了一种基于蛋白模拟抗原-纳米抗体作为核心试剂，检测afb1的方法。
2、本专利技术的第一个目的是提供绿色荧光蛋白在检测黄曲霉毒素b1中的应用。
3、优选地，所述绿色荧光蛋白为sfgfp或egfp，所述sfgfp的氨基酸序列如seq idno.1所示，所述egfp的氨基酸序列如seq id no.2所示。
4、本专利技术的第二个目的是提供一种检测黄曲霉毒素b1的方法，是以绿色荧光蛋白作为模拟抗原用于黄曲霉毒素b1的检测。
5、优选地，是以绿色荧光蛋白作为模拟抗原，与纳米荧光素酶-纳米抗体组合用于黄曲霉毒素b1的检测。
6、优选地，所述绿色荧光蛋白与纳米荧光素酶-纳米抗体特异性结合。
7、优选地，所述绿色荧光蛋白为sfgfp或egfp，所述sfgfp的氨基酸序列如seq idno.1所示，所述egfp的氨基酸序列如seq id no.2所示。
8、优选地，所述纳米荧光素酶-纳米抗体为nluc-nb28，所述nluc-nb28的氨基酸序列如seq id no.3所示。
9、优选地，包括以下步骤：以绿色荧光蛋白作为检测抗原，在包被有所述检测抗原的固相载体中加入待测样品以及纳米荧光素酶-纳米抗体，充分反应后洗涤，加入荧光底物，测定生物发光强度，根据发光强度值计算黄曲霉毒素b1的含量。
10、本专利技术的第三个目的是提供一种检测黄曲霉毒素b1的试剂盒，其是以绿色荧光蛋白作为检测抗原，以纳米荧光素酶-纳米抗体作为检测抗体。
11、本专利技术的第四个目的是提供上述的方法或上述的试剂盒在检测黄曲霉毒素b1中的应用。
12、本专利技术的优点：
13、这一方法使用蛋白质替代afb1-bsa等偶联物作为抗原进行检测，其中egfp作为模拟抗原的检测ic50值低，明显优于afb1-bsa，能够更好地满足检测要求。此外，使用的蛋白质可以通过原核表达体系进行大规模表达纯化，容易获得、成本低，能够更好地满足afb1环保、低成本和高灵敏检测的需求。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.绿色荧光蛋白在检测黄曲霉毒素B1中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述绿色荧光蛋白为sfGFP或eGFP，所述sfGFP的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述eGFP的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.一种检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，以绿色荧光蛋白作为模拟抗原用于黄曲霉毒素B1的检测。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，以绿色荧光蛋白作为模拟抗原，与纳米荧光素酶-纳米抗体组合用于黄曲霉毒素B1的检测。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述绿色荧光蛋白与纳米荧光素酶-纳米抗体特异性结合。
6.根据权利要求3-5任一所述的方法，其特征在于，所述绿色荧光蛋白为sfGFP或eGFP，所述sfGFP的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述eGFP的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
7.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述纳米荧光素酶-纳米抗体为Nluc-NB28，所述Nluc-NB28的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示
8.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：以绿色荧光蛋白作为检测抗原，在包被有所述检测抗原的固相载体中加入待测样品以及纳米荧光素酶-纳米抗体，充分反应后洗涤，加入荧光底物，测定生物发光强度，根据发光强度值计算黄曲霉毒素B1的含量。
9.一种检测黄曲霉毒素B1的试剂盒，其特征在于，以绿色荧光蛋白作为检测抗原，以纳米荧光素酶-纳米抗体作为检测抗体。
10.权利要求3所述的方法或权利要求9所述的试剂盒在检测黄曲霉毒素B1中的应用。
...【技术特征摘要】
1.绿色荧光蛋白在检测黄曲霉毒素b1中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述绿色荧光蛋白为sfgfp或egfp，所述sfgfp的氨基酸序列如seq id no.1所示，所述egfp的氨基酸序列如seq id no.2所示。
3.一种检测黄曲霉毒素b1的方法，其特征在于，以绿色荧光蛋白作为模拟抗原用于黄曲霉毒素b1的检测。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，以绿色荧光蛋白作为模拟抗原，与纳米荧光素酶-纳米抗体组合用于黄曲霉毒素b1的检测。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述绿色荧光蛋白与纳米荧光素酶-纳米抗体特异性结合。
6.根据权利要求3-5任一所述的方法，其特征在于，所述绿色荧光蛋白为sfgfp或egfp，所述sfgfp的氨基酸序列...
【专利技术属性】
技术研发人员：晏石娟，吴绍文，陈文星，李文燕，陈园园，
申请(专利权)人：广东省农业科学院农业生物基因研究中心，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。