【技术实现步骤摘要】
本申请涉及分子生物学领域，特别是涉及一种用于体外检测肝癌的试剂盒及其应用。
技术介绍
1、肝癌是常见的恶性肿瘤疾病之一，死亡率位居恶性肿瘤第二位。早期肝癌一般是指在肝癌分期中处于早期阶段的肝癌，是局限性的，没有发现肝内或远处转移，也没有淋巴结转移，具体指肝癌单个癌结节最大直径小于3cm或者最多三个癌结节合计最大直径小于3cm的原发性肝癌。早期肝癌的患者常常没有明显的肝癌相关的临床症状和体征，一旦及时发现并经过手术切除，早期肝癌患者可以获得远期生存的机会，并且术后复发率较低。当患者感受到明显不适或临床症状非常明显的时候，病情大多进入中晚期，晚期肝癌治疗效果并不理想，生存期往往只有半年到一年半。因此建立肝癌预警和早期筛查的方法，对肝癌的防治非常重要，早发现、早诊断、早治疗、早手术是防控肝癌的有效手段。
2、现有技术已公开了一些能够用于诊断肝癌的生物标志物，包括dna甲基化的标志物，但是现有生物标志物并未对肝癌进行详细的分期检测，也未说明能够对早期肝癌有较高的检测灵敏度和特异性。因此有必要开发针对诊断早期肝癌的生物标志物，提高肝癌早癌检出率，促进治疗手段对肝癌的早期干预，降低肝癌死亡率。
技术实现思路
1、基于此，本申请提供了一种用于体外检测肝癌的试剂盒，以dnajc6基因和/或bcl3基因作为生物标志物，通过检测其dna甲基化水平，评估受试者是否存在肝癌患病风险，针对早期肝癌也具有较高的灵敏度和特异性。
2、具体技术方案如下：
3、本申请提供了一种用
4、在一个实施方式中，所述生物标志物包括如seq id no：1～4所示核酸序列中的至少一个，其中，seq id no：1～2来源于dnajc6基因，seq id no：3～4来源于bcl3基因。
5、在一个实施方式中，所述生物标志物包括seq id no：1～4所示核酸序列中任意两个的组合。
6、在一个实施方式中，所述试剂包括引物对，所述引物对用于检测所述生物标志物的甲基化水平。
7、进一步地，所述引物对包括用于检测seq id no：1～4所示核酸序列中至少一个的甲基化水平的引物对，用于检测seq id no：1甲基化水平的引物对如seq id no：9～10所示；用于检测seq id no：2甲基化水平的引物对如seq id no：12～13所示；用于检测seq idno：3甲基化水平的引物对如seq id no：15～16所示；和/或，用于检测seq id no：4甲基化水平的引物对如seq id no：18～19所示。
8、在一个实施方式中，所述试剂还包括检测探针，所述检测探针用于检测所述生物标志物中至少一个序列的甲基化水平。
9、进一步地，所述检测探针包括用于检测seq id no：1～4所示核酸序列中至少一个的甲基化水平的检测探针，用于检测seq id no：1甲基化水平的检测探针如seq id no：11所示；和/或，用于检测所述seq id no：2甲基化水平的检测探针如seq id no：14所示；和/或，用于检测所述seq id no：3甲基化水平的检测探针如seq id no：17所示；和/或，用于检测所述seq id no：4甲基化水平的检测探针如seq id no：20所示。
10、在一个实施方式中，所述试剂盒还包括pcr反应试剂、甲基化转化试剂、dna提取试剂和dna纯化试剂中的一种或多种。
11、本申请还提供了所述的试剂盒在制备肝癌诊断产品中的应用。
12、在一个实施方式中，所述肝癌包括巴塞罗那临床肝癌分期的0期和a期。
13、相对于现有技术，本申请具备如下有益效果：
14、本申请通过检测dnajc6基因和bcl3基因中至少一个核酸序列的甲基化水平的改变，可以对肝癌尤其是早期肝癌进行诊断或辅助诊断，具有较高的灵敏度和特异性，可以有效地提高肝癌的早期检出率。另外，检测这些甲基化序列的试剂可以研制成肝癌的诊断产品，例如，试剂盒、诊断系统、芯片等。本申请为早期肝癌的诊断提供了新的标志物和诊断策略。
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1.一种用于体外检测肝癌的试剂盒，所述试剂盒包括用于检测样本中生物标志物的甲基化水平的试剂，所述生物标志物包括DNAJC6基因和/或BCL3基因。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述生物标志物包括SEQ ID NO：1～4所示核酸序列中任意两个的组合。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂包括引物对，所述引物对用于检测所述生物标志物的甲基化水平。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述引物对包括用于检测SEQ ID NO：1～4所示核酸序列中至少一个的甲基化水平的引物对，用于检测SEQ ID NO：1甲基化水平的引物对如SEQ ID NO：9～10所示；用于检测SEQ ID NO：2甲基化水平的引物对如SEQ ID NO：12～13所示；用于检测SEQ ID NO：3甲基化水平的引物对如SEQ ID NO：15～16所示；和/或，用于检测SEQ ID NO：4甲基化水平的引物对如SEQ ID NO：18～19所示。
6.根据权利要求4或
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述检测探针包括用于检测SEQ ID NO：1～4所示核酸序列中至少一个的甲基化水平的检测探针，用于检测SEQ ID NO：1甲基化水平的检测探针如SEQ ID NO：11所示；和/或，用于检测所述SEQ ID NO：2甲基化水平的检测探针如SEQ ID NO：14所示；和/或，用于检测所述SEQ ID NO：3甲基化水平的检测探针如SEQID NO：17所示；和/或，用于检测所述SEQ ID NO：4甲基化水平的检测探针如SEQ ID NO：20所示。
8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR反应试剂、甲基化转化试剂、DNA提取试剂和DNA纯化试剂中的一种或多种。
9.如权利要求1-8任一项所述的试剂盒在制备肝癌诊断产品中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述肝癌包括巴塞罗那临床肝癌分期的0期和A期。
...【技术特征摘要】
1.一种用于体外检测肝癌的试剂盒，所述试剂盒包括用于检测样本中生物标志物的甲基化水平的试剂，所述生物标志物包括dnajc6基因和/或bcl3基因。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述生物标志物包括seq id no：1～4所示核酸序列中任意两个的组合。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂包括引物对，所述引物对用于检测所述生物标志物的甲基化水平。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述引物对包括用于检测seq id no：1～4所示核酸序列中至少一个的甲基化水平的引物对，用于检测seq id no：1甲基化水平的引物对如seq id no：9～10所示；用于检测seq id no：2甲基化水平的引物对如seq id no：12～13所示；用于检测seq id no：3甲基化水平的引物对如seq id no：15～16所示；和/或，用于检测seq id no：4甲基化水平的引物对如seq id no：18～19所示。
6.根...
【专利技术属性】
技术研发人员：张玮，张良禄，董兰兰，李国强，王菊，
申请(专利权)人：武汉艾米森生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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