【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及细胞培养，具体为一种新型间充质干细胞培养方法。
技术介绍
1、间充质干细胞(mscs)是非造血细胞，其能够分化成特定类型的间充质或结缔组织，包括脂肪、骨、软骨、弹性、神经元、肝脏、胰腺，肌肉和纤维结缔组织。这些细胞进入的特定分化途径取决于来自机械影响和/或内源性生物活性因子(例如生长因子、细胞因子和/或由宿主组织建立的局部微环境条件)的各种影响。
2、mscs因其相对缺少免疫源性，培养技术简单，并可冷冻保存，因此已成为细胞及基因治疗研究的种子细胞，具有潜在的临床应用价值，已成为干细胞研究的热点。然而，现有间充质干细胞培养基的培养效果不理想，存在细胞的增殖速度慢、表达低和获得增殖的细胞数量有限等技术缺陷。
技术实现思路
1、(一)解决的技术问题
2、针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种新型间充质干细胞培养方法。
3、(二)技术方案
4、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种新型间充质干细胞培养方法，包括以下步骤：
5、步骤一：收集间充质干细胞；
6、步骤二：在无菌条件下将间充质干细胞悬浮于含有高浓度羊血清的培养基中；
7、步骤三：将培养基转移至低黏附力培养皿中；
8、步骤四：在37℃下将间充质干细胞培养24小时；
9、步骤五：去除非贴壁的细胞和残留的羊血清，加入无血清培养基；
10、步骤六：继续在低黏附力培养皿中培养间充质干细胞；
...【技术保护点】
1.一种新型间充质干细胞培养方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种新型间充质干细胞培养方法，其特征在于：所述间充质干细胞是由骨髓、脐带血、脐带组织、胎盘组织和脂肪组织其中一种或者多种提取而制得。
3.根据权利要求1所述的一种新型间充质干细胞培养方法，其特征在于：所述高浓度羊血清的培养基提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和生长因子。
4.根据权利要求1所述的一种新型间充质干细胞培养方法，其特征在于：所述高浓度羊血清的浓度为10％(v/v)，培养基在间充质干细胞植入之前需要进行灭菌处理，在巴氏灭菌法作用下灭菌4-6h。
5.根据权利要求1所述的一种新型间充质干细胞培养方法，其特征在于：所述无血清培养基是由基础培养基及添加组分两大部分。
6.根据权利要求5所述的一种新型间充质干细胞培养方法，其特征在于：所述基础培养基含有向细胞内转运离子的转铁蛋白和调节葡萄糖摄取量的胰岛素，以及蛋白质、清蛋白、纤维蛋白和胎球蛋白。
7.根据权利要求5所述的一种新型间充质干细胞培
8.根据权利要求1所述的一种新型间充质干细胞培养方法，其特征在于：在间充质干细胞由高浓度羊血清培养基移植到无血清培养基是逐步降低血清浓度，从10％减少到5％、3％、1％，直至无血清培养。
9.根据权利要求1所述的一种新型间充质干细胞培养方法，其特征在于：所述无血清培养基的配方为：葡萄糖、谷氨酰胺、NaHCO3、Hepes、胰岛素、转铁蛋白、孕酮、丁二胺、硒酸钠、青霉素和链霉素。
...【技术特征摘要】
1.一种新型间充质干细胞培养方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种新型间充质干细胞培养方法，其特征在于：所述间充质干细胞是由骨髓、脐带血、脐带组织、胎盘组织和脂肪组织其中一种或者多种提取而制得。
3.根据权利要求1所述的一种新型间充质干细胞培养方法，其特征在于：所述高浓度羊血清的培养基提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和生长因子。
4.根据权利要求1所述的一种新型间充质干细胞培养方法，其特征在于：所述高浓度羊血清的浓度为10％(v/v)，培养基在间充质干细胞植入之前需要进行灭菌处理，在巴氏灭菌法作用下灭菌4-6h。
5.根据权利要求1所述的一种新型间充质干细胞培养方法，其特征在于：所述无血清培养基是由基础培养基及添加组分两大部分。
【专利技术属性】
技术研发人员：郝建华，
申请(专利权)人：北京北美抗衰老医学研究院，
类型：发明
国别省市：
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