一种基于口蹄疫病毒2C解旋酶的抑制剂筛选方法建立和应用技术

本发明专利技术是一种口蹄疫病毒2C解旋酶抑制剂的荧光偏振高通量筛选方法。该方法通过体外检测荧光能量共振转移(FRET)信号变化来筛选抑制剂分子，以含有荧光基团HEX和猝灭基团BHQ1的ssDNA退火产物作2C的底物，通过调节金属离子种类及蛋白、底物、ATP、Mg<supgt;2+</supgt;和捕获链浓度，利用多功能酶标仪检测发光荧光值，建立最优2C解旋dsDNA试验方案，通过加入小分子化合物检测2C对dsDNA解旋荧光值差异，计算化合物库对2C解旋酶的抑制率，筛选出抑制率较高的化合物。本发明专利技术检测快、易操作、灵敏高且具有高通量效果，将有效筛选口蹄疫病毒药物的先导化合物提供方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及抗病毒，特别涉及一种高通量口蹄疫病毒的2c解旋酶抑制剂的药物筛选方法建立、以及其初步应用。

技术介绍

1、口蹄疫（foot-and-mouth disease，fmd）是由口蹄疫病毒（foot-and-mouthdisease virus，fmdv）引起偶蹄类动物的高度传染性疾病，在家养猪、牛、样等牲畜和野生物种中广泛流行，可引起急性和长期无症状持续感染。fmdv属于口疮病毒属，小核糖核酸病毒科，是约有8 500 nt组成的单股正链小核糖核酸病毒，有a、o、c、asia-1、sat 1、sat 2和sat 3七个血清型，每个血清型包含多个亚型，且一种血清型病毒疫苗对动物难以有较好的交叉保护。不仅对国内外畜牧业产生较大危害，而且深度影响国际经济贸易。

2、小核糖核酸病毒中2c被认为是病毒复制复合物(replication complex,rc)中一种锚定在细胞膜较复杂且最大的非结构蛋白。小核糖核酸病毒2c具有保守性，已解析中甲型肝炎病毒(hepatitis a virus, hav)、柯萨奇病毒(coxsackievirus b3,本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于FMDV 2C解旋酶活性，建立的FRET高通量小分子化合物筛选方法和应用。

2.根据权利要求1所述，其特征在于，Mg2+是FMDV 2C具有解旋酶活性的基础。

3.根据权利要求1所述，其特征在于，低浓度的ATP可以促进FMDV 2C的解旋酶活性。

4.根据权利要求1所述，其特征在于，增加捕获链浓度会的抑制FMDV 2C解旋酶效率。

5.根据权利要求1所述，其特征在于，建立并优化后的FRET方法，可以筛选FMDV 2C解旋酶抑制剂。

【技术特征摘要】

1.一种基于fmdv 2c解旋酶活性，建立的fret高通量小分子化合物筛选方法和应用。

2.根据权利要求1所述，其特征在于，mg2+是fmdv 2c具有解旋酶活性的基础。

3.根据权利要求1所述，其特征在于，低浓度的atp可...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋云峰，周赛赛，刘南坤，田杨，张金花，李振，袁红根，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：